HPLC法测定少腹逐瘀丸中阿魏酸含量

黄云先 刘云怀

云南省丽江市食品药品检验所，云南 丽江 674100

少腹逐瘀丸由当归、蒲黄、五灵脂、赤芍、小茴香(盐炒)、延胡索(醋制)、没药(炒)、川芎、肉桂、炮姜10味药组成，具有温经活血、散寒止痛的功效。用于寒凝血瘀所致的月经后期、痛经、产后腹痛，症见月经后错、行经小腹冷痛、经血紫暗、有血块、产后小腹疼痛喜热、拒按。本品收载于《中国药典》2020年版一部中，标准中仅有显微鉴别及芍药苷的薄层色谱鉴别，没有制定含量测定方法，不能有效地控制药品质量。笔者采用HPLC法测定当归中阿魏酸的含量质控方法，结果令人满意，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 安捷伦1260型高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)；HPLC Column Hubble C18柱(250 mm×4.6 mm，OmniGene LLC)；德国塞多利斯BT224S电子分析天平；梅特勒MS205DU电子分析天平；Purelab Flex 超纯水机。

1.2 材料 阿魏酸(C10H10O4)对照品适量(批号：110773-201614，中国食品药品检定研究院)；少腹逐瘀丸(批号：191208，200708，201007，191114，国内某药厂)乙腈、甲醇(色谱纯，美国塞默飞世尔科技(中国)有限公司)； 磷酸(分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司)；水(实验室自制UP水，Ω=18.3)。

2 方法与结果

2.1 色谱柱与系统适用性试验 色谱柱：Hubble C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)为流动相；检测波长为 316 nm；柱温35 ℃。流速为1.0 mL/min，进样量 10 μL。色谱图如图1所示。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 阿魏酸(C10H10O4)对照品适量，加70%甲醇稀释至刻度，制成每1 mL含43.84 μg的溶液，作为对照品液，即得。

2.2.2 样品溶液的制备 取少腹逐瘀丸约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇20 mL，称定重量。超声处理30 min，放冷，再次称定重量，用70%甲醇补足减失重量。滤过，滤液作为样品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按本品的已知处方制备缺少当归的模拟样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。

2.3 专属性试验 将阿魏酸对照品溶液、样品品溶液和阴性样品溶液分别注入液相色谱仪，进行测定。结果样品溶液中均检测出待测成分，而阴性样品溶液无干扰。

2.4 线性关系 取阿魏酸(C10H10O4)对照品 10.96 mg，精密称定，加甲醇制成每1 mL含21.92、43.84、87.68、131.52、175.36、219.2 μg 的一系列的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定其峰面积，以对照品的浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，按外标法进行线性回归，线性方程为y=42.65537x-149.68159，r=0.99969。说明阿魏酸在21.92～219.2 μg/mL 浓度范围内线性良好。

2.5 精密度试验 取43.84 μg/mL阿魏酸对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下，重复进样6次，测定其峰面积：1122.16、1124.88、1131.24、1148.32、1150.41、1133.70。计算秋阿魏酸峰面积RSD=1.04%(n=6)，表明该系统的精密度良好。

2.6 重复性试验 取批号200708的少腹逐瘀丸样品6份，按“2.2.2”方法制备供试品溶液，进样量10 μL，照上述色谱条件进行测定，测得阿魏酸峰面积RSD=1.1%。表明方法重复性较好。

A

B

C

2.7 稳定性试验 取同一份少腹逐瘀丸供试品溶液，按含量测定方法分别在配制0、2、4、8、16、24 h后进样，测得峰面积RSD=0.8%。表明供试品溶液在 24 h 内稳定。

2.8 回收率试验 取批号200708的少腹逐瘀丸样品9份，每份约2 g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入阿魏酸对照品43.84、87.68、131.52 μg/mL 3种水平，各3份按“2.2.2”方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，计算少腹逐瘀丸中阿魏酸的回收率分别为97.7%、99.8%、102.3%、98.4%、99.7%、101.5%、99.6%、102.9%、99.6%；RSD=1.74%(n=9)。

2.9 样品含量测定 取少腹逐瘀丸四批，一式两份，按“2.2.2”方法制备的样品溶液，分别进样15 uL进行测定，按外标法计算少腹逐瘀丸中阿魏酸(C10H10O4)的含量。结果见表1及图2所示。

表1 四批少腹逐瘀丸的含量测定结果 (μg/mL，n=2)

3 讨论

在阿魏酸研究中，根据阿魏酸的理化性质和有关参考文献，分别用了水；30%、50%、70%甲醇和乙醇；纯甲醇和纯乙醇为提取溶媒，其他处理方法不变，经实验70%乙醇提取效率高。

因少腹逐瘀丸为复方制剂，成分复杂，为了获得阿魏酸满意的分离度，筛选了乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)(18∶82)(20∶80)、乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)(18∶82)(20∶80)6组流动相进行考察，结果乙腈-0.085%磷酸溶液(17∶83)分离效果好，峰形良好，且保留时间适中，故确定上述流动相系统为本法的流动相。

当归为少腹逐瘀丸中重要组成，其中含阿魏酸等活性成分，测定其含量对控制制剂质量有意义。从线性、可行性、稳定性、重复性、回收率等实验考察，用HPLC测定少腹逐瘀丸复方制剂中的含量，方法简便可靠、分离度好，结果稳定。

在实验过程中笔者对赤芍中的芍药苷进行了探索性研究，因少腹逐瘀丸成分复杂，干扰因素多，暂未摸索出有效提取方法，导致峰分离效果不好，峰面积较小，有待进一步深入探索研究。