肌苷氯化钠注射液内控质量标准的制订

王丽军,刘 栋

（中国人民解放军第一五三中心医院药械科,河南 郑州 450042）

肌苷参与体内能量代谢及蛋白质合成,用于治疗各种原因所致的白细胞和血小板减少[1]、急性肝炎及慢性迁延性肝炎、心功能不全和其他心脏疾患[2]。2010年版《中国药典(二部)》采用高效液相色谱法测定肌苷氯化钠注射液中肌苷的含量[3],虽准确度高,但不太适用于制剂半成品快速检测的需要。因此,本研究中对含量测定方法进行了改进,制订了简便、快速的肌苷氯化钠注射液内控质量标准,用于制剂半成品的质量检验。

1 仪器与试药

LC-10A型高效液相色谱仪,包括 SPD-10A型紫外检测器、手动进样器、LabSoulations型色谱工作站（日本岛津公司）；pHS-3C型酸度计（上海雷磁仪器厂）；UV-2450型紫外分光光度计（Shimadzu）；BT 125D型电子天平（德国赛多利斯公司）。肌苷（注射级,新乡制药股份有限公司,批号为01130206-2）；氯化钠（天津海光药业有限公司,批号为01130301）；肌苷氯化钠注射液（医院自制,批号为13082101～13082105）；甲醇为色谱纯（天津市四友精细化学品有限公司）,其他试剂均为分析纯,水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 肌苷氯化钠注射液制备

取处方量的肌苷和氯化钠,加入注射用水适量溶解,再加入注射用水至足量,半成品检验合格后灌封、灭菌即得。规格为100 mL,其中含肌苷 0.6 g,含氯化钠 0.9 g。

2.2 性状与鉴别

性状:本品为无色的澄明液体。

鉴别:取0.01%供试品溶液适量,加等体积的3,5-二羟基甲苯溶液（取3,5-二羟基甲苯与三氯化铁各0.1 g,加盐酸配制成 100 mL）,混匀,在水浴中加热约 10 min,即显绿色；照 2.3.2项下方法试验,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致；pH 应为 6.0～8.0。

2.3 含量测定

2.3.1 紫外分光光度法

波长选择:精密称取105℃干燥至恒重的肌苷对照品50 mg,置50 mL容量瓶中,用水溶解稀释至刻度,摇匀,精密量取0.9 mL,置100 mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,制成含肌苷9μg/mL的溶液,以水为空白,于200～400 nm波长范围内扫描,肌苷在248 nm波长处有最大吸收。另按处方量称取除肌苷外的辅料,加注射用水制成不含肌苷的空白溶液,同法在200～400 nm波长范围内扫描,结果辅料在248 nm波长处无吸收(见图1)。故确定肌苷的紫外测定波长为248 nm。

图1 肌苷氯化钠注射液紫外波长扫描图

标准曲线制备:精密称取105℃干燥至恒重的肌苷对照品50 mg,用水制成含肌苷100μg/mL的贮备液。分别精密量取肌苷贮备液适量,加水制成含肌苷为 6.0,8.0,10.0,12.0,14.0μg/mL 的溶液,照分光光度法[2010年版《中国药典（二部）》附录],以水为空白,于248 nm波长处测定吸光度。以吸光度（A）对肌苷浓度（C）进行线性回归,得回归方程 A=0.0456C-0.0028,R2=0.9996（n=5）。结果表明,肌苷溶液的质量浓度在 6.0～14.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

回收率试验:精密称取105℃干燥至恒重的肌苷对照品约54,60,66mg,精密称定,用不含肌苷的溶液（其他辅料按100%投料）进行溶解,按处方工艺制成相当于肌苷标示量90%,100%,110%的溶液。照样品含量测定项下方法平行制备3份溶液,计算肌苷含量。结果平均回收率为99.31%,RSD为0.25%（n=9）。

稳定性试验:取样品含量测定项下的供试品溶液,于室内自然光条件下放置,分别于 0,1,2,4,6,8 h 时测定吸光度。结果的RSD为0.20%(n=6),表明肌苷溶液在8 h内稳定。

重复性试验:取同一批（批号为13082101）样品5 mL共 6份,按样品含量测定项下方法测定含量。结果计算得肌苷的平均含量为99.49%,RSD为0.26%（n=6）,表明方法重复性良好。

样品含量测定:取本品5批,每批平行测定6次,分别精密量取5mL,置100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取3mL,置100 mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL含肌苷9μg的溶液,照分光光度法[2010年版《中国药典（二部）》附录],以水为空白,于248 nm波长处测定吸光度,计算肌苷含量。结果见表1。

2.3.2 高效液相色谱法

色谱条件:色谱柱为 DiamonsilTMC18柱（250mm ×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇-水（10∶90）；流速为 1.0 mL/min；检测波长为248 nm。肌苷峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求,理论板数按肌苷峰计算不低于2000。色谱图见图2。

图2 高效液相色谱图

对照品贮备液制备:精密称取105℃干燥至恒重的肌苷对照品 60 mg,制成含肌苷的 0.6 g/L的贮备液。

样品含量测定:取样品5批,每批平行测定6次,分别精密量取5mL置50mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,再精密量取3 mL,置100 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,即得每1 mL含肌苷18μg的供试品溶液,精密量取20μL注入高效液相色谱仪,记录色谱图；另取对照品贮备液适量,用水制成每1mL含肌苷18μg的对照品溶液,同法测定,按外标法计算肌苷含量,结果见表1。

表1 5批样品含量测定结果比较（%,±s,n=6）

表1 5批样品含量测定结果比较（%,±s,n=6）

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2.3.3 统计学处理

利用SPSS 17.0统计软件,对2种方法测得的含量进行t检验,结果表明,在α=0.05水平上,紫外分光光度法和高效液相色谱法不存在显著性差异。

3 讨论

肌苷氯化钠注射液是《中国药典》收载的制剂,其中肌苷的含量测定采用高效液相色谱法,虽然该法灵敏度高、准确度好,但使用液相法对仪器要求较高,并且色谱柱的平衡也较费时间,因此不适合该制剂半成品的快速测定。为了满足半成品含量测定简便、快捷的要求,制订了内控质量标准,采用紫外分光光度法替代高效液相色谱法测定半成品中肌苷的含量。考虑到肌苷的水溶性很大,紫外分光光度法测定肌苷含量采用水作为稀释溶剂,方便、准确、快捷。

参考文献:

[1]陈新谦,金有豫,汤 光.新编药物学[M].第17版.北京:人民卫生出版社,2010:557.

[2]徐 帆,徐贵丽,冯恩富,等.肌苷氯化钠注射液与维生素B6注射液的配伍稳定性研究[J].中国药业,2009,18（19）:20-22.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京:中国医药科技出版社,2010:279.