TSP2在人髓母细胞瘤组织中的表达及意义

孙 静 杨雪辉 葛春燕

髓母细胞瘤约占儿童中枢神经系统肿瘤的15%～20%，致残率、病死率较高，预后差[1，2]。近年来，随着神经外科技术的发展，髓母细胞瘤的致残率和病死率有下降趋势，5年生存率在50%～70%，10年生存率在30%～50%[3]。血栓素结合蛋白（thrombospondin，TSP）是多功能基质细胞糖蛋白，能够调节血管生成、炎症、细胞增殖和凋亡[4]。有研究显示TSP2 在髓母细胞瘤细胞中低表达，可能通过激活Notch信号通路促进肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成[5]。本文探讨人髓母细胞瘤组织TSP2的表达水平及其与病人预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2007 年6 月～2014 年10 月手术切除的髓母细胞瘤组织110 例，其中男69 例，女41例；年龄3～41 岁，平均（13.03±2.60）岁。根据WHO（2016）中枢神经系统肿瘤分类[6]：经典型71例，结节型/促结缔组织增生型30 例，大细胞型/间变型9 例；WNT 亚型24 例，SHH 亚型27 例，非WNT/SHH 亚型59 例。所有病人术前均未接受放、化疗或免疫治疗。另选取40 例颅脑损伤内减压术中切取的正常脑组织为对照，其中男26 例，女14 例；年龄17～34岁，平均（23.56±6.90）岁。

表1 110例髓母细胞瘤病人生存预后影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

1.2 免疫组织化学染色法检测TSP2 表达 所有组织均经过10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片。按照免疫组化试剂盒（上海雅吉生物科技有限公司）说明书进行操作，切片脱蜡后用磷酸盐缓冲液冲洗3 次。用0.01 mol/L 柠檬酸钠缓冲液高温高压下进行抗原修复，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶10 min。磷酸盐缓冲液洗涤3 次后滴加兔抗人TSP2单克隆抗体（1:500，美国Sigma公司），4 ℃孵育过夜，滴加二抗。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法显色，苏木精复染。梯度酒精脱水，二甲苯溶液透明，中性树胶封片，置于显微镜下进行观察。每张切片观察5 个视野，每个高倍镜至少观察100 个细胞。染色强度评分：无着色0 分；淡黄色1分；棕黄色2分；棕褐色3分。染色细胞百分比评分：阳性细胞数＜5%为0 分；5%～25%为1 分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；＞75%为4分。染色强度评分和染色细胞百分比评分相加后评分0～3分为低表达，＞3分为高表达[7]。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计量资料用x±s表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验；用Ka⁃plan-Meier 法绘制生存曲线，采用log-rank 检验；多因素Cox 比例回归风险模型分析生存期影响因素；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 髓母细胞瘤组织TSP2 的表达水平 髓母细胞瘤组织TSP2 高表达36 例，低表达74 例；正常脑组织TSP2 高表达32 例，低表达8 例。髓母细胞瘤组织TSP2低表达率（67.3%，74/110）明显高于正常脑组织（20.0%，8/40；P＜0.001）。

2.2 髓母细胞瘤病人生存期的影响因素 多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示，肿瘤未全切除、TSP2 低表达是髓母细胞瘤生存时间短的独立影响因素（P＜0.05，表1）。

2.3 TSP2 表达水平与髓母细胞瘤病人预后的关系随访截止2019 年1 月，随访时间12～80 个月。低表达组3、5 年生存率分别为49.05%和35.23%；中位生存期为34.89 个月。高表达组3、5 年生存率分别为69.03%和58.78%；中位生存期为41.14 个月。低表达组生存时间明显低于高表达组（P＜0.05，图1）。

3 讨论

图1 Kaplan-Meier 法绘制生存曲线分析TSP2 表达水平与髓母细胞瘤病人生存率的关系

髓母细胞瘤是中枢神经系统恶性程度最高的神经上皮性肿瘤之一，多发生于第四脑室顶上的小脑蚓部。髓母细胞瘤生长迅速，手术不易完全切除，病死率高，预后较差[8]。寻找新的治疗靶点是近年来髓母细胞瘤研究的热点[9]。既往研究显示，血管生成是髓母细胞瘤发展的重要因素[10]。TSP2与肿瘤生长和血管生成密切相关[11]。TSP2可能通过抑制血管内皮生长因子调节内皮细胞的迁移、增殖、存活和凋亡[12]。TSP2 的作用机制可能也涉及炎症，可以通过降低转录因子-κB活性，抑制免疫炎症，进而抑制血管生成[13]。这提示TSP2可能发挥抑癌基因作用。

本文结果发现髓母细胞瘤组织TSP2 呈低表达率明显高于脑组织；多因素Cox 比例回归风险模型分析结果显示TSP2 低表达是髓母细胞瘤病人生存期较短的独立危险因素；低表达组生存时间明显低于高表达组。这提示TSP2 可能是判断髓母细胞瘤预后的重要指标。

本研究的局限性为：仅检测组织TSP2 表达水平，未分析血清表达情况；对TSP2 的作用机制进行分析；分析TSP2表达水平与放化疗敏感性的关系。

综上所述，髓母细胞瘤组织TSP2 呈低表达，与病人生存预后较差有关。