免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA错配修复蛋白表达缺失对判断肿瘤微卫星状态的价值

张银

摘  要：目的  分析免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA错配修复蛋白表达缺失在肿瘤微卫星状态判断中的价值。方法  选择云南省红河州第三人民医院2018年9月～2019年9月收治的37例结直肠癌患者，对其病灶组织行切片处理，所有患者先行免疫组织化学法检测，后行PCR-毛细管电泳法检测，观察两种方式的诊断结果。结果  常规切片免疫组织化学法检测结果：31例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达，5例患者至少存在一种蛋白阴性表达，1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。组织芯片PCR-毛细管电泳法检测结果：30例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达，6例患者至少存在一种蛋白阴性表达，1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。两种检测方式准确度、敏感度及特异度未有明显的组间差异（P>0.05）。结论  通过免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA蛋白表达情况，在结直肠癌肿瘤微卫星状态的预测中敏感度和特异度较高，且具有一定的经济性，可有效筛选出结直肠癌，其较高的准确性能对优化治疗方案有关键作用。

关键词：肿瘤微卫星状态;免疫组织化学法;DNA错配修复;结直肠癌;蛋白表达

中图分类号：R730.23    文献标识码：A    文章编号：1009-8011（2021）-4-0040-03

结直肠癌是消化系统癌症，其中DNA错配修复蛋白表达缺失引起微卫星不稳定（MSI）导致的癌症区别于其他癌症，其发生部位、组织形态有较强的特殊性，需采取针对性的治疗措施及预后护理，否则会影响恢复效果，故早诊断尤为重要[1]。近年來，MSI发病机制较为明确，PCR能对结直肠癌分子进行鉴别，但准确性较低，而免疫组织学检测结果具有较高的准确率，且有机体损伤小、操作方便、结果获取速度快的优势，可应用于疾病的筛查诊断。故本研究选择了我院2018年9月～2019年9月收治的37例直肠癌患者，旨在分析免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA错配修复蛋白表达缺失在肿瘤微卫星状态判断中的价值。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选择云南省红河州第三人民医院于2018年9月～2019年9月收治的37例结直肠癌患者，所有患者先行免疫组织化学法检测，后行毛细管电泳法检测，观察两种方式的诊断结果。在37例患者中，有男性21例，女性16例;年龄36～74岁，平均年龄为（58.79±4.32）岁。本研究获得伦理委员会批准。

1.2  纳入及排除标准

纳入标准：①患者经病理学确诊为结直肠癌，未合并其他肿瘤或癌症;②患者在同意书上签字;③对免疫组织化学法检测高度依从，精神状态较好。

排除标准：①一般资料不完整者;②有毛细管电泳法检测禁忌者;③预计生存期不足3个月者。

1.3  方法

将患者病灶组织行切片处理，通过甲醛（浓度为4%）固定标本，行石蜡包埋、HE染色处理。所有患者先行免疫组织化学法检测，后行毛细管电泳法检测。

1.4  观察指标

观察两种方式的诊断结果。观察两组方式的特异度、敏感度、准确度。

1.5  统计学分析

实验以SPSS21.0进行统计学分析，计量资料在数据中用（x±s）表示，使用t检验，计数资料在数据中用[n（%）]表示，使用χ2 检验，P<0.05时表示研究有统计学意义。

2  结果

2.1  检测结果分析

37例结直肠癌常规切片免疫组织化学法检测结果：31例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达，5例患者至少存在一种蛋白阴性表达，1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。其中缺失MLH1和PMS2的患者共28例，缺失MSH2和MSH6的患者共5例，单独缺失PMS2的患者共2例，单独缺失MSH6的共1例，单独缺失MSH2的共1例。

37例结直肠癌组织芯片PCR-毛细管电泳法检测结果：30例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达，6例患者至少存在一种蛋白阴性表达，1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。其中缺失MLH1和PMS2的患者共27例，缺失MSH2和MSH6的患者共4例，单独缺失PMS2的患者共3例，单独缺失MSH6的共2例，单独缺失MSH2的共1例。

2.2  分析两种方式检验准确度、敏感度及特异度

两种检测方式准确度、敏感度及特异度所获取的结果数据，未有明显的组间差异（P>0.05）。见表1。

3  讨论

卫星是生物基因组中重复串联系列，易出现DNA复制错误情况，需通过DNA错配修复系统进行纠正，当四种DNA基因出现体细胞MLH1启动过度甲基化或胚系突变时，不能再进行微卫星复制错误纠正[2]。相关研究发现，MSI肿瘤细胞核仍有表达，但其与内对照细胞相比仍旧较弱，在内对照细胞良好着色的条件下，多数细胞表达强度较弱可被提示为MSI肿瘤，在此之后需再次进行PCR-毛细管电泳法进行肿瘤MSI状态的检测[3]。由于IHC染色结果影响因素较多，包括预处理、组织固定、抗体克隆号不同等，故在判读结果时应关注内对照细胞核的着色状态。此外在常规切片染色结果的观察中，若肿瘤组织块中央无着色或着色强度较弱，且对照细胞核着色度较弱，可推测其原因是组织脱水处理不足或固定不正确等[4]。所以在判读常规切片结果时，需将内对照阴性区域避开，继而准确判读出MMR蛋白表达情况，若病例不可判读，其原因可能是内对照细胞核未成功着色，或前期处理较差，要求在检测过程中严格遵循程序，把控各个环节[5]。此外在肿瘤MSI状态预测中，小块组织的MMR蛋白IHC检测结果具有一定的参考意义，不管是采取新辅助治疗，亦或是晚期结直肠癌患者均可采用活检检测MMR蛋白IHC，从而推断出肿瘤MSI的状态[6]。

本研究中，常规切片免疫组织化学法检测结果：31例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达，5例患者至少存在一种蛋白阴性表达，1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。组织芯片PCR-毛细管电泳法检测结果：30例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达，6例患者至少存在一种蛋白阴性表达，1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。两种检测方式各指标组间差异小（P>0.05）。可见两组检测方式均能实现优异的检出效果，且具有较高的检出准确度、敏感度及特异度，应用价值显著。

综上所述，通过免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA蛋白表达情况的检测价值高。

参考文献

[1]程世芳，毛永芸，唐生业.癌组织及外周血中CD44、PLCEl、甲基化Sept9基因及DNA错配修复蛋白表达水平与结直肠癌病理分期及预后的相关性分析[J].胃肠病学和肝病学杂志，2020，29（2）：183-188.

[2]郭春梅，吴静，刘红.免疫组织化学法检测散发性结直肠癌DNA错配修复蛋白质：内镜活组织检查与手术标本的一致性[J].中华消化杂志，2018，38（12）：841-844.

[3]胡阿锦，张畅，龚苗子，等.结直肠CAR-T细胞治疗相关肿瘤靶点的筛选：CEA、EGFR、HER2、Mesothelin、MUC1和EpCAM的表达及共表达状况[J].消化肿瘤杂志（电子版），2019，11（3）：225-230.

[4]张昕恬，陈锦南，王奇雯，等.程序性细胞死亡蛋白1配体2在激光共聚焦显微内镜诊断结直肠癌中应用的初步探索[J].上海交通大学学报（医学版），2019，39（8）：881-885.

[5]刘师宏，汪威，穆小松.高尔基体磷蛋白3在结直肠癌组织中表达及其对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响[J].解剖学报，2018，49（4）：461-468.

[6]何月新，王斌，穆雅，等.结直肠癌组织中锌指E盒同源结合蛋白-1、赖氨酸酰氧化酶-2的表达变化及意义[J].山东医药，2018，58（45）：13-16.