GC-MS法同时测定化妆品中19种香料含量

漆爱明，李彦君，谭杰

（广东省药品检验所，广东广州 510300）

随着香料工艺的不断发展与成熟，香料的应用范围不断扩大，带来的安全性问题也越来越引起人们的重视。其中，过敏问题尤为多见[1-4]，并占到全部化妆品过敏案例的1/3以上[5]。国际日用香料研究所（RIFM）、国际香精香料协会（IFRA）、欧盟、中国香料香精化妆品工业协会（CAFFCI）等监管评价机构及行业协会收集和分析日用香料的相关科学信息，并对其进行研究与评估，建成全球范围内关于香料香精的毒理学数据及文献最全面、最完整的数据库并不断完善相关法规[6]，从根源上约束香料市场的规范性。

2003年3月，欧盟委员会提出了26种致敏原在化妆品中的限量，规定这26种致敏原在停留型产品中浓度如果高于0.001%，冲洗类产品中浓度如果高于0.01%，必须在化妆品标签上标注过敏原名称[7]。而我国化妆品法规并不要求在化妆品标签上标注日用香精全成分[8]。然而香精成分和影响相当复杂，其带给消费者的健康危害也更应重视起来。因此，亟需通过化妆品风险监测评价为出台相关法规或措施以控制化妆品香料香精的安全性提供重要的数据支持。

为了加强对化妆品中香料使用安全和质量的管理，我国已建立了同时检测19种致敏香料的推荐性国家标准GB/T24800.10-2009《化妆品中十九种香料的测定气相色谱-质谱法》。本研究依据现有标准，对方法进行了进一步优化，应用优化后的方法对护肤类、香水类以及口红3类化妆品进行了风险监测研究。

本研究应用气相色谱-三重四极杆质谱法同时测定126批次风险监测化妆品中的19种香料成分，并将测定结果与产品标签标识和批件配方成分进行比对和统计分析，了解化妆品香料的使用和质量安全情况，为化妆品市场监管提供可靠的数据和技术支撑。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

GCMS-TQ8050气相色谱-三重四极杆质谱法仪，岛津；XS205分析天平，Mettler Toledo；CPA224S电子分析天平，Sartorius；LG10-2.4A离心机，北京京立；LAB DANCER S25涡流振荡器，IKA公司。

苯甲酸苄酯（99%）、水杨酸苄酯（99%）、羟基香草醛（98%）、香叶醇（99%）、金合欢醇（95%）、甲位戊基桂醛（97%）、丁香酚（99%）、丁苯基甲基丙醛（97%）、芳樟醇（98%）、2-辛炔酸甲酯（98%）、异丁香酚（97%）、香茅醇（97%），阿拉丁；苯甲醇（100%）、苧烯（95%）、α-己基肉桂醛（95%）、肉桂酸苄酯（99%），百灵威；戊基肉桂醇（97%），Dr.E；新铃兰醛（97%），BASF；α-异甲基紫罗兰酮（96.5%），PRIVI；甲醇，色谱纯，德国Merck公司。实验用水为一级水，电导率≤0.01 mS/m。

1.2 标准溶液的配制

精密称取苯甲酸苄酯、水杨酸苄酯、羟基香草醛、香叶醇、金合欢醇（法呢醇）、甲位戊基桂醛、丁香酚、丁苯基甲基丙醛（铃兰醛）、芳樟醇、2-辛炔酸甲酯（庚炔羟酸甲酯）、异丁香酚、香茅醇、苯甲醇（苄醇）、苧烯、α-己基肉桂醛、肉桂酸苄酯、戊基肉桂醇、羟异己基3-环己烯基甲醛（新铃兰醛）、α-异甲基紫罗兰酮对照品各1.0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成19种香料浓度均为10.0 mg/mL的混合标准储备液，再取19种香料混合标准储备液1.0 mL于100 mL容量瓶中，用色谱纯甲醇定容至刻度，摇匀，配制成19种香料混合使用标准储备液，于4 ℃避光保存，可使用3个月。

1.3 样品前处理

1.3.1 固体、膏状、乳液类样品

称取1.0 g（精确至0.001 g）试样于10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL超声提取15 min。取部分溶液转移至10 mL具塞塑料离心管中，以不低于12 000 r/min的转速离心15 min，上清液加入2 g无水硫酸纳脱水，经0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。

1.3.2 液体类样品

称取1.0 g（精确至0.001 g）试样于10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL，充分摇匀，加入2.0 g无水硫酸纳脱水，经0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。

1.4 19种香料系列浓度标准工作溶液的制备

精密移取19种香料混合使用标准储备液5.00 mL、4.00 mL、2.00 mL、1.00 mL、0.50 mL、0.50 mL分别置于 10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、50 mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释，定容，得标准系列溶液 S5、S4、S3、S2、S1、S0，浓度分别为 50.0 mg/L、40.0 mg/L、20.0 mg/L、10.0 mg/L、5.0mg/L、1.0 mg/L。

1.5 GC-MS条件

色谱柱：Agilent DB-Wax（30 m×0.50 μm×0.32 μm）；色谱柱温度：40 ℃保持2 min，然后以5 ℃/min升温至240 ℃，保持18 min。

进样口温度：250 ℃；色谱-质谱接口温度：280 ℃；载气：氦气，纯度≥99.999%，流速2.0 mL/min；电子轰击电离（EI）源，电子能量70 e V，多反应监测（MRM）模式，溶剂延迟4.0 min；进样方式：分流进样，分流比10∶1。

2 结果与分析

2.1 色谱柱及色谱条件的考察

图1为总离子色谱图，对色谱图中19种香料的保留时间、定量离子、MRM离子和丰度比进行总结，结果如表1所示。

图1 总离子色谱图

表1 19种香料的GC-MC谱图信息总结表

2.2 方法的线性方程及检出限

由表2可知，19种香料成分的线性良好，线性范围都落在1.0～50.0 mg/L，线性相关系数R2为1，检出限（LOD）在0.000 14%～0.000 16%，低于《化妆品中十九种香料的测定气相色谱-质谱法》GB/T24800.10-2009标准中的检出限0.000 30%，定量下限（LOQ）为0.001 0%。

表2 19种香料的线性范围、回归方程、相关系数（R2）、检出限和定量限

2.3 精密度和回收率

分别平行测定中浓度（标准系列溶液S3的浓度）6次作为本实验的精密度，由表3可知，本方法中浓度对应的组分精密度良好。19种香料成分的精密度相对偏差均小于2.0%，该方法的稳定性和重复性良好。

表3 19种香料成分中浓度的精密度（n=6）

分别对2种基质（液体和乳状）样品分别进行19种香料成分S2浓度的加标回收实验,回收率测定结果6份间的RSD值作为各不同化妆品基质中含S2浓度待测成分时的测定重复性。基质是液体时，19种成分的回收率范围为83.2%～100.9%，相对标准偏差的范围为2.7%～4.8%；基质是乳状时，19种成分的回收率范围为84.5%～106.0%，相对标准偏差的范围为2.0%～4.4%。由表4可知，乳状基质和液体基质回收率效果基本一致。

表4 2种空白基质（液体状和乳状）的加标回收率及重复性（n=6）

2.3 化妆品中19种香料成分检出情况

对126批（其中护肤类44批次、香水类11批次、口红类71批次）化妆品进行了分析检测，结果如表3所示。从表3可以看出，香水类检品目标物芳樟醇、丁苯基甲基丙醛（铃兰醛）、苧烯、香茅醇、香叶醇、α-己基肉桂醛、α-异甲基紫罗兰酮、羟基香草醛水杨酸苄酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、羟异己基 3-环己烯基甲醛（新铃兰醛）、金合欢醇（法呢醇）、丁香酚、甲位戊基桂醛、异丁香酚、2-辛炔酸甲酯、戊基肉桂醇和肉桂酸苄酯的检出率分别为100.0%、90.9%、81.8%、81.8%、63.6%、54.5%、45.5%、45.5%、45.5%、36.4%、36.4%、27.3%、18.2%、9.1%、9.1%、9.1%、0、0和0。其中芳樟醇检出率最高，为100.0%；检出率最低的是2-辛炔酸甲酯、戊基肉桂醇和肉桂酸苄酯，检出率为0，19种香料成分的检出率为84.2%。护肤类检品19种香料目标物检出率最高的是苧烯，样品检出率为68.2%；检出率较高的是芳樟醇，样品检出率为56.8%，19种香料成分的检出率为73.7%。口红类检品19种香料成分检出率最高的是芳樟醇，样品检出率为31.0%，检出率较高的是香茅醇，样品检出率为22.5%，19种香料成分的检出率为78.9%。从表5可以看出，香水类19种香料成分的检出率相对护肤类和口红类是最高的，检出香料成分的含量相对护肤类和口红类也是偏高的，这应该是与香水的使用用途有很大关系。依据GB/T22731-2017日用香精标准来判断126批产品是否合格，经一一对照判定，所做检品香料使用量是符合规定的，所有检品检测结果合格。

表5 实际样品中19种香料成分的测定结果

2.4 口红类测定结果与产品标签标识和批件配方成分的比较研究

对71批次口红类样品的测定结果、样品标签标识和批件配方成分进行了比较研究，结果如表6所示。其中标签标识标有含香料成分的共25批次，标签标识标有不含香料成分的共46批次；批件配方含香料成分的有21批次；批件配方不含香料成分的有21批次，批件配方未标注是否含香料成分的29批次，批件配方未标注在此次研究中作不判定处理。检验结果与标签标识、批件配方一致的检品批次为44批，占总批次比率为62.0%；检验结果与标签标识、批件配方不一致的检品批次为14批，占总批次比率为19.7%；检验结果与标签标识、批件配方不一致的检品批次为14批，占总批次比率为19.7%；检测结果与标签标识、批件配方未标注的作为不判定批件共13批，批件比率为18.3%。

表6 71批次口红样品的实际检验结果与标签标识、批件配方的比较研究

续表6

3 结论

GC-MS同时测定化妆品中19种香料的检出限为0.000 144%～0.000 159%，19种香料在相应的线性范围内线性关系良好，相关系数R2均等于1.0；在乳状和液体状2种剂型化妆品加标浓度下，液体状加标的回收率为83.2%～100.9%，乳状加标的回收率为84.5%～106.0%，相对标准偏差均小于5.0%。通过对126批次（护肤类44批次、香水类11批次、口红类71批次）化妆品的检验结果分析可以看出，香水类化妆品普遍含有香料成分，护肤类其次，口红类化妆品香料的使用相对较少。其中芳樟醇在香水中使用率在此次检验中100%的含盖面，其次是丁苯基甲基丙醛的使用率也偏高，达到90.9%含盖面。化妆品标签标识与批件不一致接近20%，自制不判定检品接近19%，因此应加强标签标识与批件不一致的监管和自制化妆品产品标签标识的规范化。随着香料行业的不断发展，香料在化妆品领域的应用种类也越来越多，香料的市场监督检验方法也需与时俱进。