不同产地蓬蘽中农药残留和重金属元素检测分析*

蓝 艳 方蓓倩 林 娜 雷后兴 张晓芹#

1 丽水市中医院 浙江 丽水 323000

2 衢州市食品药品检验研究院 浙江 衢州 324000

蓬蘽为蔷薇科悬钩子属植物蓬蘽（Rubus hirsutus Thunb.）的根或全株[1]，畲族又名布袋扭、牛奶扭、扭叶等，具有清热解毒、祛风除湿之功效。国内目前对蓬蘽的研究相对较少，主要涉及蓬蘽的本草学考证[2]、果实及叶片营养成分分析[3]、组培及快繁[4]、临床疗效[5]等研究。朱月娇[5]根据临床经验证实，蓬蘽对于哺乳期乳痈具有较好的疗效。对蓬蘽的组培进行研究，发现利用蓬蘽茎段和叶片均可达到较好的繁殖效果[6]，蓬蘽不仅可做药用，也具有丰富的营养价值，一旦开发利用，成熟的组培技术可保证蓬蘽资源的大规模栽培。目前尚未有人对蓬蘽的安全性应用进行研究，本文基于液质联用和电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）法，建立了蓬蘽中农药残留及重金属的检测方法，为蓬蘽的应用安全性提供一定的参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器：Waters XEVO TQ-XS超高效液相色谱三重四级杆质谱联用仪（美国沃特斯公司）；Agilent 7900型电感耦合等离子质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Mμltiwave PRO微波消解仪（安东帕公司）；mlli-Q Advab-tage A10系列超水水处理系统（美国MERK ml-LIPORE公司）；XP-205型十万分之一分析天平（梅特勒）；移液器（德国Eppendorf公司）。

1.2 材料：2.5μg/ml镉（Cd）、5.0μg/ml砷（As）、5.0μg/ml铅（Pb）、125μg/ml铜（Cu）多元素标准溶液（批号：20D3154）和100μg/ml金（Au）标准溶液（批号：215125001-01）购自国家有色金属及电子材料分析测试中心；10μg/ml 汞（Hg）标准溶液（批号：10-125HGY2）以及 100μg/ml 铟（In）、铋（Bi）、铽（Tb）、钪（Sc）、锗（Ge）、锂（Li）、镥（Lu）、铑（Rh）内标液（批号：5-221MKBY2）购自Agilent科技有限公司；30种农残混合对照品（批号：2190538），浓度均为100μg/ml，均购自迪马科技有限公司；浓硝酸（优级纯，默克公司）；超纯水由二次去离子水经mlli-Q超纯水处理系统而得（电阻率≥18.2 MΩ）。

1.3 样本：10批蓬蘽样品经丽水市中医院中药饮片验收小组鉴定为蔷薇科悬钩子属植物蓬蘽（Rubus hirsutus Thunb）的全草。样品采集地点时间信息：宁波市余姚市四明山（2019.8.13）、绍兴市越城区绍兴第七人民医院（2018.11.25）、衢州市开化县卫生学校（2019.3.18）、金华市兰溪市新宅村（2019.10.24）、丽水市莲都区余岭村里山自然村（2018.3.24）、丽水市青田县祯旺乡尖山村仰天湖（2019.10.25）、丽水市缙云县樊庄村（2019.10.25）、舟山市普陀区虾峙镇沙峧村（2018.9.28）、温州市乐清市北雁荡山（2018.10.18）、金华职业技术学院百草园（2018.9.2）。

2 方法与结果

2.1 蓬蘽中农药残留的测定：分述如下。

2.1.1 色 谱 条 件 ：watersACQUITYUPLC®BEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）色谱柱，柱温40oC，流动相A：0.1%甲酸溶液（含5mmol/L甲酸铵），B：乙腈-0.1%甲酸溶液（含5mmol/L甲酸铵）（95：5），进样体积1μl,流速0.3ml/min，梯度洗脱：0～1min，95%A，1～12min，95%A→75%A，12～14min，75%A→45%A，14～16min，45%A→95%A。

2.1.2 质谱条件：电喷雾离子源；多反应监测正离子扫描模式（MRM），毛细管电压2500V；脱溶剂气温度500℃；去溶剂气流速6L/min；喷雾器压力7.0Bar；分析仪LM分辨率1：3.00HM；碰撞气体流量：0.15ml/min。

2.1.3 混合对照品溶液的制备：精密量取禁用农药混合对照品溶液（已标示各相关农药品种的浓度）0.5ml，置50ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，再取1.00ml，置10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得（100ng/ml）。

2.1.4 基质混合对照溶液的制备：取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。分别精密量取空白基质溶液1.0ml（7份），置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6ml，分别加入混合对照品溶液（L0）10µl、20µl、50µl、100µl、150µl、200µl，加乙腈稀释至1ml，涡旋混匀，即得1ng/ml（L1）、2ng/ml（L2）、5ng/ml（L3）、10ng/ml（L4）、15ng/ml（L5）、20ng/ml（L6）系列浓度混合对照溶液。

2.1.5 供试品溶液的制备：取供试品粉末（过三号筛）3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30min，精密加入乙腈15ml，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5min，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末（4：1）7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（500次/分）3min，于冰浴中冷却10min，离心（每分钟4000转）5min，取上清液9ml，置预先装有净化材料的分散固相萃取净化管（无水硫酸镁900mg，N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化碳黑90mg）中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（500次/分）5min使净化完全，离心（每分钟4000转）5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约1.0ml，加乙腈稀释至2.0ml，涡旋混匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.6 标准曲线的绘制：取2.1.4中L1～L6,分别进样1μl,测定，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，得到线性关系，测定的相关系数均＞0.99。

2.1.7 精密度试验：取10ng/ml的混合对照品溶液，按“2.1.1”色谱条件连续进样6次，测定，各农药指标的峰面积精密度均＜9%。

2.1.8 重复性试验：精密称取同一份样品3g，平行取样6份，按“2.1.1”色谱条件测定，除涕灭威、杀虫脒、甲基异柳磷外，其余农药的含量RSD均＜7%。

2.1.9 稳定性试验：取同一份样品3g，分别在0、2、4、6、8、12、16、24h测定，结果表明各农药的稳定性RSD均＜7%。

2.1.10 回收率试验：取已知含量的样品6份，分别精密加入等量的标准品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，结果除杀虫脒外，其余各农药的平均加样回收率为69.133%～93.167%，除涕灭威、杀虫脒、甲基异柳磷外，其余农药加样回收率的RSD均＜10%。

2.1.11 样品测定：按“2.1.5”项下制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定。结果10份样品均未检出农药残留。

2.2 重金属及有害元素含量的测定：分述如下。

2.2.1 仪器参数：射频功率：1.5kW；采样深度：10mm；等离子气（Ar）流量：15.0L/min；辅助气（Ar）流量：0.8L/min；载气（Ar）流量：0.7L/min；雾化室温度：2℃；氦碰撞模式：He气流量：3.0ml/min；蠕动泵：0.3rps；测量点数/峰：3；数据采样模式：跳峰采集模式；重复次数：3。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密量取上述Pb、As、Cd、Cu多元素标准溶液2ml，Hg标准溶液(1μg/ml)2.5ml至50ml量瓶中，用5%硝酸稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含 Pb、As 0.2μg,含 Cd 0.1μg，含 Cu 5μg，含 Hg 0.05μg的混合对照品溶液①。分别量取混合对照品溶液①0.2ml，0.5ml，1.0ml，2.5ml，5.0ml，至 50ml量瓶中，用5%硝酸稀释得到系列标准混合溶液。

2.2.3 内标溶液的制备：取1.00ml含100μg/ml In、Bi、Tb等元素内标液于100ml容量瓶中，用5%硝酸稀释至刻度，混匀即得。

2.2.4 供试品溶液的制备：精密称定样品0.2g置于消解罐中，加入5ml硝酸，置赶酸板上120℃预消解20 min，冷却后，密封，微波消解。冷却后将消解液转移至50ml容量瓶中，加入金标准溶液（1μg/ml）200μl，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.5 空白溶液的制备：除不加200μl金元素溶液之外，其他均同“2.2.4”供试品溶液制备。

2.2.6 标准曲线及检出限：取“2.2.2”中已配好的线性用标准溶液分别与内标溶液同时进样，按“2.2.1”项下测定，根据各元素的响应值（CPS），以各元素的浓度为横坐标，各元素与相应内标元素的CPS的比值为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线及检出限结果见表1。

2.2.7 精密度试验：取标准溶液及内标溶液，连续进样6次，Cu、As、Cd、Hg、Pb各元素的RSD均＜4%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 重复性试验：取同一样品，平行进样6份，按“2.2.1”项测定，Cu、As、Cd、Hg、Pb各元素的RSD均＜5%，表明方法重复性良好。

2.2.9 稳定性试验：取同一样品，按照“2.2.4”项制备供试品溶液，按“2.1.1”项分别在0、2、4、6h测定，Cu、As、Cd、Hg、Pb各元素的RSD均＜4%，表明方法稳定性良好。

2.2.10 加样回收率试验：取已知含量的样品6份，分别精密加入等量的对照品溶液，按照“2.2.4”项下制备，按“2.1.1”项下测定，计算得到各元素的加样回收率在69.62%～108.64%，Pb元素的RSD为6.17%，其余4个元素的RSD均4%。

2.2.11 样品测定：精密称定各批次样品0.2g，按“2.2.4”项下制备样品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算各元素质量分数（见表2）。10批样品中，Cu的含量范围为2.9602～12.6669μg·g-1，As的含量范围为0.0855～1.0225μg·g-1，Cd的含量范围为 0.0405～0.2633μg·g-1，Hg的含量范围为 0.0277～0.0829μg·g-1，Pb的含量范围为0.3579～4.0298μg·g-1。

3 讨论

本文基于QuEChERS-三重四级杆高效液相色谱仪建立了蓬蘽中30种农药残留的含量测定方法，除了杀虫脒加样回收率尚未达到60%以外，其余29种农残的重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，可为蓬蘽农药残留的测定提供参考。基于ICP-MS建立了蓬蘽中5种重金属元素的含量测定方法，结果建立的方法重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，可为蓬蘽重金属或有害元素的测定提供参考。

研究结果表明，蓬蘽未检出农药残留；不同产区蓬蘽中均检测到5种重金属，且不同产地其所含中间数含量差异明显。根据《中国药典》2020版规定，中药中重金属及有害元素限度为：Cu≤20mg/kg，As≤2mg/kg，Cd≤0.3mg/kg，Hg≤0.2mg/kg，Pb≤5mg/kg，由表2可知，蓬蘽中重金属含量均符合要求。本研究所用试验材料均为野生采集，并不存在人为施肥或喷洒农药的情况，因此，蓬蘽中检测出的重金属可能来自环境污染或土壤污染，这提示我们土壤中重金属含量在药材中可进行富集，因此在种植农作物或药材时，应按照标准操作规程，严格控制农药及肥料的使用[7，8]。