CREPT在人脑胶质母细胞瘤组织中的表达及其与病人预后的关系

王睿健 张文超 尹 涛

胶质母细胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）属于WHO分级Ⅳ级胶质瘤，是成人中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，病死率和复发率较高[1]。寻找潜在的生物学标志物对GBM 早期诊治有重要意义。肿瘤高表达细胞周期相关蛋白（cell cyclerelated and expression elevated protein in tumor，CREPT）编码基因位于人类20 号染色体长臂1 区1带，包含7 个外显子，在非小细胞肺癌[2]、结直肠癌[3]和宫颈癌[4]、肾癌[5]等多种肿瘤中高表达，与肿瘤的发生和发展密切相关。本文探讨人脑GBM 组织CREPT的表达水平及其与病人预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取2010 年1 月至2011 年1 月我院病理科保存的104 例GBM 组织，术前均未接受过放化疗，其中男58 例，女46 例；年龄18～74 岁，平均（49.98±12.12）岁。选取2018 年1～12 月颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织40例为对照，其中男22例，女18 例；年龄32～61 岁，平均（50.02±11.18）岁。两组年龄、性别无统计学差异（P＞0.05）。

1.2 免疫组织化学染色法检测CREPT 的表达 石蜡切片厚度4 μm。SP 免疫组化试剂盒购于北京博奥森生物技术有限公司，严格按照试剂盒说明书进行操作。经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、枸橼酸溶液抗原修复后，聚乙二醇辛基苯基醚通透，用3%过氧化氢溶液灭活内源性过氧化物酶，随后用山羊血清封闭。滴加鼠抗人CREPT 单克隆抗体（1:500，上海远慕生物科技有限公司），湿盒内孵育过夜。用SP 法显色，苏木精复染。梯度酒精脱水，二甲苯溶液透明，中性树胶封片，BX43 型显微镜观察。每张切片观察5个视野，每个高倍镜至少观察100个细胞。染色强度评分：0 分为无着色；1 分为浅棕色；2 分为中棕色；3 分为深棕色。染色细胞百分比评分：1%～25%为1分；26%～50%为2分；＞50%为3分。将染色强度评分和染色细胞百分比评分相乘得出染色积分，0～3分为低表达；4～9分为高表达[6]。

1.3 随访 术后进行门诊随访，随访截止时间为2019年4月。记录总生存期（overall survival，OS；术后第1天至死亡或最后一次随访）和无进展生存期（pro⁃gression-free survival，PFS；术后至第一次发生疾病进展或任何原因死亡的时间）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计量资料以x±s表示，用t检验；计数资料采用χ2检验；采用多因素Cox比例回归风险模型分析生存预后的影响因素；用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，采用Log-rank检验比较生存率；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 GBM组织CREPT表达水平GBM组织高表达率（73.08%，76/104）明显高于正常脑组织（10.00%，4/40；P＜0.05）。

2.2 GBM 生存预后的影响因素 多因素Cox 比例回归风险模型风险结果显示，年龄≥55岁、术后未接受放化疗、CREPT 高表达是GBM 病人OS 和PFS 较短的独立影响因素（P＜0.05；表1、2）。

表1 104例胶质母细胞瘤病人总生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

表2 104例胶质母细胞瘤病人无进展生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

图1 Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析CREPT表达水平与胶质母细胞瘤病人总体生存率和无进展生存率的关系

2.3 CREPT 表达水平与GBM 生存期的关系 高表达组中位OS 为12 个月（9～38 个月），中位PFS 为11 个月（9～43 个月）；低表达组中位OS 为18 个月（14～44个月），中位PFS为17个月（13～48个月）。低表达组OS和PFS均明显高于高表达组（P＜0.05，图1）。

3 讨论

GBM 恶性程度较高，预后较差，寻找潜在的生物学标志物对GBM 临床诊治有重要意义。CREPT是近年来发现的一种新的癌基因，可通过调节细胞周期来调控癌症的发生和发展。本文用免疫组化法检测GBM 组织CREPT 的表达，结果显示GBM 组织CREPT 高表达率明显高于正常脑组织，说明CREPT可能参与GBM的发生，并且与恶性程度有关。

CREPT 在肿瘤中的作用机制可能有：调节免疫炎症，影响肿瘤微环境[7]；调节细胞周期，促进细胞周期G1/S 转换[8]；调控ROS/p53 通路[9]、RhoA 基因[10]和miRNA等[11]促进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移等。Wei等[12]发现CREPT 可以靶向miR-596，通过Wntcatenin 信号通路促进胶质瘤细胞增殖和侵袭，并且CREPT 表达水平增高与胶质瘤病人不良预后有关。

本文结果发现，年龄、术后放化疗是影响GBM病人生存预后的独立因素，与既往报道一致[13]。既往研究显示，CREPT 高表达与肾癌[5]和结直肠癌[3]等不良生存预后有关。本文CREPT 高表达GBM 病人的OS 和PFS 明显缩短，提示CREPT 对GBM 预后的早期评价可能有一定价值。

综上所述，GBM 组织CREPT 呈高表达，与病人不良生存预后和肿瘤进展有关。