不同炮制方法对川泽泻中23-乙酰泽泻醇B的影响

蔡沓栗 林艳萍

1.福州市皮肤病防治院，福建 福州 350025；2.福建省老年医院，福建 福州 350009

泽泻是常用中药，《神农本草经》中列为上品[1]，具有利水渗湿，泄热，化浊降脂的功效，用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，高脂血症[2]。泽泻的炮制加工主体分为生制、麸炒、盐制等。三者在外观性状上差异主要表现在泽泻厚片外表皮黄白色或淡黄棕色，切面黄白色；麸炒泽泻厚片外表皮淡黄棕色，切面黄棕色；盐泽泻厚片外表皮淡黄棕色，切面深黄棕色，味淡淡咸味，微甘。实验[3]证明，泽泻经加工炮制后，有利于有效成分的煎出。但药理研究[4]表明，生品与麸炒、土制品均有一定的利尿作用，而盐泽泻几乎不见利尿作用。2020年版《中国药典》在之前的基础上，对泽泻的相关规定作了改变，但2010年版、2015年版和2020年版均对泽泻23-乙酰泽泻醇B的含量测定作了相关规定[5-6]。因此，通过HPLC对三种不同川泽泻(厚片)23-乙酰泽泻醇B的含量进行测定并分析，并对三者的性状进行评价。

1 仪器与材料

1.1 实验材料 样品于2015年购自于四川成都荷花池药材市场，经福建中医药大学中药鉴定教研室杨成梓教授鉴定为泽泻科泽泻Alismaplantago-aquaticaLinn.的干燥块茎。

样品包括三种,A：泽泻厚片；B：麸炒泽泻厚片；C：盐泽泻厚片。见图1。

1.2 仪器 LC-20AT高效液相色谱分析仪(日本岛津公司)；KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；电子分析天平(奥豪斯仪器(上海)有限公司)；电子分析天平(METTLER TOLEDO,Made in Switzerland)；DFY-C-500快速开盖万能高速粉碎机(大德中药机械有限公司)。

A.泽泻厚片；B.麸炒泽泻厚片；C.盐泽泻厚片图1 三种规格川泽泻的外观拍照图

1.3 试剂 23-乙酰泽泻醇B(ID：OLN7-TT2S，中国食品药品检定研究院，纯度大于99.5%)，乙腈(批号：20140421，国药集团化学试剂有限公司)，超纯水。

2 方法及结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Platisil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-水(73∶27)为流动相进行等度洗脱；流速为1 mL·min-1；检测波长为208 nm；室温条件下，测理论板数按23-乙酰泽泻醇B峰计算应不低于3000；柱温30 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白溶液的制备 用乙腈至50 mL量瓶中，定容至刻度，待用。空白HPLC图谱见图2。

图2 空白对照品的HPLC图谱

2.2.2 标准溶液的制备 精密称取23-乙酰泽泻醇B 1.07 mg至50 mL量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成21.4 μg·mL-1标准溶液。标准品HPLC图谱见图3。

2.2.3 供试品溶液的制备 取上述三种商品于 40 ℃ 烘干至恒重，粉碎，过100目筛，精密称定约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

图3 对照品23-乙酰泽泻醇B的HPLC图谱

2.3 线性关系考察 精密吸取3.2.2项下标准溶液5、10、20、30、50、70 μL，依次注入液相色谱仪，按2.1项色谱条件测定峰面积。以对照品(23-乙酰泽泻醇B)进样量(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得对照品(23-乙酰泽泻醇B)回归方程。结果表明，回归方程：Y= 20738X-3348.5(r=0.9999)，在0.107～1.498 μg范围内，线性关系良好。

2.4 精密度试验 分别连续精密吸取同一对照品溶液5次，各20 μL，在2.1项色谱条件下分别注入高效液相色谱仪，测定23-乙酰泽泻醇B峰面积，计算峰面积的RSD为1.15 %，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 分别精密称取同一样品粉末(过100目筛)5 份，按2.2.3项方法处理，进样20 μL，按2.1项色谱条件测定，测定23-乙酰泽泻醇B峰面积，计算其含量，RSD 为1.57%，表明重复性良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件在0、2、8、16、24 h精密吸取20 μL分别注入高效液相色谱仪，测定23-乙酰泽泻醇B 峰面积的RSD为0.18%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 加样回收率试验 精密称取6份已知含量的泽泻粉末(过100目筛)，每份约0.1 g，分别精密加入等量的对照品，按2.1项色谱条件测定含量。测得23-乙酰泽泻醇B平均回收率为105.84%，RSD 为2.01%。见表1。

2.8 样品测定 分别取各样品，按2.2.3项制备方法制备，进样20 μL，按2.1项色谱条件测定，测得峰面积并代入回归方程计算含量，测定结果见表2，见图4～6。

表1 加样回收率实验结果表

表2 含量测定实验结果表

图4 泽泻厚片样品的HPLC图谱

图5 麸炒泽泻厚片样品的HPLC图谱

图6 盐泽泻厚片样品的HPLC图谱

3 讨论

3.1 实验 通过HPLC对川泽泻药材中23-乙酰泽泻醇B进行测定，实验结果表明测定结果稳定，分离度良好，能得到理想的测定结果。其HPLC速度快，灵敏度高，重复性高，高效液相柱可反复使用，样品使用量少，测定结果清晰，操作简便。

3.2 这三种川泽泻(厚片)的炮制品外观有明显区别 泽泻厚片，呈椭圆形或椭圆形厚片，外表皮黄白色或淡黄棕色，偶见细小突起的须根痕。切面黄白色，粉性有多数细孔。经麸炒的泽泻厚片，切面黄棕色。盐泽泻厚片切面较经麸炒的厚片切面颜色更深，为深黄棕色。市场上买家可轻易分辨选择购买。

3.3 三种不同规格泽泻商品含量比较 根据实验结果表明，23-乙酰泽泻醇B与其峰面积在0.107～1.498 μg范围内呈良好线性关系，线性方程为Y=20738X-3348.5，(r=0.9999)。根据线性方程对相同重量的泽泻厚片、麸炒的泽泻厚片和盐炙的泽泻厚片进行含量计算，结果显示三种川泽泻中23-乙酰泽泻醇B的含量有所差异。其中，添加盐炙的泽泻厚片其23-乙酰泽泻醇B含量最高，经麸炒的厚片次之，泽泻厚片相对较低。

泽泻现代的炮制加工品主要包括生泽泻、清炒泽泻、麸炒泽泻及盐炙泽泻等。最常用的炮制品为麸炒泽泻和盐泽泻，其中泽泻生品以利水渗湿为主，麸炒泽泻以渗湿和脾、降浊生清为主，盐炙泽泻引药下行，增强滋阴泻热及利尿作用。研究[7]发现炮制泽泻(经麸炒的厚片，添加盐水炒制的厚片)中23-乙酰泽泻醇B含量明显高于生制泽泻(厚片)。曹柳等[8]采用HPLC研究清炒、麸炒、盐炙对泽泻中泽泻醇、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B含量的影响，与生泽泻比较，清炒品种上述4种成分含量均降低，麸炒品均增加，盐炙品除23-乙酰泽泻醇B外均有增加。郑云枫等[9]发现，盐炙泽泻药材中的三萜类主成分23-乙酰泽泻醇B发生两种转变：一是氧环开裂、重排，生成24-乙酰泽泻醇A，再进一步脱乙酰基转化成泽泻醇A；另一种变化是：先脱乙酰基生成泽泻醇B，继而氧环开裂转化成泽泻醇A。可见泽泻经盐炒、麸炒炮制后，其23-乙酰泽泻醇B较生制品有不同程度的增加。