醇类防腐剂对皮肤常驻菌的抑制作用

宋静

（广州广曼生物科技有限公司，广东广州 510000）

皮肤微生物在保护机体免受病原体入侵、保护免疫系统和分解自然产物方面发挥着重要作用[1-3]。皮肤是人体最大的器官，是有益微生物的定植地，是防止病原体入侵的物理屏障。当屏障被打破或当常驻菌和病原体之间的平衡被打破时，就可能导致皮肤病甚至全身疾病[4-7]。皮肤常驻菌主要有疮疱丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、干酪乳杆菌、糠秕马拉色菌和白色念珠菌[8]。

保证化妆品不被微生物污染的常规策略是添加防腐剂。为解决传统防腐剂相对刺激性较大的问题，近年来一些更加温和、安全的自防腐成分开始在化妆品业内替代传统防腐剂被广泛使用，如醇类防腐产品。本文以两种醇类防腐产品为研究对象，探究二者对皮肤常驻细菌疮疱丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、干酪乳杆菌和皮肤常驻真菌糠秕马拉色菌、白色念珠菌5种菌群的影响。

1 材料与方法

1.1 试验菌株与样品

痤疮丙酸杆菌（GIM 1243）、表皮葡萄球菌（ATCC12228）、糠秕马拉色菌（GIM 2.181）、白色念珠菌（ATCC10231）均为标准菌株，广东省微生物菌种保藏中心提供；干酪乳杆菌为自提取菌株，提取自养乐多活菌酸奶。

1,2-己二醇（纯度≥99.89%）、1,2-戊二醇（纯度≥99.87%），广州广曼生物科技有限公司。

1.2 试剂与仪器

胰蛋白胨大豆琼脂、沙氏葡萄糖琼脂培养基，美国BD公司；脑-心浸萃琼脂培养基、MC培养基、改良SDA培养基、PBS溶液，广东环凯微生物科技有限公司。

Thermo恒温培养箱，赛默飞；压力蒸汽灭菌器，厦门致微仪器有限公司；生物安全柜，青岛海尔；日本三菱C-31厌氧培养盒套装，三菱瓦斯化学株式会社。

1.3 菌株的培养与计数

5种菌株的培养方法如表1所示，均采用平板法进行计数。

1.4 试验方法

吸取5.0 mL适当浓度的1,2-己二醇或1,2-戊二醇水溶液、0.1 mL适当浓度的菌悬液和5.0 mL双料肉汤，加入20.0 mL试管中混匀。细菌菌悬液终浓度 1.0×106～9.0×106CFU/mL，真菌悬液终浓度1.0×104～9.0×104CFU/mL。1,2-己二醇或 1,2-戊二醇的终浓度为0.5%、1.0%和2.0%。在室温（37 ℃）放置一定时间（6 h、12 h、24 h）后，每次取1 mL进行菌落总数测定，使用PBS溶液进行10倍系列稀释，并选择适宜的稀释度样液1.0 mL接种倾注相应的培养基平板，每个稀释度接种2个平板，按菌株特性选择合适的温度进行恒温培养。以灭菌PBS溶液作为阴性对照，培养完成后进行计数，并进行数据统计。

1.5 抑菌效果评价标准

杀灭对数值：细菌数量减少的对数值，称为杀灭对数值（结果保留至小数点后2位）。抑菌效果评价标准见表2。

2 结果与分析

1,2-己二醇对皮肤常驻菌的抑制作用见表3。由表3可见，0.50%～1.00%的1,2-己二醇在24 h内对5种皮肤常驻菌未表现出任何抑制作用，并且不随作用时间的延长而呈现正相关规律；当浓度提高到2.00%时，表现出一定的抑制作用，并随着作用时间的延长而呈现正相关趋势，作用24 h最为明显，尤其对痤疮丙酸杆菌和白色念珠菌的抑制效果更为显著。

表3 1,2-己二醇对皮肤常驻菌的抑制作用

1,2-戊二醇对皮肤常驻菌的抑制作用见表4。由表4可见，0.50%～1.00%的1,2-戊二醇在24 h内对5种皮肤常驻菌未表现出任何抑制作用，并且不随作用时间的延长而呈现正相关趋势；当浓度提高到2.00%时，作用6 h后对痤疮丙酸杆菌出现明显的抑制作用，作用24 h对干酪乳杆菌、白色念珠菌、糠秕马拉色菌表现出抑制效果。

表4 1,2-戊二醇对皮肤常驻菌的抑制作用

目前，在全球市场中，微生物组学化妆品的开发主要是通过微生物直接或间接改善皮肤多种炎症反应、敏感肌等问题[9-10]，其中化妆品防腐作用产品备受关注。本研究使用多种皮肤常驻细菌和真菌分别测试醇类防腐剂的抑制效果，最大程度地模拟化妆品中防腐作用产品与皮肤常驻菌接触的方式和时间，通过抑菌评价，真实反映了醇类防腐剂对皮肤微生态的影响。

3 结论

0.50%～1.00%的1,2-己二醇和1,2-戊二醇在24 h内对皮肤常驻菌疮疱丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、干酪乳杆菌、白色念珠菌和糠秕马拉色菌未表现出任何抑制作用；浓度提高到2.00%时，开始呈现出一定的抑制作用，但短时间内（≤6 h）影响较小，因此建议在微生态配方中1,2-己二醇和1,2-戊二醇的单独使用浓度控制在1.0%以内，应用到与人体接触较短时间的产品（如面膜）中可以提高使用浓度或总含量。