甲状腺乳头状癌组织NCOA5 表达及临床意义

季晓亮 杨国建 王旭文 杨伟刚 胡 赟 张艳胜

甲状腺癌是30 岁以下中国年轻女性最高发的恶性肿瘤[1]。甲状腺乳头状癌是甲状腺恶性肿瘤中最常见的病理类型，占甲状腺癌所有病理类型的85%左右[2]。术前诊断主要依靠B 超、CT 和细针穿刺等，但仍有近1/3 的病例难以明确诊断[3]。核受体共激活因子5（nuclear receptor coactivator 5，NCOA5）是最近发现的一种由多个氨基酸组成在肿瘤组织中广泛表达的核受体辅助调节因子[4]，其表达程度与多种肿瘤发生发展密切相关，是分子肿瘤学研究的热点。本研究回顾性分析甲状腺乳头状癌手术标本60 例，采用免疫组化方法检测甲状腺乳头状癌组织与癌旁组织NCOA5 表达，比较癌组织NCOA5 表达程度与患者性别、年龄、肿瘤侵袭性等临床病理参数的关系，探讨NCOA5 表达在甲状腺乳头状癌诊断和改善预后中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集浙江中医药大学附属湖州中医院外科2016 年3 月—2019 年3 月临床资料完整且病理证实为甲状腺乳头状癌，行甲状腺癌根治手术患者的手术标本，分为癌组织组和与之相对应的癌旁组织组，各60 例。癌旁组织组要求经过病理证实为正常甲状腺组织且距离癌灶边缘>1.0cm。本研究通过我院伦理委员会审核（伦理批号：2019-076-A）。60 例甲状腺乳头状癌患者中，男14 例，女46 例，年龄26～68（40.71±8.64）岁；肿瘤直径≤4cm 34 例，直径>4cm 26 例；侵犯包膜21 例，未侵犯包膜39 例；淋巴结转移31 例，无淋巴结转移29 例；采用第8 版美国癌症联合委员会（American joint committee on cancer，AJCC）TNM 分期[5]，Ⅰ～Ⅱ期42 例，Ⅲ～Ⅳ期18 例。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：（1）手术标本经过病理证实为甲状腺乳头状癌；（2）具备完整的临床和病理资料。排除标准：（1）术前有化疗、局部放疗、消融治疗或甲状腺手术史；（2）有桥本甲状腺炎、亚急性甲状腺炎等甲状腺炎性疾病史；（3）有甲状腺相关内分泌疾病史；（4）合并有其他部位恶性肿瘤病史。

图1 核受体共激活因子5 在甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织表达（SP 法×400）

1.3 免疫组化方法 采用SP 法，常规蜡块3～4μm切片后65℃烤箱过夜、切片后二甲苯脱蜡；3%H2O2阻断灭活内源性过氧化物酶；EDTA 稀释液（浓缩液用蒸馏水1:50 稀释）煮沸修复抗原；血清工作液封闭20min；滴加 NCOA5 抗体（1∶400），25℃孵育1h；缓冲液冲洗后滴加二抗30min，缓冲液冲洗后DAB 显色剂显色；苏木素复染；脱水、干燥、封片。本研究采用的NCOA5 多抗体（批号AI09236261）、免疫组化试剂盒（批号C-0010）和DAB 显色试剂盒（批号BJ07071596），均采购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.4 观察指标和结果判定 经过染色后的切片，其结果由两名高年资副高病理科医师独立进行阅片。每张切片在高倍镜（×400）下随机选取5 个视野，取其平均值，观察阳性细胞染色强度，并计算阳性细胞表达所占百分比，进行NCOA5 在癌组织和癌旁组织中表达结果评分。阳性细胞占比评分标准：>75%计4分，50%～75%计3 分，25%～49%计2 分，5%～24%计1 分，<5%计0 分；阳性细胞染色强度评分标准：不显色为0 分，浅棕色为1 分，棕黄色为2 分，深褐色为3分。取阳性细胞占比评分和显色程度评分的乘积，>9分计（+++），5～8 分计（++），2～4 分计（+），0～1 分计（-），（+）～（+++）为阳性表达[6-7]。对比分析PTC 癌组织与癌旁组织NCOA5 阳性表达的差异，并比较患者癌组织NCOA5 表达程度与患者年龄、性别、肿瘤直径、侵犯包膜、淋巴结转移、肿瘤分期的关系。

1.5 统计学方法 应用SPSS 26.0 统计软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（） 表示，以t检验，计数资料采用百分率（%）表示，以χ2检验；以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织NCOA5 表达情况比较 NCOA5 蛋白在癌组织组和癌旁组织组均有表达，NCOA5 在癌组织阳性表达率73.33%（44/60），癌旁组织中为21.67%（13/60），差异有统计学意义（P<0.01）。见图1。

2.2 甲状腺乳头状癌组织NCOA5 表达与临床病理参数的关系 NCOA5 蛋白的表达与患者的年龄、性别无相关性（P>0.05），与肿瘤直径、是否侵犯包膜、淋巴结转移和肿瘤分期相关。肿瘤直径>4cm、侵犯包膜、有淋巴结转移、肿瘤分期越高者NCOA5 蛋白表达增高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 NCOA5 的表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理参数的关系[例（%）]

3 讨论

NCOA5 是诸多核受体共激活因子的一种，位于染色体20q13.12 区域，是一种编码包含579 个氨基酸的广泛表达的核受体辅助调节因子，分子量65kDa，同时具有折叠的（ΦxxΦΦ）和（LxxLL）结构域而发挥抑制或激活转录活性的作用[8]。NCOA5 通过与核受体结合，对核受体的转录活性进行调控，在细胞转录过程起重要作用。研究发现，NCOA5 在肝癌组织表达显著低于癌旁组织，敲除雄性小鼠NCOA5 基因可诱发肝癌，NCOA5 低表达可能是产生肝癌的原因之一[9]。张伟刚[10]研究发现，NCOA5 在乳腺癌阳性表达与肿瘤的大小、分期呈正相关，与淋巴结转移也有相关性，NCOA5 可能是乳腺癌发生发展的重要蛋白。周锦都等[11]报道NCOA5 在甲状腺乳头状癌中的表达情况，发现其在甲状腺肿瘤组织中表达增高，岳晚侠等[12]研究发现，NCOA5 在甲状腺癌临床分期Ⅲ+Ⅵ期、淋巴结转移组织中阳性表达率低于临床分期Ⅰ+Ⅱ期、非淋巴结转移组织中的阳性表达率。两项研究的研究对象病理类型有所不同，研究结果存在一定差异。本研究发现，NCOA5蛋白在甲状腺乳头状癌癌组织和癌旁正常组织均有表达，NCOA5 在癌组织阳性表达率73.33%（44/60），癌旁组织为21.67%（13/60）（P<0.01），NCOA5蛋白表达与患者的年龄、性别无关（P>0.05），肿瘤直径＞4cm、包膜侵犯、有淋巴结转移、肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ期者，NCOA5 蛋白呈高表达状态（P<0.05）。据此推断，NCOA5 可能是甲状腺乳头状癌发生发展的重要蛋白，其表达程度与甲状腺乳头状癌临床病理特征关系密切，可能是影响甲状腺乳头状癌患者预后的危险因素之一。NCOA5 参与肿瘤调控的具体机制尚不明确，还需要进一步的相关研究。