一起保育猪猪瘟和圆环 2 型病毒混合感染的诊断

朱再良

（双峰县石牛乡动物防疫站，湖南娄底417709）

2020 年7 月某猪场出现了保育猪死亡疫情，针对病猪的临床症状、剖检病变及结合目前猪场的常见传染病流行情况，采集3 份患病仔猪病料样品，进行了猪瘟病毒、蓝耳病病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒核酸检测；采集22 份血液样品检测了猪瘟病毒抗体、伪狂犬gB 抗体和gE 抗体、蓝耳病毒抗体检测[1～2]。

病毒核酸检测结果猪瘟病毒和圆环病毒呈阳性，蓝耳病毒和伪狂犬病毒阴性；抗体水平检测结果猪瘟病毒抗体水平较差，伪狂抗体水平较好，没有野毒感染，蓝耳病毒抗体水平较高。初步判断本次疫情为猪瘟和圆环2 型病毒感染，针对性采取防治措施，并调整猪场免疫程序，本次疫情得到较好控制。

1 发病情况

据猪场饲养员介绍，猪群发病后部分猪出现高热、咳嗽和呼吸困难；耳部可看到出血点，精神沉郁，喜卧，食欲减退直至废绝。生长发育受阻，进行性消瘦，并陆续出现死亡；极少数出现站立不稳等神经症状。

2 病理变化

解剖3 头病猪，发现心外膜有出血点，肾、肺都有多处出血小点，肺门淋巴结与肠系膜淋巴结肿大都有出血，呈黑白相间的大理石样病变，腹股沟淋巴结明显肿大并出血，切开皮肤见多处出血点，脾脏无明显肿大但边缘有米粒大黑色梗死。采集肝脏、脾脏、淋巴结、肺脏等病料和22 份小猪血样，以便进行血清学检测，均送检江西农业大学预防兽医学实验室检测。

3 实验室检测

3.1 设备

恒温生化培养箱、生物安全柜为苏净集团产品；PCR 扩增仪、电泳系统、紫外分析系统等为杭州晶格公司产品。

3.2 主要材料

脱纤绵羊血琼脂培养基，为实验室自行配制；抗体检测ELISA 试剂盒为美国IDEXX 公司产品；M-MLV 反转录酶为普罗麦格公司产品；总RNA 提取试剂盒为日本TaKaRa（宝生物）公司产品；PCR扩增试剂盒为北京全式金生物公司产品；猪瘟病毒、蓝耳病毒、伪狂犬病毒和猪圆环2 型病毒PCR引物，实验室根据相关病毒基因设计，由华大基因公司合成。

3.3 方法

3.3.1 细菌分离。在生物安全柜中，用接种环钩取病死猪肝脏、脾脏及肺等组织病料，划线接种于脱纤绵羊血琼脂培养基，置37℃恒温生化培养箱中培养24～48 h，然后观察结果[4～5]。

3.3.2 病毒核酸检测。采集病猪肺脏、淋巴结、脾脏等病料，用总RNA 提取试剂盒提取总RNA，通过RT-PCR 方法，扩增猪瘟、蓝耳病毒特异性基因片段；采集病猪肺脏、淋巴结、脾脏等病料，用组织裂解液处理后，提取DNA，通过PCR 方法，扩增猪伪狂犬病毒的特异性基因片段，与猪瘟、蓝耳病毒扩增产物一同进行凝胶电泳，最后在紫外分析系统中观察结果。

3.3.3 常见传染病抗体检测。将送检血样通过离心处理，提取血清，再按试剂盒说明书进行操作，分别检测猪瘟抗体、猪伪狂犬抗体和伪狂犬野毒抗体、蓝耳病毒抗体。

猪瘟抗体检测采用阻断ELISA、猪伪狂犬（gB抗体）总抗体和（gE 抗体）野毒抗体检测采用竞争ELISA 法、蓝耳病毒抗体检测采用间接ELISA 法[3]，试剂盒均来自美国IDEXX 公司产品。

3.4 检测结果

3.4.1 细菌分离结果。如图1、图2，可见2 块培养基上均只有少量菌落，菌落呈中等大小、圆形、光滑、湿润无溶血环。菌落经革兰氏染色，镜检结果如图3和图4，为革兰氏阴性、中等大小、两端钝圆杆菌。分离细菌与猪链球菌、猪丹毒等病原菌菌落及形态均不符，初步判断分离所得细菌为污染的肠杆菌，病原细菌分离阴性。

图1 样品1 细菌分离结果

图2 样品2 细菌分离结果

图3 样品1 分离细菌镜检结果

图4 样品2 分离细菌镜检结果

3.4.2 病毒核酸检测结果，见表1 及图5。

表1 样品病毒基因检测结果

图5 病毒基因扩增结果

3.4.3 常见传染病抗体检测结果。本次对22 个血样分别检测了猪瘟病毒抗体、伪狂犬gB 抗体和伪狂犬gE 抗体、蓝耳病毒抗体（见表2）,结果显示猪瘟病毒抗体合格率36.36%、平均阻断率37.14%、离散度42.9%；伪狂犬总抗体阳性率90.91%，野毒抗体阳性率为0；蓝耳病毒抗体阳性率100%、离散度34.6%。说明猪群猪瘟抗体水平较差，整齐度一般；伪狂犬病毒抗体水平较好，没有野毒感染；蓝耳病毒抗体水平高、整齐度一般。

4 讨论

本次对某猪仔猪群出现疫情，进行了病原学检测和血清学检测，结果2 份病料中未分离到病原细菌；3 份病料中检测到2 份猪瘟病毒阳性、3 份圆环2 型病毒阳性，蓝耳病毒和伪狂犬病毒阴性。血清检测结果猪瘟抗体水平较差，蓝耳病毒和伪狂犬病毒抗体水平均较好。初步判断本次疫情为猪瘟病毒与圆环2 型病毒混合感染导致。

猪瘟是一种接触性烈性传染病，因猪瘟疫苗免疫的普及使用，目前猪瘟的发生较少，即使出现也以温和型猪瘟形式多见[7]。我国在2018 年出现非洲猪瘟疫情后，大家普遍对非洲猪瘟的防疫高度重视，往往容易忽略其它疫病的防控。本次猪群疫情的出现，就与经典猪瘟感染有关。虽然只出现在保育猪群，其它猪群没有出现大的疫情，但也提示在非洲猪瘟疫情的防控压力下，对传统重要传染病仍然要注意，需引起大家的重视。

表2 抗体检测结果

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2 型所引起的，包括猪断奶后多系统衰竭综合征、猪皮炎- 肾病综合征等疾病，该病的发生往往与应激因素导致猪群免疫力下降相关[6,8]。本次疫情中圆环2 型病毒阳性，很可能与猪群感染经典猪瘟后，免疫力下降再导致圆环2 型病毒感染加重。事实上，在调整免疫程序、加强母、仔猪瘟及圆环疫苗免疫后，该场疫情迅速得到控制。