虎尾轮降低高尿酸血症大鼠血清尿酸水平作用初探

蓝梓华，王捷频，刁文飞，郑康演，刘 让，黄 阗，高分飞，陈 穗

(1.汕头大学医学院2016级临床医学本科班，广东 汕头 515041；2.汕头大学医学院机能学实验室，广东 汕头 515041）

高尿酸血症(男性血清尿酸≥416.0 μmol/L，女性血清尿酸≥357.0 μmol/L），可以导致尿酸钠在关节、肌腱或其他组织中积累，引起痛风性关节炎，肾脏疾病等多种并发症。中国45岁及以上的人群的高尿酸血症患病率为6.4%，高尿酸血症患病率随着年龄段的上升而增加，高尿酸血症在男性中(7.9%)比在女性中(4.9%)更常见[1]。目前临床上治疗高尿酸血症的药物主要有别嘌醇、苯溴马隆、拉布立酶等[2]。但由于这些药物可能导致胃肠不适、过敏反应、肾毒性以及肝毒性等副作用，其临床应用受到不同程度的限制[3-4]。中药煎剂如加味四妙汤、桂枝附子汤治疗高尿酸血症及痛风已有较长的历史。近年来关于对比中药煎剂和西药在高尿酸血症及痛风的疗效研究报道也越来越多[5-6]。虎尾轮(Uraria crinita）为豆科植物狸尾草属，又名猫尾射。药用范围广，具有散瘀止血，行气止痛的作用[7-8]。而虎尾轮在民间虽有治疗高尿酸血症及痛风的应用，却并未有相关的研究报道，本文通过研究虎尾轮对大鼠血清尿酸水平的影响，初步探讨虎尾轮对高尿酸血症的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物SPF 级SD 大鼠30 只，雄性，体重200～220 g，由汕头大学医学院实验动物中心提供。

1.1.2 药品与试剂别嘌醇购自黑龙江澳利达奈德制药公司，氧嗪酸钾购自美国Sigma公司，黄嘌呤和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)购自北京索莱宝科技公司，尿酸测定试剂盒购自贝克曼库尔特实验系统有限公司。

1.2 方法

1.2.1 试剂配制虎尾轮水煎液的制备：打磨虎尾轮，取42.00 g虎尾轮(按人与大鼠体表面积比换算)，加8 倍蒸馏水，煎煮浓缩至20 mL 储备液，灌胃前再用蒸馏水配至所需浓度。黄嘌呤0.5%CMC-Na 溶液的配制：热水浴使CMC-Na 溶于60 mL蒸馏水中配成0.5%CMC-Na溶液后，边搅拌边加入1 800 mg黄嘌呤。

1.2.2 动物的分组为避免雌激素的影响，选择雄性鼠制备模型。SD 雄性大鼠30 只，分笼饲养，每笼6 只，自由进食，并定期清洁、消毒。适应性饲养5 d 后随机分为5 组，分别为空白对照组、模型组、别嘌醇阳性对照组、虎尾轮低剂量组和虎尾轮高剂量组，每组6只。

1.2.3 大鼠高尿酸血症模型建立利用腹腔注射黄嘌呤联合皮下注射氧嗪酸盐的改良方法[9-10]。除正常组外的4组大鼠腹腔注射300.00 mg/kg黄嘌呤0.5% CMC-Na 溶液，再皮下注射100.00 mg/kg 氧嗪酸钾。正常对照组大鼠腹腔注射0.5%CMC-Na溶液，后皮下注射0.5%CMC-Na溶液。

1.2.4 灌胃给药制备SD 大鼠高尿酸血症模型60 min 后，正常对照组与模型组灌胃给予10.00 mL/kg 生理盐水，阳性对照组灌胃5.00 mg/kg 别嘌醇。虎尾轮成人用量为50 g[8]，根据体表面积比换算，虎尾轮低剂量组以5.25 g/kg 虎尾轮水煎液灌胃，高剂量组以21.00 g/kg虎尾轮水煎液灌胃。

1.2.5 采血与尿酸测定灌胃给药120 min 后用3%戊巴比妥钠麻醉大鼠，股动脉取血2 mL，待凝血后离心，2 500 r/min，3 min，取上层血清200 μL，用尿酸测定试剂盒测定血清尿酸水平。

1.3 统计学分析

采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析。所有计量资料用±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

各组大鼠干预前后，毛色、进食、活动等一般状况并未见明显改变。模型组的血清尿酸浓度为(426.07±107.93) μmol/L，与正常对照组相比升高(P＜0.01），提示氧嗪酸钾与黄嘌呤联合诱导的高尿酸血症模型效果良好。与模型组相比，别嘌醇阳性对照组、虎尾轮低、高剂量组大鼠血清尿酸浓度均下降(均P＜0.01）。虎尾轮低剂量组与别嘌醇阳性对照组相比，血清尿酸浓度升高(P＜0.05），虎尾轮高剂量组与别嘌醇阳性对照组相比，差异无统计学意义(P=0.157）。见图1。

图1 虎尾轮对高尿酸血症大鼠血清尿酸的影响(n=6)

3 讨论

本研究结果表明虎尾轮水煎液可大幅度降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸浓度，临床上使用的西药如别嘌醇和苯溴马隆等均具有肝毒性，会损害肝脏功能，而虎尾轮对肝脏有一定的保护作用，因此针对肝损伤合并高尿酸血症，虎尾轮可能有更大的应用前景[11-12]。

尿酸是黄嘌呤和次黄嘌呤在人体内通过黄嘌呤氧化酶催化产生的代谢产物，主要通过肾脏排泄。长期的尿酸产生过多以及排出下降，导致尿酸代谢紊乱，从而导致高尿酸血症。尿酸水平的上升，促使尿酸钠晶体沉积在关节中，引发痛风性关节炎。目前治疗高尿酸血症的药物主要分为减少尿酸生成与增加尿酸排泄两大类。黄嘌呤氧化酶是生成尿酸的关键酶，别嘌醇和非布司他等药物抑制黄嘌呤氧化酶，从而降低血清尿酸水平；苯溴马隆、丙磺舒作用于肾近曲小管的尿酸盐转运蛋白1，拉布立酶作为外源性尿酸氧化酶，均可以促进尿酸的排泄并降低尿酸[2,4]。

虎尾轮含有木犀草素、白桦脂醇、水飞蓟宾等多种化合物[7，13]，Pauff等[14]研究表明木犀草素可以竞争性抑制黄嘌呤氧化酶活性，木犀草素结合黄嘌呤氧化酶的活性位点，很可能使其苯并吡喃基团的苯二酚抑制钼辅助因子，从而抑制黄嘌呤氧化酶。同时，木犀草素还可以降低尿酸盐转运蛋白1[15]，抑制尿酸在肾小管中的重吸收，从而促进尿酸排泄。Yong 等[16]研究发现，白桦脂醇对黄嘌呤氧化酶的半抑制浓度比别嘌醇更低，Pauff等[14]研究验证了水飞蓟宾对黄嘌呤氧化酶的混合型抑制作用。因此我们推测虎尾轮降低血清尿酸的浓度是通过其含有的多种化合物的共同作用，减少尿酸的生成，并增加尿酸的排泄。本研究样本量较小并且治疗组样本个体差异较大。将在后续实验中增加样本量和虎尾轮剂量组，进一步的探讨虎尾轮有效成分的分离提纯以及降低尿酸水平的确切机制。

本研究通过黄嘌呤联合氧嗪酸钾诱导建立了高尿酸血症大鼠模型，首次验证了虎尾轮具有降低血清尿酸水平的作用，为后续研究提供了基础，提示虎尾轮对高尿酸血症以及痛风的治疗可能具有显著的潜在价值。