SNCA基因rs356219和rs7684318位点多态性与帕金森病发病风险的Meta分析

李泽，史永久，韩崇旭

(1.大连医科大学，辽宁 大连 116000；2.江苏省苏北人民医院医学检验科，江苏 扬州 225001)

帕金森病(Parkinson′s disease，PD)是全世界仅次于阿尔茨海默病的慢性神经退行性疾病，主要表现为运动障碍(震颤、强直、步态不稳)，认知障碍和(或)精神障碍(抑郁、焦虑、妄想、冷漠、冲动等)[1]。PD的发病年龄多为60岁以上，发病率为每年(8～18)/10万，有研究预测未来20年内PD患病率会增加2倍[2]。PD主要是多巴胺神经元变性及路易小体形成为主的疾病，目前发病机制尚未完全阐明，但研究发现遗传因素[如α-突触核蛋白(α-synuclein,SNCA/α-syn)基因、人帕金森蛋白(Parkinson′s disease protein，PARK)7基因、PARK2基因等]、环境因素以及衰老均与PD的发病相关[3]，确定PD的危险因素有利于延缓疾病发作、减缓其进展。

SNCA基因,又称为PARK1[4]，定位于染色体4q22～4q23上,包括6个外显子，该段基因表达与PD相关，其编码的产物之一为α-syn，是一种长度为140个氨基酸的高度保守的蛋白质。α-syn在正常情况下是稳定的α-螺旋结构，可参与正常线粒体和溶酶体功能、突触传递和神经递质释放[1-2]。突变型α-syn会改变本身构象而发生聚集，其异常积累与DNA损伤和神经毒性有关，并可导致神经元的变性[5]。α-syn是路易小体主要的组成成分，是散发性PD的病理标志[6-7]。编码α-syn的SNCA基因已被证明可引起罕见常染色体显性PD。多项研究提示，SNCA基因多个区域的多态性与散发性PD易感性相关[8-9]。rs356219位于SNCA基因片段3′端，rs7684318位点在第4号内含子中，是近年来研究较多的SNCA基因多态性位点，rs356219、rs7684318与PD易感性显著相关，但这一观点尚未统一。本研究利用Meta分析评价SNCA基因中rs356219、rs7684318与人类PD发病风险的相关性。

1 资料与方法

1.1文献检索 检索PubMed、EMBASE、Cochrane、中国知网、万方数据库中涉及SNCA基因rs356219和rs7684318位点多态性与PD相关的原始文献。中文关键词：“帕金森病”或“PD”“ α-突触核蛋白”或“SNCA”或“PARK1”“基因多态性”或“点突变”“rs356219和(或)rs7684318”。英文检索关键词：“rs356219 and(or)rs7684318”；Parkinson′s Disease or PD；SNCA or α-synuclein or alpha-synuclein or PARK1。检索方式按照主题词和自由词组合形式；要求语种为中文或英文；检索时间为1990年1月1日至2019年7月15日。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准 ①所有纳入的文献为公开发表的病例对照研究；②研究SNCA(rs356219或rs7684318)基因多态性与PD的相关性；③PD组纳入患者符合英国脑库PD的临床诊断标准[10]；④直接提供或间接可计算rs356219、rs7684318基因型和等位基因数据，以计算OR值；⑤对照组与PD组性别、年龄相匹配，符合哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg,HWE)。

1.2.2排除标准 ①综述、病例报道或会议文献；②非英文或中文文献；③基因型或等位基因数据不全；④不符合HWE平衡；⑤动物实验或细胞实验。

1.3质量评价 采用纽卡斯尔-渥太华量表(Newcastle-Ottawa scale,NOS)评估纳入文献的质量，内容包括研究人群选择、组间可比性以及暴露因素3个方面。NOS评分为0～9分，≥5分为高质量文献[11]。

1.4数据提取 数据提取由两名研究员独立完成，收集所有符合要求的文献信息，包括作者信息、发表年限、地区、PD组与对照组例数、等位基因数据、基因型数据、基因分型所用的方法学、是否符合HWE。有争议的问题通过达成共识或咨询第三位研究员解决。

1.5统计学方法 采用Stata 12.0统计软件计算SNCA(rs356219和rs7684318)的等位基因和各基因型的比值比(odds ratio，OR)及95%置信区间(confidence interval,CI)，采用Z检验测定OR值，P<0.05为差异有统计学意义。采用Q检验和I2评估各研究间的异质性，若I2>50%，P<0.05，采用随机效应模型；反之，采用固定效应模型。通过亚组分析和敏感性分析评估异质性的来源和结果的稳定性。采用 Begg′s检验分析发表偏倚，P<0.05表明存在发表偏倚。

2 结 果

2.1纳入文献基本特征 共检索到可能相关文献98篇，重复文献29篇。通过初步阅读文献题目与摘要排除40篇，剩余文献进行全文精读，筛除不符合要求文献13篇，最终纳入16项病例对照研究，包括7 318例PD患者和8 442例健康对照，见图1。所有纳入文献NOS评分≥5分，所有研究基因型频率和等位基因频率见表1～4。

表1 纳入研究的SNCA rs356219基因型频率

图1 文献筛选流程图

2.2SNCA rs356219基因多态性与PD发病的相关性 rs356219基因多态性与PD相关性评估的结果显示，rs356219所有遗传模型均与散发性PD显著性相关(P<0.01)，见表5。进一步通过种族进行亚组分析，无论是亚洲人群或高加索人rs356219基因多态性均与PD易感性显著相关，见图2。

图2 rs356219等位基因G vs A森林图

2.3SNCA rs7684318基因多态性与PD发病的相关性 SNCA基因rs7684318位点汇总分析结果显示，rs7684318位点多态性增加了东亚人PD发病的风险(P<0.01)，见表6。等位基因C vs T森林图见图3。

图3 rs7684318等位基因C vs T森林图

表6 rs7684318基因多态性与PD相关性的Meta分析结果

2.4发表偏倚与敏感性分析 按顺序依次排除一项符合条件的研究进行敏感性分析，结果显示排除任何研究对rs356219、rs7684318与PD风险之间的关联均无明显影响，见图4、5。Begg′s检验结果显示，在各种遗传模型中Begg′s检验中均无统计学意义(P>0.05)(表5、6)，纳入研究无潜在发表偏倚(图6、7)。

图4 rs356219基因型AG vs AA Begg′s检验

图5 rs7684318基因型TC vs TT Begg′s检验

3 讨 论

PD是一种老年人常见的神经系统变性疾病，常表现为运动障碍、认知障碍和精神障碍等症状。导致PD的易感因素较多，包括环境、基因、性别、年龄、高血压、高血脂、糖尿病、农药接触史等[25]。虽然PD的具体发病机制尚不明确，但目前已明确遗传因素在家族性PD中起重要作用。Koros等[26]通过病例对照和全基因组关联分析研究提示，遗传因素与散发性PD有关。自Polymeropoulos等[27]发现SNCA基因编码α-syn导致家族性PD以来，SNCA基因与PD的关联性得到了深入研究。Mata等[28]研究证明，与发病风险相关的等位基因会通过累积效应增加体内α-syn的水平,α-syn异常积累不仅与DNA损伤和神经毒性有关，还可干扰调节基因表达的表观遗传过程[29]。有研究证明，SNCA-REP1(replication protein)等位基因在转基因小鼠模型中增加人SNCA基因的转录RNA和蛋白质水平[30]。α-syn是路易小体在神经退行性病变的主要成分，SNCA基因的聚集在PD发病中起重要作用[31]。

表2 纳入研究的SNCA rs7684318基因型频率

表3 纳入研究的SNCA rs356219等位基因频率

表4 纳入研究的SNCA rs7684318等位基因频率

图7 rs356219(G vs A)等位基因模型下的汇总OR系数的敏感性分析

近年来，在SNCA基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)方面取得了很大进展，目前已有多种SNP位点被研究证实与PD发病具有密切联系，如SNCA基因rs356219、rs356220、rs894278、rs2736990、rs356182等。但由于地域、人种以及样本量的不同，部分SNP位点与PD发病风险的关联性尚未得到统一结论。rs356219是SNCA基因一种常见的单核苷酸突变位点，Wider等[12]研究发现SNCA rs356219突变与高加索人群PD发病风险显著性相关(G/A,OR=1.40，95%CI1.24～1.58)，Zheng等[8]在中国人群中对该位点基因多态性进行了研究，结果显示该位点多态性与中国汉族PD发病风险相关(G/A,OR=1.26,95%CI1.03～1.53)。但rs356219多态性对PD发病风险的研究尚存在争议，Miyake等[20]研究表明，在日本rs356219变异与PD无关联。另外，多数研究样本量较小，检验效能相对偏低。

本研究全面分析了不同人群中SNCA基因rs356219位点变异与PD的相关性，共纳入11项研究，包括4 995例PD患者和5 180例健康对照。结果显示，5种遗传模型均显示rs356219多态性与PD易感性明显相关，表明G等位基因增加了PD的发病风险。为了明确人种特异性对研究的影响，进一步亚组分析显示，rs356219多态性在亚洲人种和高加索人种中均增加了PD的发病风险。

本研究同时分析rs7684318位点多态性与PD的关系，与常见SNCA基因SNP变异不同，rs7684318位于SNCA基因内含子的位置，对该位点的研究相对较少，且研究对象以亚洲人群为主。刘彬等[24]采用SNaPshot的方法对云南汉族地区部分PD患者与rs7684318基因多态性的关联进行研究，结果显示此位点与PD发病不相关。与之相反，Zheng等[8]的研究提示此位点是PD发病的危险因子。本研究共纳入5篇符合要求的文献，共2 323例PD和3 262例健康对照。Meta分析结果显示，rs7684318位点等位基因C增加了东亚人群PD的风险(C vs T，OR=1.459，95%CI1.218～1.747,P<0.001)。

本Meta分析严格遵守文献纳入、排除标准，且纳入文献NOS评分均≥5分，从而确保了文献质量。本研究汇总不同地域的文献结果，以提高统计效力，并无显著偏倚。此外，对纳入文献进行敏感性分析，排除任意一条文献均不会对原结论产生影响，使本研究结论更有说服力。但本研究仍存在一定的局限性：①由于文献信息不足，一些疾病相关特征未纳入分析，如发病年龄、运动障碍、认知功能和暴露因素或药物等，PD发病机制复杂，有研究报道以上因素可能是增加或降低PD的风险因素[31-32]。②由于文献基因型或等位基因数据不完整，部分SNCA基因多态性与PD相关的研究未纳入研究[33-35]。③未考虑到基因-基因[36]或基因-环境的相互作用[37]，可能会对结果产生一定影响。④种族分析只包括来自高加索人群和亚洲人群的数据，因此结果仅适用于这些群体。⑤文献检索仅限于英语和汉语语种，因此存在语种限制的可能性。

综上所述，无论是亚洲人群还是高加索人群SNCA 基因rs356219位点多态性均与散发性PD相关。rs356219的等位基因G、基因型GG、AG增加了散发性PD的风险，rs7684318位点多态性与东亚人群PD发病相关，该位点等位基因C、基因型CC和TC增加了散发性PD的发病风险。但考虑到种族特异性、研究方法设计、样本量大小等方面的差异以及基因-基因或基因-环境的相互作用，SNCA基因rs356219和rs7684318多态性与PD发病风险的关系尚不能得到肯定的结论，还需要在不同种族、不同地域情况下进行大样本、多中心的研究。