罗氏cobasE602 发光检测系统检测项目的溯源研究

沈素晶，叶青，李霭文，邓超，谭俊青

（广东省第二中医院检验科，广东 广州 510095）

电化学发光系统具有性能稳定、准确度高、重复性好、灵敏度高等特点，可测定内分泌激素、肿瘤标志物、心血管疾病标志物、血药浓度和传染病等项目[1-4]，近年来也为各大实验室应用。不难发现，一个实验室同时使用几个不同的发光检测系统也是常事。因此各检测系统间的可比性和结果的同质性研究也成了临床检验工作中一个亟需解决的问题[5,6]。对新建检测系统的溯源是一个复杂而且必需的过程，同时也需要投入大量的人力、物力和财力。而技术不成熟也将对人力和财力造成较大的浪费。本文将对实验室新引进的罗氏cobas E 602 发光检测系统与已溯源的目标检测系统雅培I 2000 进行一次系统的溯源比对试验，验证其性能及是否满足临床需求； 也为临床检验进行溯源性研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料 ⑴检测系统。新建检测系统：Roche cobas E 602 电化学发光检测仪模块及其配套校准物、试剂和第三方朗道质控物 目标检测系统：雅培I2000 化学发光检测仪，雅培试剂、校准品和质控品)。选择的5 个具有代表性的检测项目作为检测对象，T3、T4、CEA、CA125II、ProgIII，五个项目分别代表内分泌系统，肿瘤标志物及性激素。本次溯源用到的罗氏E 602 检测系统的试剂，校准品，质控品批号，见表1。

表1 5 个检测项目的试剂，校准品，质控品批号

1.2 方法 ⑴可报告范围分析：从患者的血清样品中分别挑选5 个检验项目的低值(L)和高值(H)样本，高值浓度达厂家说明书线性范围的上限，低值样品浓度尽可能低，将 H 和 L 样品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、lL+4H、0.5L +4.5H、5H 的比例混合配制，形成7 个系列浓度的实验样品。7 个待测样品浓度呈比例关系并涵盖说明书的线性范围。每个浓度的样品均重复6 次测定，前3 次由低到高进行，后3 次顺序相反。首先计算出混合的待测样品的浓度作为这些样品的预期值，再与这些样品的实际测定值进行回归关系验证； 确认是直线回归关系且具有相关性(P＜0.05)后，计算相关系数(r)和直线回归方程(Y=bX+a)的斜率b 和截距a，最后作截距a 检验，确认差异无统计学意义(P＞0.05)。

⑵精密度的测定:选择与患者标本相近且性能稳定的第三方质控品：朗道质控品,作为批内和批间精密度检测的样本。在罗氏和雅培两个检测系统的第三方质控均在控的前提下,5 个待检项目每天检测1 次,连续检测20d,累积得到20 个结果，经计算得到20 个数据的CV 值, 即是各个项目在两个系统的日间精密度。另外将待测样品随机插入患者标本一起检测,一个批内选4 个时间段，每个时间点连续测5 次，总共得到20 个数据,经计算得出CV 值即是待测项目在两个系统的批内精密度。

⑶准确度的分析： 为5 个溯源项目分别随机选取2O 份患者标本，标本浓度分布尽量覆盖项目的可报告范围，其中浓度在参考区间内外各1O份。每天分别在规定时间内检测选取的标本4 份，每份标本一分为二，分别在雅培I2000 和罗氏cobas E 602 检测系统上检测。先按 l、2、3、4 顺序测1 次，然后相反顺序再测1 次，以相同的方法连续检测5d。对所得的数据先进行离群值分析，剔除离群值后进行直线回归与相关分析，得直线回归方程(Y=bX+a)和相关系数(r)。

⑷临床可接受性分析： 将5 个检测项目的临界值分别代入各自相应的回归方程得相应的Y值，SE=Y-X, %SE=—Y-X｜/X*100%判断临床的可接受性。

⑸统计学处理： 不同检测系统的质控及血清标本的测定结果统计采用随机区组设计资料的方差分析、可靠性分析、相关分析和回归分析。所有数据均在Excel 2000 和SPSS 20.0 软件包上进行。

2 结果

2.1 可报告范围；5 个检验项目的测定值与理论值间的回归方程均为直线回归检验，且具有相关性(P＜0.05)。回归直线斜率 b 在 1.0±0.03 范围内，截距a 检验均无统计学意义 (P＞0.05)； 相关系数r 均＞0.975，说明直线回归统计的斜率和截距可靠；见表2。经验证，5 个检验项目厂家说明书提供的线性范围可以作为Roche cobas E 602 化学发光检测系统的可报告范围，见表3。

表2 5 个检验项目的回归方程和相关系数

表3 5 个检验项目验证的线性范围与说明书线性范围比较

2.2 精密度 按照设计的方法分别计算的罗氏C 602 检测系统和雅培I2000 检测系统的批内和批间的精密度，两者均能满足文件对不精密度的要求，结果见表4～7。

表4 罗氏cobasE602 检测系统批内精密度实验结果

表5 罗氏cobasE602 检测系统批间精密度实验结果

表6 雅培I2000 检测系统批内精密度实验结果

表7 雅培I2000 检测系统批间精密度实验结果

2.3 准确度 去除离群值后进行直线回归与相关分析，得直线回归方程Y=bX+a 和相关系数(r)。r均＞0.975，说明直线回归统计的斜率和截距可靠，可以用于回归统计。见表8。

表8 5 个项目用于验证不确定度的回归方程和相关系数

2.4 检测系统可接受性能分析结果与结论 将5个检测项目的临界值分别代入各自相应的回归方程得相应的Y 值，与雅培系统比较其偏倚。系统间比对结果的误差全部小于CLIA 88 允许误差的1/2，结果临床全部能够接受。见表9。

表9 5 个项目的评价

3 讨论

电化学发光免疫测定法发展于1996 年，它在发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是电化学和免疫测定相结合的产物，具有高敏感度，精密度，高准确度的特点，也是世界公认的最先进的临床免疫检测技术[7-10]。因此各大医院也相继引进电化学发光检测系统； 但由于其试剂成本高,很少实验室可以对系统进行完整的溯源性研究。本文参照EP9 文件要求[11,12]，选择了罗氏E 602 检测系统常规项目中的5 个代表性项目进行验证，结果显示新建检测系统罗氏cobas E 602 的精密度，准确度，可报告范围及临床可接受度均具有良好的溯源性，可投入临床使用。随着科技不断发展，检验仪器推陈出新速度也不断加快，实验室同个系列项目同时使用几台仪器也常见，检测系统间的可比性也成为头等任务。不少厂家也有提供一定的溯源性资料,若实验室直接使用厂家的数据,不仅不够严谨，也为实验室埋下隐患，有可能掩盖了实验室一些不稳定因素。因此每个实验室为仪器作溯源性研究也是必要的。本文就科室新引进的罗氏E 602 发光检测系统进行系统的溯源性研究，验证其性能，达到结果的可比性[13-15]为临床治疗和诊断提供指导。