栀榆洗剂质量标准研究

吕锁忠 朱卫萍 吴安飞 曹昌娥 邓 祎 鲍云惠

云南省曲靖市中医医院,云南 曲靖 655000

栀榆洗剂是根据曲靖市中医医院皮肤科诊治寻常型银屑病经验处方开发的院内制剂，组方中包含地榆、栀子、苦参、防风等。作为院内制剂研究开发过程中，对方中主要药味展开研究，为有效控制栀榆洗剂的质量提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(岛津，LC-2040C)；电子天平(岛津，AP225WD，0.1mg/0.01mg)；超声波清洗器(南京垒君达，UP250YHE)

1.2 试剂 试药苦参对照药材(121019-201407)、防风对照药材(120947-201409)、栀子苷(110749-201919，供含量测定用，含量97.1%)均来源于中国食品药品检定研究院；甲醇[霍尼韦尔(上海)有限公司，Lot：T8LG1H]、乙腈(霍尼韦尔(上海)有限公司，Lot：T84A1H)均为色谱纯；水为纯化水。

1.3 供试品 栀榆洗剂3批样品(配制批次分别为S2020002、S2020003、S2020004)及阴性样品由曲靖市中医医院制剂室提供。

2 方法与结果

2.1 苦参TLC鉴别方法

2.1.1 供试品溶液 制备取栀榆洗剂3批样品各30 mL，分别浓缩至流浸膏状，加1 mL浓氨溶液,30 mL三氯甲烷搅拌，30 min超声提取后过滤，取三氯甲烷液蒸干为残渣，加三氯甲烷1 mL使溶解，制备为供试品溶液。

2.1.2 阴性样品溶液 制备按处方比例取除苦参的栀榆洗剂所有中药饮片粉碎混合均匀，取10 g，加2 mL浓氨溶液，60 mL三氯甲烷搅拌，30 min超声提取后过滤，取三氯甲烷液，蒸干为残渣，加0.5 mL三氯甲烷使溶解为阴性对照品供试溶液。

2.1.3 对照药材溶液 制备取1 g苦参标准对照药材，加3 mL浓氨溶液，80 mL三氯甲烷，30 min 超声处理后过滤，滤液蒸成残渣，加1 mL三氯甲烷溶解为对照药材溶液。

2.1.4 鉴别方法 吸取各5～10 μL供试品溶液和阴性样品溶液、1～3 μL对照药材溶液，点于同一硅胶G板上，展开剂为三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液(5∶0.6∶0.3)放置10 ℃以下的下层溶液，展开，喷以碘化铋钾溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无干扰，如图1所示。

1 2 3 4 5 1～3.供试品溶液;4.苦参对照药材溶液;5.阴性样品中溶液图1 苦参TLC鉴别

2.2 防风TLC鉴别方法

2.2.1 供试品溶液 制备取栀榆洗剂三批样品各30 mL，分别蒸干，残渣加20 mL甲醇，30 min超声提取后过滤，滤液蒸干成残渣，加2 mL乙醇使溶解为供试品溶液。

2.2.2 阴性样品溶液 制备按处方比例取除防风的栀榆洗剂所有饮片粉碎混合均匀，取5 g粉末，20 mL加甲醇，30 min超声提取后过滤，滤液蒸干为残渣，加2 mL乙醇使溶解为阴性对照药材溶液。

2.2.3 对照药材溶液 制备取2 g防风对照药材粉末，加40 mL甲醇，30 min超声提取后过滤，滤液蒸干为残渣，加3 mL乙醇使溶解为防风对照药材溶液。

2.2.4 鉴别方法 吸取各5～10 μL供试品溶液和阴性对照溶液、2～5 μL对照药材溶液，分别点于同一硅胶GF254板上，展开剂为三氯甲烷-甲醇(4∶1)溶液，按《中国药典》薄层色谱法试验，喷以10%硫酸乙醇溶液，于365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品溶液无干扰，如图2所示。

1～3.供试品溶液;4.防风对照药材溶液;5.阴性样品溶液图2 防风TLC鉴别

2.3 含量测定方法

2.3.1 色谱条件 色谱柱：GL Science C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)，柱温：40 ℃，流动相：0.1%磷酸-乙腈(90∶10)，流速：1.0 mL/min；检测波长：238 nm，理论板数按栀子苷峰计算应不低于3000；进样量10 μL。

2.3.2 溶液制备

2.3.2.1 供试品溶液的制备 取栀榆洗剂供试品，混匀，精密量取10 mL定量至50 mL容量瓶中，混匀过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.2.2 对照品溶液的制备 取栀子苷标准对照品8.43 mg，精密称定，加甲醇溶液定量至10 mL量瓶中，得0.8186 mg/mL的栀子苷标准对照品溶液。

2.3.2.3 阴性样品溶液的制备 按栀榆洗剂处方比例，称取除栀子外其它全部饮片，照栀榆洗剂供试品生产工艺条件，制备缺栀子阴性对照样品，再照供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。

2.3.3 线性关系 考察取栀子苷对照品溶液适量，精密量取，分别制成含栀子苷8.185、 16.33、 40.84、 81.67、408.4 μg/mL 的系列对照品溶液，照“2.3.1”项下色谱条件实验，横坐标(X)为对照品浓度，纵坐标(Y)为峰面积，结果：在8.185～408.4 μg/mL范围内栀子苷浓度具有良好线性关系r2=0.9997。

图3 标准曲线图

2.3.4 精密度考察 取同一栀子苷对照品溶液(含栀子苷40.92 μg/mL)，精密量取，在“2.3.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值。RSD为0.6%，表明仪器的精密度良好。结果见表1。

2.3.5 重复性考察 取栀榆洗剂(批号S2020004)6份，按“2.3.2.1”供试品制备方法处理，记录峰面积，计算栀子苷含量，结果每1 mL样品中的平均栀子苷含量为0.08229 mg，RSD为1.8%，表明本方法的重复性良好。结果见表2。

2.3.6 稳定性考察 取栀榆洗剂(批号S2019004)供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h按“2.3.1”项下色谱条件进行分析，记录峰面积。结果栀子苷的RSD为0.26%。表明在24 h内供试品溶液质量稳定。结果见表3。

2.3.7 加样回收率试验 取已知含量的同一批栀榆洗剂(批号S2020004)5.00 mL共6份，精密量取，再分别精密加入浓度为0.0409 mg/mL的对照品溶液5.0 mL，按“2.3.2.1”项下的方法处理，制备供试液，分别测定，计算回收率，结果见表4。

表1 精密度考察结果

表2 重复性考察结果 (n=6)

表3 稳定性试验测定结果 (n=6 )

表4 加样回收率试验结果 (n=6)

2.3.8 专属性试验 取阴性对照样品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样分析，色谱图如图3所示。结果色谱图中在栀子苷相应出峰位置未出现干扰峰。

A.栀子苷标准对照品图;B.阴性样品图;C.供试品图图4 高效液相色谱图

2.3.9 样品测定 取不同批次的供试品3批，精密量取，分别制备成供试品溶液，制备方法见“2.3.2.1 ”项下，测定色谱条件见“2.3.1”项下。按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算栀子苷含量。通过试验确定3批栀榆洗剂中每1 mL栀榆洗剂中含栀子以栀子苷计(C17H24O10)计，结果见表5。

结果分析：通过对栀榆洗剂中栀子苷的含量测定的方法学研究，可以看出采用的高效液相色谱法具有强专属性、高灵敏度、重现性好、高准确度的特点。

3 讨论与结论

栀榆洗剂是由11味中药饮片以水为溶媒经渗漉、煎煮提取制成的医院制剂，成份复杂。经系统性预试验考察表明该制剂主要含有生物碱、黄酮类成分。

表5 样品含量测定结果 (n=3)

定性试验结果仅有苦参和防风成分供试品与对照品在相应位置上主斑点显色清晰、阴性对照无干扰的。在此基础上对有苦参、防风薄层色谱方法的展开系统、供试品提取和前处理方法、点样方式和点样量进行筛选优化，再对方法的耐用性进行考察。如苦参，参考文献[1-2]分别用乙酸乙酯、甲醇、盐酸加乙酸乙酯、浓氨加三氯甲烷共4种方法进行前处理提取，结果以三氯甲烷提取实验结果最理想。防风参考文献[3-4]分别用丙酮、乙酸乙酯、水饱和正丁醇、甲醇、乙醇对供试品蒸干残渣进行提取，实验结果以甲醇提取效果最好。最后根据实验综合结果确认了本次的实验方法。

定量检测选择栀子苷作为含量控制指标。栀榆洗剂中君药经查询文献没有特征性成分，栀子做为处方中的臣药，其有效成份栀子苷[5]易溶于水，与栀榆洗剂以水为溶媒提取的工艺相适应，故以栀子苷为控制栀榆洗剂的含量指标进行考察。通过方法学研究，结果表明，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%磷酸-乙腈(90∶10)为流动相，检测波长为238 nm。结果栀子苷在浓度范围内呈现良好的线性关系，精密度、重复性、稳定性、平均加样回收试验结果符合要求。

栀榆洗剂的薄层色谱鉴别方法和含量测定方法专属性强、简单易行、节约时间和成本，可用于栀榆洗剂的质量控制。