GC 法测定恩替卡韦残留溶剂

杨昌华，胡文胜，覃 琴，邓春雷

（湖南师范大学医学院，长沙 410013）

恩替卡韦［1］，2-氨基-9-［（1S，3S，4S）-4-羟基-3-羟甲基-2-亚甲基环戊基］-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮-水合物，临床治疗慢性乙肝，化学结构式为：

本文拟用GC 法［2～4］测定其中的有机溶剂甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃和环己烷。

1 材料与方法

1.1 仪器 Agilent，7890B 气相色谱仪，FID 检测器，Agilent，7697A 顶空进样器；MS205DU 梅特勒电子分析天平。

1.2 试剂 恩替卡韦，嘉实（湖南）医药有限公司，批号18112601，18112602，18112603。甲醇（西格玛奥德里奇贸易有限公司，批号：WXBC2771V），乙醇（DIKMA，批号R141483），二氯甲烷（国药集团化学试剂有限公司，批号：20180612），乙酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司，批号：20171128），四氢呋喃（GRACE，批号：6056785），环己烷（赛默飞世尔科技有限公司，批号：173029），二甲基亚砜（DMSO 阿拉丁，A1830084）。

1.3 方法

1.3.1 色谱方法 色谱柱为DB-624（30m×0.53mm，3μm）毛细管柱；柱温40 ℃保持15min，10 ℃/min 至180℃保持5min；进样口温度：160℃；检测器温度：220℃；载气：氮气；流速：2.0mL/min；分流比2：1；顶空参数：顶空瓶温度：90℃，顶空瓶保温时间：45min，进样循环时间：35min，LOOP 管（定量环）温度：105℃，TR LINE（传输温度）：115℃，加压时间：0.50min；Loop EQ Time（定量环平衡时间）：0.05min，Loop Fill Time（定量环定量时间）：0.20min。

2 结果

2.1 专属性 稀释剂二甲基亚砜保留时间远大于恩替卡韦与残留溶剂（甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷）；残留溶剂间及与恩替卡韦无干扰。

2.2 准确度 精密称取约60mg 甲醇、100mg 乙醇、12mg 二氯甲烷、100mg 乙酸乙酯、14.4mg 四氢呋喃和77.6mg 环己烷置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀释至刻度，混匀。精密移取10mL 置20mL 量瓶，DMSO 稀释至刻度，摇匀。精密量取5mL 置20mL 顶空瓶，测定，结果见表1。

2.3 线性和范围 精密称取约60mg 甲醇、100mg 乙醇、12mg 二氯甲烷、100mg 乙酸乙酯、14.4mg 四氢呋喃和77.6mg 环己烷置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀释至刻度，混匀；精密移取2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL、12.0mL 分置100mL 量瓶，分别加DMSO 稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL 置顶空瓶，进样3 次，测定；以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标回归，结果如表2。

表2 线性范围与回归方程

2.4 精密度 称取约0.1g 恩替卡韦共6 份，精密称定，分置20mL 量瓶，精密移取10mL 线性储备液，DMSO 溶解并稀释至刻度，摇匀，为对照液。精密量取5mL 上述各溶液至20mL 顶空瓶，测定；不同分析人员、不同日期测定得中间精密度，结果见表3。

表3 重复性与中间精密度

2.5 耐用性 精密量取对照品溶液5mL 置20mL 顶空瓶，改变流速（1.8mL/min、2.0mL/min、2.2mL/min）、柱温（38℃、40℃、42℃）、顶空瓶温度（88℃、90℃、92℃）、顶空瓶保温时间（43min、45min、47min），测定，保留时间RSD%（n=3）见表4。最低分离度2.3。

表4 耐用性结果

2.6 溶液稳定性 取2.2 配置的对照品溶液，室温下放置0h、6h、12h、18h、24h，测定回收率，结果见表5。

表5 溶液稳定性（RSD%）

2.7 系统适用性试验 精密量取各对照品溶液5mL 分置20mL 顶空瓶，依1.3.1 色谱方法测定，结果如表6。

表6 系统适用性试验结果

2.8 供试品测定 精密称取不同批号的恩替卡韦约0.1g 3 份，置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5mL 至20mL 顶空瓶，测定。

表7 供试品测定结果

3 讨论

3.1 样品溶剂的选择 有机溶剂N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜（DMSO）都有较高极性和沸点，常用于GC 法测定有机溶剂残留量［6］。恩替卡韦生产中使用的有机溶剂较多，DMSO 沸点更高，有“万能溶剂”之称，试验表明其对各种残留溶剂的测定无干扰，故选作溶剂。

3.2 色谱柱的选择 甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、环己烷的极性差异较大，筛选了极性色谱柱HP-WAX、中等极性色谱柱DB-624 和非极性色谱柱DB-1，乙醇和二氯甲烷在极性色谱柱HP-WAX中达不到基线分离，而中极性色谱柱DB-624 的分离效果优于非极性色谱柱DB-1，因此选择DB-624 色谱柱。

色谱柱为DB-624（30m×0.53mm，3μm）毛细管柱，柱温40℃保持15min，10℃/min 升至180℃保持5min；进样口温度：160℃；检测器温度：220℃；载气：氮气；流速：5.0mL/min 分流进样，分流比：2：1；顶空瓶温度：90℃；顶空瓶保温时间：45min；进样循环时间：35min；LOOP 管温度：105℃（定量环）TRLINE 温度：115℃；加压时间：0.50minLoop EQ Time：0.05min；Loop Fill Time：0.20min。可以专属、灵敏、准确地测定恩替卡韦中残留的有机溶剂。