加热炒制对韭菜子出膏率、粉碎率及6种核苷类物质含量动态影响的研究

吴文辉，刘 霞，郭小红，李 杰，商思阳

（重庆市中医院 药剂科，重庆 400021）

“逢子必炒”是传统中药炮制理论的一部分。其目的是使种子或果实类的药材经过加热炒制后种壳或果皮破裂，易于粉碎和有效成分煎出，从而更好的发挥临床疗效。据学者考证，此理论起源于明•罗周彦《医宗粹言》，曰：“决明子、萝卜子、芥子、苏子、韭子、青箱子，凡药中用子者，俱要炒过，研碎入煎，方得味出，若不碎，如米之在谷，虽煮之终日，米岂能出哉”[1]。然而，加热炒制虽可利用高温破坏种壳或果皮，使其产生裂隙，但温度是否对药物所含的物质基础有影响，尚缺乏客观的数据证明[2]。故本文以韭菜子为研究对象，以粉碎过筛率、出膏率和主要药效物质含量为指标，研究在加热炒制过程中的动态变化规律，拟为“逢子必炒”的传统中药炮制理论提供客观实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1260 infinity II型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；Sartorius SQP型十万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）；New Classic MF MS205DU型万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 试剂

甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

1.3 试药

韭菜子购买于重庆桐君阁股份有限公司，经重庆市中医研究院中药制剂研究所杨敏主任中药师鉴定为百合科植物韭菜Allium tuberosumRottl.的干燥成熟种子。尿嘧啶（中国食品药品检定研究院，批号：100469-201302）；尿苷（中国食品药品检定研究院，批号：110887-201803）；肌苷（中国食品药品检定研究院，批号：140669-201606）；鸟苷（中国食品药品检定研究院，批号：111977-201501）；胸苷（上海源叶生物科技有限公司，批号：S18107）；腺苷（中国食品药品检定研究院，批号：110879-201703）

2 方法与结果

2.1 不同煎煮时间对韭菜子出膏率的动态影响研究

现行《医疗机构中药煎药室管理规范》（2009年版）[3]，第四章第十三条明确指出：一般药物煮沸后再煎煮20 ～ 30 min;解表类、清热类、芳香类药物不宜久煎，煮沸后再煎煮15 ～ 20 min；滋补药物先用武火煮沸后，改用文火慢煎约40 ～ 60 min；药剂第二煎的煎煮时间应当比第一煎的时间略缩短。按照此规定，本实验对比研究煎煮时间的延长对韭菜子种壳破裂的影响，具体方法和结果如下：

韭菜子：取原药材，除去杂质，筛去灰屑；

炒韭菜子：取净韭菜子，置炒制容器内，文火加热，翻炒至有香气逸出，取出放凉；

出膏率测定：取韭菜子和炒韭菜子各10份，分别 编 号 为10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 min各10组，每份100 g，置圆底烧瓶，加25倍量水，称定重量，浸泡30 min，按计划时间加热回流，放冷，补足失重，过滤，取续滤液测定出膏率（n= 3，x）。结果见图1。

由图1可知，韭菜子的炒制虽然会增加最大出膏率，但增加并不明显，增加率约为12.59%。但是炒制品达到最大出膏率的时间却大大缩短，生品约需要80 min，而炒制以后这一时间可缩短到50 min左右。

图1 煎煮时间对韭菜子生品与炒品出膏率影响动态曲线图Fig.1 The graph for effect of decocting time on paste yield curve in Semen Allii Tuberosi between no processing and stir-frying

2.2 加热炒制对韭菜子种壳破裂的动态影响研究

2.2.1加热炒制对韭菜子出膏率和粉碎过筛率的动态影响研究 炒韭菜子：取净韭菜子，置炒制容器内，炒制温度分别为（80 ± 5）、（100 ± 5）、（120 ±5）、（140 ± 5）、（160 ± 5）、（180 ± 5）℃，炒制时间分别为5、10、15、20、25、30 min，取出放凉。

粉碎：取韭菜子和炒韭菜样品各50 g，小型高速万能粉碎机粉碎30 s，过药筛2号（24目），计算过筛率[4]，结果见图2、图3。

由图2、图3可知，炒制的温度和时间与韭菜子的出膏率和粉碎过筛率均成正比，炒制的温度越高，时间越长，出膏率和粉碎过筛率越高。

图2 韭菜子加热炒制出膏率动态曲线图Fig.2 The graph for effect of processing by stir-frying on paste yield curve in Semen Allii Tuberosi

图3 韭菜子加热炒制24目过筛率动态曲线图Fig.3 The graph for effect of processing by stir-frying on crushing sieving rate（24 Pharmacopoeia screen） in Semen Allii Tuberosi

2.2.2加热炒制对韭菜子中6种核苷类物质含量的动态影响 （1）色谱条件 色谱柱：Waters Symmetry Shield RP18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脱0～40 min，1%～9% A；检测波长：260 nm，柱温：30℃；流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL。

（2）混合对照品溶液的制备 分别精密称取尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷对照品适量，纯化水定容，制成浓度依次为17.23、76.10、21.38、53.82、22.11、35.75 μg/mL的混合对照品储备液。

（3）供试品溶液的制备 精密称取韭菜子粉末（过2号筛）1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入纯化水 20 mL，密塞，称重，超声（300 W，40 kHz）提取60 min，放冷，再称重，用纯化水补足减失的重量，摇匀，静置10 min，取上清液过0.22 μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

（4）线性关系考察 精密吸取混合对照品储备液适量，制成系列浓度的混合对照品溶液，分别注入液相色谱仪，按“2.2.2（1）”项下色谱条件进样测定。以对照品溶液的浓度为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并计算回归方程，结果见表 1。

表1 韭菜子中6种核苷类成分线性关系考察结果Tab. 1 The results of linear relationship of 6 nucleosides in Semen Allii Tuberosi

（5）精密度试验 精密吸取混合对照品溶液适量，连续进样测定6次，记录峰面积，计算得到尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷峰面积的RSD依次为1.89%、0.92%、1.74%、0.83%、1.66%、1.02%，表明仪器精密度良好。

（6）重复性试验 取同一批生韭菜子适量，按“2.2.2（3）”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.2.2（1）”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算得到尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷峰面积的RSD分别为2.11%、0.82%、1.85%、1.39%、2.03%、1.56%，表明该方法重复性良好。

（7）稳定性试验 上述供试液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h按“2.2.2（1）”项下色谱条件测定尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷峰面积，计算得到RSD分别为 1.99%、0.92%、2.05%、1.13%、1.87%、1.73%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

（8）加样回收率试验 精密称取已知成分含量的韭菜子供试品6份，每份约0.5 g，分别精密加入“2.2.2（2）”混合对照品3 mL，按“2.2.2（3）”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.2（1）”项下色谱条件进样测定，计算平均加样回收率和RSD，结果尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷平均回收率分别为98.57%、97.83%、99.15%、98.05%、98.90%、99.73%，RSD分别为2.81%、1.35%、1.68%、1.22%、1.82%、2.21%，表明供试品溶液制备方法稳定可行。

（9）样品含量测定 精密称取不同温度和时间条件下炒制的韭菜子粉末（过2号筛）1.0 g，按“2.2.2（3）”项下制备供试品溶液（n= 3），按“2.2.2（1）”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算得到尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷含量，结果见表2、图4 ～ 6。

图4 混合对照品溶液HPLC色谱图Fig.4 HPLC chromatogram of mixed reference solution

图5 韭菜子样品溶液HPLC色谱图Fig.5 HPLC chromatogram of Semen Allii Tuberosi solution

图 6 不同温度和时间条件下炒制韭菜子6种核苷类物质变化动态曲线图Fig.6 The graph for effect of processing by stir-frying on content of 6 nucleosides in Semen Allii Tuberosi under different temperature and time conditions

表2 不同温度和时间条件下炒制韭菜子6种核苷类物质含量（n = 3，x）Tab. 2 Content of 6 nucleosides in fried Semen Allii Tuberosi under different temperature and time conditions（n = 3，x）

韭菜子中尿嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷6种核苷类物质含量随着时间和温度的增加逐渐降低。并且当温度达到180℃或者160℃炒制时间超过30 min时，尿嘧啶和肌苷的含量可以忽略不记。

3 讨论

传统中药炮制“逢子必炒”的“炒”，多为“炒黄”或“微炒”。其操作虽然简单，但炒制的程度却较难判定，特别是当药物表面颜色本就为黑色或灰色时，如韭菜子、黑芝麻、青箱子等。炒的炮制工艺虽经过历代医家的丰富和发展，可以从“对比看”“听爆声”“闻香气”“看断面”等经验的综合运用，判断是否种壳或果壳破裂，但仍是以经验为主，并不能完全确定。本研究选用表面为黑色的韭菜子为研究对象，通过系列炒制时间和温度的因素设计，证明了韭菜子经过加热炒制以后，最大出膏率和粉碎率得到了明显增加，煎煮时间明显缩短，说明了传统炮制理论的科学性。但是，也发现了高温和长时间的受热会破坏其所含主要药效物质的含量，甚至尿嘧啶和肌苷的含量已经降低到可以忽略不记的程度，可能会影响到其临床疗效，故因引起重视。

4 结论

加热炒制可使种子类药材种壳或果壳破裂，使传统煎煮溶剂水能够更快更好的渗透到种仁或果仁，从而更多的提取出有效物质。加热炒制也更利于此类药材的粉碎，便于入丸剂或散剂。但应充分把握炒制的时间和温度，因高温和长时间受热会破坏主要药效物质含量。