胃癌组织中再生基因、转录辅助因子退变样蛋白表达与淋巴结转移的相关性

练火军 魏 颖 杨 静

1.江西省上饶市人民医院消化内科，江西上饶 334000；2.江西省上饶市人民医院病理科，江西上饶 334000

胃癌是常见恶性肿瘤之一，发病率与病死率均居高不下，特别是在东亚发展中国家其发病率攀升趋势明显，现阶段胃癌已经成为全球重要卫生问题[1]。该病起病隐匿，患病初期，因个体重视度不高，导致疾病诊出时，往往已处于中晚期，且存在合并转移、侵袭的可能，治疗欠及时，患者预后往往不达预期[2]。转移与侵袭是导致患者不良预后的主要原因。随着医学领域对胃癌疾病进展分子水平的不断深入探索，发现诸多蛋白如转录辅助因子退变样蛋白（vestigial-like family member 4，VGLL4） 及促生长因子如再生基因（regeneration gene 1α，REG1α）在胃癌的发生、进展过程中有着举足轻重的地位[3]。本研究旨在通过观察胃癌组织中REG1α、VGLL4 表达及淋巴结转移情况，分析胃癌组织中REG1α、VGLL4 表达与淋巴结转移之间的相关性，以指导临床治疗，旨在改善患者预后。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2019年10月至2020年10月上饶市人民医院收治的82 例胃癌患者作为研究对象，根据患者是否合并淋巴结转移分为转移组（55 例）与未转移组（27 例）。转移组中，男30 例，女25 例；年龄34～82 岁，平均（60.65±9.46）岁；贲门肿瘤34 例；非贲门肿瘤21 例；分化程度[5]：低分化38 例，中高分化17例；淋巴结转移41 例；临床分期[6]：Ⅰ～Ⅱ期26 例，Ⅲ～Ⅳ期29 例。未转移组中，男17 例，女10 例；年龄33～82 岁，平均（59.45±8.52）岁；贲门肿瘤18 例，非贲门肿瘤9 例；分化程度：低分化19 例，中高分化8 例；淋巴结转移20 例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期12 例，Ⅲ～Ⅳ期15 例。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。纳入标准：均符合胃癌相关诊断标准[4]；临床各方面无丢失和缺损；在本院行胃癌根治术者；未合并其他脏器严重疾病。排除标准：合并免疫、血液系统异障碍者；合并神经功能异常者；合并胃部分切除术病史者；凝血功能差。

1.2 方法

主要试剂：鼠抗人REG1α 单克隆抗体，购自美国Neomarkers 公司；兔抗人VGLL4 单克隆抗体，购自武汉博士德生物技术有限公司。链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（streptomyces avidin peroxidase linkage，SP）试剂盒、胰蛋白酶及二氨基联苯氨酶底物显色试剂盒均购自福州迈新公司。标本准备：各组织标本均脱水，经10%甲醛固定，二甲苯透明；常规石蜡包埋，5 μm 连续厚切片。然后根据SP 免疫组化染色法对REG1α、VGLL4 蛋白进行检测，检测过程严格按照说明进行。一抗阴性对照使用磷酸盐缓冲液进行代替。

1.3 观察指标及评价标准

比较两组REG1α、VGLL4 阳性表达率，并分析上述蛋白表达与淋巴结转移的相关性。REG1α、VGLL4表达结果判断[7]：根据染色强度、阳性细胞百分比判定。①染色强度：阳性标准为在细胞核或细胞浆内出血棕黄色或褐色颗粒。无色记0 分，灰黄色记1 分，金黄色记2 分，棕褐色记3 分。②阳性细胞率计算：从每张切片中随机选取5 个高倍视野并计算、观察阳性细胞数，阳性细胞率=阳性细胞数/观察细胞数×100%。0 分：无阳性细胞，1 分：阳性细胞<10%，2 分：阳性细胞10%～50%，3 分：阳性细胞＞50%～75%，4 分：阳性细胞>75%。总积分：上述2 项评分的乘积。阳性：总积分>4 分。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；采用Pearson 相关性分析对REG1、VGLL4 与淋巴结转移的相关性进行分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组REG1α、VGLL4 表达情况的比较

转移组REG1α 阳性表达率高于未转移组，VGLL4 阳性表达率低于未转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 两组REG1α、VGLL4 表达情况的比较[n（%）]

2.2 REG1α、VGLL4 与淋巴结转移的相关性

Pearson相关性分析结果显示，REG1α 表达与胃癌淋巴结转移呈正相关，VGLL4 表达与胃癌淋巴结转移呈负相关（P＜0.05）（表2）。

表2 REG1α、VGLL4 与淋巴结转移的相关性

3 讨论

胃癌是人类第二位常见的恶性肿瘤，其发病率仅次于肺癌，70%以上的胃癌患者确诊时已是中晚期，预后较差[8]。胃癌主要是遗传、环境、社会等多种因素共同作用的结果，而转移与侵袭是导致患者不良预后的主要原因。胃癌淋巴结转移过程是一个多因素、多步骤作用的结果，诸多研究考虑在此过程中，是否可通过调控某种分子的表达，来延缓或者阻断淋巴癌转移，继而控制病情进展，为治疗争取时间窗口，以改善患者预后[9-10]。

REG1α 是新发现的生长因子，主要存在并集体于胃黏膜中，正常情况下表达低，只有在胃黏膜遭受各种理化因子损害时表达，具有修复黏膜的作用[11]。周群燕等[12]发现REG1α 的表达在正常胃黏膜、萎缩胃黏膜及胃癌组织中出现进行性加重现象，表明REG1α 极大可能在癌变过程中发挥举足轻重的作用，但具体机制尚不清楚。国外报道指出，REG1α 在低分化胃癌中呈高表达，而高表达REG1α 者预后较差[13]。但目前有关在胃癌组织中上调的机制尚未明确，但认为可能与胃泌素、白细胞介素-6、淋巴结转移等有关[14]。VGLL4 是新近发现的抑癌基因，诸多研究显示，VGLL4 在多种信号通路中发挥重要作用[15-17]。且VGLL4 可通过特殊通路竞争性阻断某种信号通路，继而在细胞增殖、分化、转移及上皮-间质转化等方面产生作用，最终达到控制肿瘤生长的目的。韩新影等[18]指出，VGLL4 在抑制胃癌疾病进展中具有重要作用。本研究转移组REG1α 阳性表达率高于未转移组，VGLL4 阳性表达率低于未转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）；Pearson 相关分析结果显示，REG1α 表达与胃癌淋巴结转移呈正相关，VGLL4 表达与胃癌淋巴结转移呈负相关（P＜0.05），提示胃癌组织中REG1α 表达增高、VGLL4 表达下降可能提示胃癌发生转移。然而本研究样本量偏少，实验结果可能存在偏倚，后期有待进一步扩大样本深入研究。

综上所述，REG1α、VGLL4 可作为评估胃癌患者是否发生淋巴结转移的有效指标，且其表达情况与胃癌淋巴结转移存在显著相关性。