腺样体肥大伴变应性鼻炎患儿致敏原谱及腺样体组织中IL-25 IL-32 EOS表达分析及诊断价值

韩江南，徐艳红，姜 霞，石向阳，张瑞林

(1.四川雅安市人民医院耳鼻咽喉头颈外科，四川 雅安 625000 2.四川省成都市第二人民医院耳鼻咽喉头颈外科，四川 成都 610017)

变应性鼻炎是一种变态反应性疾病，好发于儿童，在临床上又被称为过敏性鼻炎。虽然应变原不同，但其典型临床表现基本相似，即为阵发性喷嚏、大量清涕等，且具有季节性发作与常年性发作等特点[1]。基于此，明确致敏原尤为重要，对临床治疗及预防具有重要意义。而腺样体肥大是一种经反复炎症刺激而发生的病理性疾病，随着增生及肥大进展的改变，可引起分泌性中耳炎、睡眠打鼾，以及呼吸暂停等临床症状。经调查发现，变应性鼻炎患儿常伴有腺样体肥大表现[2]。有研究指出，腺样体肥大伴变应性鼻炎患儿机体存在炎症因子异常表达情况，譬如IL-25、IL-32。也有研究表示，IL-25、IL-32参与了腺样体肥大伴变应性鼻炎发生、发展。但临床上对于上述指标与腺样体肥大伴变应性鼻炎的关系尚未明确，尚不清楚其作用机制，故本次选取96例变应性鼻炎患儿与48例健康体检者的临床资料进行回顾性分析，旨在分析腺样体肥大伴变应性鼻炎患儿致敏原谱及腺样体组织中IL-25、IL-32、EOS表达及诊断价值，现将其报告如下：

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析2017年5月至2020年5月诊治96例变应性鼻炎患儿与48例健康体检者的临床资料，按照1∶1个体匹配原则选择腺样体肥大伴变应性鼻炎患者48例为A组与单纯变应性鼻炎患者48例为B组。诊断标准：符合“变应性鼻炎诊断和治疗指南”[3]相关于变应性鼻炎的诊断标准，经血清过敏原IgE检测，其浓度>0.35UL/mL。纳入标准：①临床资料齐全；②总病程≥4周；③伴有鼻痒、打喷嚏、清水样涕、鼻塞等临床症状，其症状持续或累计1h以上；④无支气管哮喘等疾病。排除标准：①伴有急慢性感染性鼻腔疾病；②伴有鼻窦炎等疾病；③伴有重要脏器功能障碍等疾病。变应性鼻炎患儿中男性49例、女性47例，年龄范围3～12岁，平均值(7.21±1.25)岁；48例健康体检者中男性25例、女性23例；年龄范围3～14岁，平均值(7.32±1.19)岁。两组一般资料比较齐同(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法:回顾性分析96例变应性鼻炎患儿与48例健康体检者经IL-25、IL-32及EOS检测的资料。包括变应性鼻炎患儿经变应原检测的资料。操作步骤如下：①变应原检测：于空腹状态下抽取静脉血3mL行血清特异性IgE检测，采用德国Cl-BioSciTec GmbH免疫检测仪，试剂盒为AllergyScreen Test Kit。并行吸入物筛查，如户尘螨、春季花粉组合、夏秋季花粉组合等常见吸入性应变原。已任何一项检测结果≥0.35KU/L视为存在致敏原。②IL-25与IL-32检测：取新鲜腺样体组织标本后采用4%多聚甲醛固定，常规脱水后，行石蜡包埋备用。将标本制成石蜡切片，采用SP法对其进行免疫组织化学染色，操作步骤按照说明书依次进行。其中，阳性判定标准为细胞膜或细胞质存在环状沉淀的棕黄色/棕褐色颗粒状物质，阴性判定标准为无显著特异性着色。在低倍镜下观察各玻片，计算阳性细胞个数在总细胞个数中所占百分比，且算出平均值。③EOS检测：标本制成石蜡切片后在显微镜下肉眼观察经苏木精-伊红染色后组织标本中的EOS浸润情况，譬如EOS是否呈圆形，细胞内充分均匀排列粉红色嗜酸颗粒，选取5个视野进行计数，计算取平均值。

1.3观察指标

1.3.1分析变应性鼻炎患儿的致敏原谱，譬如户尘螨、春季花粉组合(桤木、榛属、杨属、榆属、柳属)、夏秋季花粉组合(葎草、艾蒿、豚草、车前草)、短豚草、霉菌组合(点青霉、牙枝霉、黑根霉、交链孢霉)、狗毛皮屑，以及鸡蛋白、牛奶、鱼虾蟹所占比率。

1.3.2评估三组受检人员的白介素-25(IL-25)、白介素-32(IL-32)、嗜酸性粒细胞(EOS)。

1.3.3分析腺样体肥大伴变应性鼻炎患者的独立影响因素，以及IL25、IL32与EOS相关性。

2 结 果

2.1致敏原谱分布:96例变应性鼻炎患儿经血清变应原总IgE检测，其阳性为94例(97.92%)；其中仅对一种变应原过敏共42例(44.68%)，对2种以上变应原过敏共52例(55.32%)。吸入性变应原中以户尘螨阳性率最高，以狗毛皮屑阳性率最低；食入性变应原中以鸡蛋白阳性率最高，以鱼蟹虾阳性率最低。详见表1。

表1 92例患儿的致敏原谱分布

2.2IL-25、IL-32及EOS比较:A组与B组的IL-25、IL-32、EOS均高于对照组(P<0.05)；A组的IL-25、IL-32、EOS高于B组(P<0.05)。详见表2。

表2 三组的IL-25 IL-32及EOS比较

2.3二分类Logistic回归分析:以“组别”为因变量(赋值：1=A组，0=B组)，以“IL-25、IL-32、EOS”为自变量，纳入Logistic回归分析。经二分类Logistic回归分析显示，IL-25、IL-32、EOS高表达是腺样体肥大伴变应性鼻炎患者的独立影响因素(P<0.05)。详见表3。

表3 腺样体肥大伴变应性鼻炎患者的二分类Logistic回归分析

表4 IL-25 IL-32 EOS对腺样体肥大伴变应性鼻炎的诊断价值分析

2.4相关性分析:Pearson相关性分析显示，IL-25与EOS呈正相关(r=0.742，P<0.05)；IL-32与EOS呈正相关(r=0.871，P<0.05)。散点图见图1、2。

图1 IL-25与EOS的相关性

2.5ROC曲线分析:ROC曲线分析显示，IL-25、IL-32、EOS、三项联合预测腺样体肥大伴变应性鼻炎的AUC值分别为0.855、0.977、0.996、0.994(P<0.05)。详见表4。ROC曲线见图3。

图2 IL-32与EOS的相关性

图3 IL-25、IL-32、EOS及三项联合的ROC曲线分析

3 讨 论

变应性鼻炎是指机体过敏原暴露后，在IgE介导作用下由多种细胞因子、炎症介质所参与的一种非感染性慢性疾病。按照其发病机制可分为两个阶段，一为致敏过程，是指初次接触致病原产生IgE过程，即为致敏过程；二为激发阶段，是指再次接触过敏原，根据发作时间分为早发性与晚发性；前者是由肥大细胞、嗜碱性细胞脱颗粒释放炎性介质所引起；后者是由细胞因子引发炎性细胞浸润的黏膜炎症[4,5]。从上述作用机制可得出，细胞因子、炎性介质等参与了变应性鼻炎的发生及发展。在正常情况下，机体血清IgE含量极低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%，而在变应性鼻炎患者中，其血清IgE含量显著上升，约是正常人1000-10000倍左右[6]。基于此，检测变应性鼻炎患儿的血清IgE显得尤为重要，且通过行吸入物筛查，明确致敏原。研究结果显示，吸入性变应原阳性率显著高于食入性变应原，由此说明，环境因素在变应性鼻炎发病过程中占据重要位置，譬如户尘螨、春季花粉组合、夏秋季花粉组合、短豚草、霉菌组合、狗毛皮屑等，均为该病的主要致敏原；其中，以户尘螨占比最高。针对其致敏原，注意室内卫生，开窗通风，对减少变应原数量及减少变应性鼻炎诱发因素具有重要意义。

经调查发现，变应性鼻炎患儿大多都伴有腺样体肥大症状。而腺样体肥大是由炎症反复刺激所引起的一种病理性增生[7]。对于其发病病因，目前临床上尚未全部阐明，仅认为与微生物刺激、大气污染等外来刺激具有一定相关性，通过使腺样体表面上皮黏附生物膜，持续刺激腺样体，促使其增生、肥大，最终发展为慢性炎症[8]。众多临床研究显示，多种炎性细胞因子，譬如IL-25、IL-32在腺样体肥大伴变应性鼻炎发生和发展过程中发挥重要作用[9]。其中，IL-25与IL-7具有同源性特征，主要是由Th2细胞所生产，通过促进炎性因子分泌及增强Th2型免疫应答，导致嗜酸性粒细胞浸润。IL-32则是由T细胞所产生，是一种促炎性细胞因子，在宿主防御机制中发挥重要作用。在正常情况下，其含量极低，而在异常情况下，其水平上调[10]。研究结果显示，A组与B组的IL-25、IL-32表达量均高于对照组，由此说明IL-25、IL-32参与了腺样体肥大伴变应性鼻炎的病理过程，且水平的升高，会促进炎性因子分泌及增强Th2型免疫应答，导致嗜酸性粒细胞浸润，进一步加剧过敏性疾病[11]。另外，A组的IL-25、IL-32的水平高于B组，经分析发现与腺样体肥大具有一定相关性，即腺样体增厚、肥大越明显，腺样体组织中的炎性细胞因子水平越高，而异常表达的炎性细胞因子会严重影响局部免疫，从而引发各种并发症，从中说明IL-25、IL-32等炎性细胞因子可能参与腺样体组织结构的重塑[12]。另外，发现IL-25、IL-32与嗜酸性粒细胞浸润，可起到互为促进的作用[13]。在Pearson相关性分析可看到，IL-25、IL-32与EOS呈正相关；由此推测IL-25、IL-32通过诱导机体细胞形成大量促炎性因子，或直接促进炎症细胞的聚集及活化，形成了嗜酸性粒细胞与炎性细胞因子的恶性循环[14]。

综上所述，IL-25、IL-32参与了腺样体肥大伴变应性鼻炎的发生及发展，可考虑将其作为诊断该病的生物学指标，以期为临床诊治提供重要信息。