炎症细胞因子及T淋巴细胞亚群评估川崎病患儿价值分析

2021-03-26李惠丽陈伟明林若萍林俊荣杨坤祥黄雪霞

中国医学创新 2021年20期

李惠丽陈伟明林若萍林俊荣杨坤祥黄雪霞

【摘要】目的：探討分析炎症细胞因子及T淋巴细胞亚群评估川崎病患儿的价值。方法：选取2019年1月-2020年10月本院儿科收治的60例川崎病患儿作为试验组，选取同时期就诊的60例细菌感染引起的发热患儿作为对照A组，选取同时期60例健康体检的儿童作为对照B组，均给予炎症细胞因子、T淋巴细胞亚群检测。比较三组T淋巴细胞亚群指标、炎性因子指标水平，分析川崎病患儿不同时期与T淋巴细胞亚群指标、炎症因子指标水平的相关性。结果：试验组急性期CD4+、CD4+/CD8+均较对照A组、对照组B组显著提高，CD3+较对照A组、对照组B组显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。试验组急性期IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均较对照组A组、对照B组显著提高，且对照组A组IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均较对照组B组显著提高（P<0.05）。急性期、亚急性期、恢复期，川崎病患儿CD3+指标水平不断提高，CD4+、CD4+/CD8+、IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均逐渐降低（P<0.05）。经Pearson线性相关分析，川崎病患儿CD3+水平与疾病分期呈正相关（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+与疾病分期均呈负相关（r=0.-721、-0.605，P<0.001），川崎病患儿IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平与疾病分期均呈负相关（r=-0.781、-0.514、-0.664、

-0.719、-0.652、-0.817，P<0.05）。结论：川崎病患儿T淋巴细胞亚群、炎症因子指标水平存在异常，且与其病情的发展显著相关，可作为鉴别川崎病辅助依据，也可作为评估川崎病发展和恢复程度的参考指标。

【关键词】川崎病 T淋巴细胞亚群免疫功能

Evaluation of the Value of Inflammatory Cytokines and T Lymphocyte Subsets in Children with Kawasaki Disease/LI Huili， CHEN Weiming， LIN Ruoping， LIN Junrong， YANG Kunxiang， HUANG Xuexia. //Medical Innovation of China， 2021， 18（20）： 0-017

[Abstract] Objective： To explore the value of analyzing inflammatory cytokines and T lymphocyte subsets in evaluating children with Kawasaki disease. Method： From January 2019 to October 2020， 60 children with Kawasaki disease admitted to the clinical pediatrics department of our hospital were selected as the experimental group， and 60 children with fever caused by bacterial infection who visited the same period were selected as the control group A， and the same period was selected. Sixty children under physical examination were used as the control group B. They were all tested for inflammatory cytokines and T lymphocyte subgroups. The three groups of T lymphocyte subgroup index levels and inflammatory factor index levels were compared. Children with molecular Kawasaki disease were compared with T lymphocytes at different periods. Correlation between the level of lymphocyte subsets index and the level of inflammatory factors. Result： The acute phase CD4+ and CD4+/CD8+ in the experimental group were significantly higher than those in the control group A and the control group B， and the CD3+ was significantly lower than that of the control group A and the control group B. The differences were statistically significant （P<0.05）. The acute phase IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR of the experimental group were significantly higher than those of the control group A and the control group B， and IL-6， TNF-α， CRP， IFN -γ， MIF and ESR of the control group A group were significantly higher than those in the control group B （P<0.05）. In the acute， subacute， and recovery phases， the CD3+ index levels of children with Kawasaki disease continued to increase， and CD4+， CD4+/CD8+， IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR all gradually decreased （P<0.05）. Pearson linear correlation analysis， CD3+ in children with Kawasaki disease was positively correlated with disease stage （r=0.526， P<0.001）， CD4+， CD4+/CD8+ and disease stage were all negatively correlated （r=-0.721， -0.605， P<0.001）， the levels of IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR in children with Kawasaki disease were negatively correlated with the disease stage （r=-0.781， -0.514， -0.664， -0.719， -0.652， -0.817， P<0.05）. Conclusion： There are abnormalities in T lymphocyte subgroups and inflammatory factors in children with Kawasaki disease， and they are significantly related to the development of the disease， they can be used as an auxiliary basis for distinguishing Kawasaki disease， and can also be used as a reference index for evaluating the development and recovery of Kawasaki disease.

[Key words] Kawasaki disease T lymphocyte subsets Immune function

First-author’s address： Huizhou First Maternal and Child Health Hospital， Huizhou 516000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.20.004

川崎病是临床上儿科常见病和多发血管炎性疾病，患儿表现为发热、颈部淋巴结肿大、眼球结膜充血、皮疹、口干等临床症状[1]。川崎病属于自限性疾病，虽然预后良好，但若川崎病患儿不能及早诊断并给予有效的治疗，极易诱发冠状动脉损害，严重的甚至诱发心肌梗死、猝死，威胁患儿的生命安全[2]。目前临床上对于川崎病的发病机制尚未明确，但是有学者认为其与T淋巴细胞介导的免疫反应和炎症因子诱发的炎症密切相关，参与到川崎病的发病、进展及预后[3]，本文旨在探讨炎症细胞因子联合T淋巴细胞亚群评估川崎病患儿价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年1月-2020年10月临床儿科收治的60例川崎病患儿作为研究对象（试验组），纳入标准：经临床儿科专科、影像学、实验室检查均符合川崎病的诊断标准[4]。排除标准：因病原体感染引起的发热患儿;血液系统疾病患儿;发病前60 d使用过免疫调节药物患儿;先天性遗传病患儿。选取同时期就诊的60例细菌感染引起的发热患儿作为对照A组，纳入标准：实验室检查确认为细胞感染，影像学和实验室检查排除川崎病的可能，没有川崎病疾病史。排除标准：心血管疾病引起的感染损害患儿;器质性心脏疾病患儿。另选取同时期60例健康体检的儿童作为对照B组，纳入标准：儿童生长发育正常，各项身体指标检查正常，无相关疾病。排除标准：体检资料不完整;心血管疾病引起的感染损害患儿;器质性心脏病患儿。研究对象家长签署知情同意书，自愿参与本研究，本研究开展前经医院伦理学委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 川崎病患儿分期标准发病1～11 d为急性期，发病11～21 d为亚急性期，发病21～60 d为恢复期[4]。

1.2.2 检测方法（1）T淋巴细胞亚群：检测患儿CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平，检测方法为Cell Signaling Technology（CST）提供的流式细胞术。（2）炎症因子：检测患儿白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）、干扰素γ（IFN-γ）、巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）、红细胞沉降率（ESR）水平;IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF采用酶联免疫吸附法，CRP采用免疫比浊法，ESR采用魏氏法;试剂为武汉艾迪抗生物科技有限公司提供的试剂盒。（3）血样采集：所有纳入研究的对象均采集空腹静脉血5 mL放置于肝素抗凝管中，保存在-70 ℃冰箱里，川崎病患儿于急性期、亚急性期及恢复期分别采集血样保存待测。

1.3 观察指标比较三组研究对象T淋巴细胞亚群指标水平、炎性因子指标水平;分析川崎病患儿急性期、亚急性期、恢复期与T淋巴细胞亚群、炎性因子指标水平的相关性。

1.4 统计学处理采用SPSS 22.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验;相关性分析采用Pearson线性相关。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料比较三组性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

2.2 三组T淋巴细胞亚群指标水平比较试验组急性期CD4+、CD4+/CD8+水平均较对照A组、对照组B组显著提高，CD3+水平较对照A组、对照组B组显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3 三组炎性因子指标水平比较试验组急性期IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均较对照组A组、对照B组显著提高，且对照组A组IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均较对照组B组显著提高，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.4 川崎病患儿不同疾病分期与T淋巴细胞亚群指标水平相关性分析急性期、亚急性期、恢复期，川崎病患儿CD3+水平不断提高，CD4+、CD4+/CD8+均水平逐渐降低，差异均有统计学意义（P<0.05），见表4。经Pearson线性相关分析：川崎病患儿CD3+与疾病分期呈正相关（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈负相关（r=0.-721、-0.605，P<0.001）。

2.5 川崎病患儿不同疾病分期的炎性因子指标水平比较急性期、亚急性期、恢复期，川崎病患儿IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均逐渐下降，差异均有统计学意义（P<0.05），见表5。

3 讨论

临床上对于川崎病的病因及发病机制尚未有明确的定论，无典型的实验室诊断指标和临床症状，其与细菌感染性发热难以鉴别，极易造成误诊、漏诊，延误治疗时间，增加发生冠状动脉损害、获得性心脏病的风险，给患儿家长带来沉重的经济负担[5-6]，因此，探究具有诊治价值的实验室指标对于川崎病的诊断、治疗及预后评估具有积极意义。

3.1 T淋巴细胞亚群对川崎病诊治的影响 T淋巴细胞是人体免疫反应的重要组成部分，机体的免疫功能、状态与T淋巴细胞水平密切相关，机体正常情况下淋巴细胞可维持在一定范围内，但当机体出现异常状态时则会引发一系列病理变化，造成机体免疫系统紊乱[7]，依据表面分化抗原的区别，可以把T淋巴细胞分类成CD4+和CD8+两个亚群，而CD4+抗原为辅助T细胞与效应T细胞的表面标志，辅助T细胞通过多种细胞因子的释放从而激活辅助B细胞与效应T细胞，在机体中可对炎症细胞毒具有杀伤效果，同时还能够抵抗炎症介质[8]。CD8+属于免疫抑制效应细胞，其抗原为抑制T细胞与细胞毒T细胞的表面标志，抑制T细胞释放抑制因子从而对B细胞以及效应T细胞的活化作用起到抑制效果，当水平出现下降过度时可对免疫系统形成刺激，使得CD4+/CD8+水平升高，造成免疫调节作用失衡，免疫系统出现损伤[9]。另外文献[10]研究认为，CD8+细胞表达下降时有可能会浸润急性期川崎病患儿的血管壁，使得免疫系统出现异常。本研究结果显示：川崎病患儿的CD4+、CD4+/CD8+水平均显著提高，并且处于急性期的患儿CD4+、CD4+/CD8+水平异常升高，CD3+水平在急性期最低，差异均有统计学意义（P<0.05）;经Pearson线性相关分析：川崎病患儿CD3+与疾病分期呈正相关（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+与疾病分期均呈负相关（r=0.-721、-0.605，P<0.001），表明川崎病患儿出现免疫抑制功能紊乱，免疫耐受失去平衡，CD4+淋巴细胞亢奋，与川崎病的发病密切相关，尤其是急性期的川崎病患儿T淋巴细胞数量和状态发生变化显著，促使激活机体的免疫系统，诱发血管炎、免疫损伤及冠状动脉损害[11-12]，因此，T淋巴细胞指标水平的变化可辅助评估川崎病的发病、进展及预后。

3.2 炎症因子对川崎病诊治的影响炎症因子可增强免疫反应的程度，当川崎病患儿处于急性期时，T淋巴细胞的活跃性增强，激活免疫功能，并且B淋巴细胞被激活，产生和释放大量的炎症因子，细胞因子的表达过度增加，机体产生一系列的免疫应答反应，极易出现免疫应答损伤的同时损伤冠状动脉[13]。IL-6属于炎症细胞因子，具有刺激免疫应答和诱发炎症反应的作用，但是过度表达导致辅助性T细胞17/调节性T细胞比例失去平衡，免疫功能进一步紊乱，患儿产生免疫球蛋白耐药、血管炎反应，并且与疾病的进展和发展程度呈正相关[14-15]。CRP、ESR与川崎病患儿的病情程度呈正相关，主要用于疾病感染急性期的评估，也是川崎病诊断、治疗评估的重要指标，经过免疫球蛋白等治疗炎性因子水平可显著降低[16]。IFN-γ主要产生于活化T细胞中，其生物活性可对血管内皮细胞、巨噬细胞、星状细胞、单核细胞以及皮肤成纤维细胞等的MHCⅡ类表达起到诱导作用，从而参与到特异性的免疫识别过程以及抗原提呈，此外还能够上调内皮细胞的CD54表达，辅助诱导TNF同时提高巨噬细胞对病原微生物的杀伤作用。IFN-γ作为Th细胞功能水平的代表性因子，常被用于自身免疫性疾病的检测中[17]。TNF-α属于多肽调节的促炎因子，具备广泛生物活性，通过对内皮细胞黏附因子表达以及活化的诱导，促进中性粒细胞趋化。急性期川崎病患儿TNF-α水平过度表达，使得血管炎症恶化，造成血管壁广泛损伤[18]。本研究结果显示，川崎病患儿的IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均显著提高，并且急性期、亚急性期、恢复期的川崎病患儿IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均逐渐下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。与文献[19-20]研究结论基本一致，可作为鉴别川崎病和感染性发热的辅助依据，也可作为评估川崎病发展和恢复程度的参考指标。

综上所述，川崎病患儿T淋巴细胞亚群、炎症因子指标水平均存在异常，且与其病情的发展显著相关，可作为鉴别川崎病辅助依据，也可作为评估川崎病发展和恢复程度的参考指标。

参考文献

[1]牛超，王琳琳，贾尝，等.川崎病发生机制研究[J].中国小儿急救医学，2020，27（9）：645-649.

[2]王颖，袁越，高路，等.川崎病患儿血清细胞因子变化的临床意义[J].中华实用儿科临床杂志，2020，35（13）：974-977.

[3]林淑斌，黄宏琳.川崎病患儿外周血中性粒细胞CD64表达水平研究[J].中国医学创新，2020，17（33）：127-130.

[4]江载芳，申昆玲，沈颖.诸福棠实用儿科学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2014：778-788.

[5]李东秀，黄植宁.小儿川崎病病因及发病机制研究现状[J].中外医学研究，2021，19（7）：191-194.

[6]刘丽莎，李喆倩，韩勍，等.川崎病患儿凝血指标变化及其临床意义研究[J].南京医科大学学报（自然科学版），2019，39（10）：1515-1517，1524.

[7]吴守业，林道炯，张余转.川崎病患儿外周血细胞因子和T细胞免疫在疾病不同时期的表达特点研究[J].川北医学院学报，2020，35（1）：118-121.

[8]许文苑，孙宝兰，徐美玉.T淋巴细胞与川崎病免疫反应的研究进展[J].江苏医药，2021，47（1）：97-101.

[9]韩云坤，孙冰，李丽红，等.川崎病T细胞免疫及细胞因子变化的研究[J].中国实验诊断学，2011，15（9）：1533-1536.

[10]張炎，犹登霞，余琳琳，等.川崎病患儿不同时期T细胞亚群及炎性因子的表达及临床意义[J].现代实用医学，2019，31（12）：1588-1590.