一起肉鸡滑液囊支原体病的诊断

陈云霞， 张焕容， 李 凡

(西南民族大学生命科学与技术学院， 四川成都610041)

2018年11月27日，四川彭山某存栏量为2 000 羽的三黄品种肉鸡场，70日龄左右部分鸡的腿关节陆续出现异常，主要表现为跗关节、爪垫、龙骨滑液囊肿胀、皮下组织增厚，有的鸡跗关节周围长出大小不一的水泡，导致鸡不能正常站立和行走，至90日龄，发病率达12%，但死亡率较低。主诉：该鸡场未免疫滑液囊支原体疫苗。曾怀疑是由大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌等细菌，以及鸡病毒性关节炎病毒引起的关节炎，用抗菌素治疗发病鸡，虽有轻微好转，但陆续有新的病例出现。

2 临床症状

病鸡主要表现为明显的跛行，跗关节和爪垫肿胀，触之有热感和波动感，部分鸡胸部出现囊肿；整体采食下降，喜卧，消瘦，羽毛松乱，死亡率低，个别鸡因病程较长，极度衰弱，不能站立。

3 剖检变化

切开跗关节、爪垫及胸部龙骨肿胀处，有黏稠淡黄色渗出液，个别可见黄色干酪样物质；肝脾轻微肿大；心肺正常；肠内无内容物；肾脏无肉眼可见异常。

4 实验室诊断

4.1 染色镜检 取关节内淡黄色渗出液涂片，结晶紫染色镜检，油镜下未发现细菌。将关节渗出液接种到TSA培养基上，经过37 ℃培养24 h，无菌落生长。

4.2 病料采集与处理 取典型症状病鸡腿关节滑液囊新鲜内容物，加入适量生理盐水研磨，吸取上清200 μL提取DNA。

4.3 核酸提取及PCR检测结果 用酚-氯仿法提取4.1中上清液中DNA作为模板，PCR扩增检测滑液囊支原体vlhA基因片段。引物序列[1]如下：上游5′-TTAGCAGCTAGTGCAGTGGCC-3′，下游 5′-GTAACCGATCCGCTTAATGC-3′；预期目的片段大小为300 bp，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PCR反应体系为：PremixTaq12.5 μL，模板DNA 2 μL，上下游引物各1 μL，加dd H2O补足至总体积20 μL。PCR反应条件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，53 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共30个循环；72 ℃ 10 min。1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，并将PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，测序结果经BLAST序列比对后，确定扩增片段为滑液囊支原体的vlhA基因片段。

图1 疑似滑液囊支原体病样品PCR电泳图M：DNA 分子质量标准； 1：阳性对照； 2～3：临床样本； 4：阴性对照

5 诊断结果

根据发病特点、临床症状、剖检变化及实验室诊断，最终确诊为滑液囊支原体感染。

6 讨论

滑液囊支原体病是由滑液囊支原体(Mycoplasmasynoviae,MS)引起的一种急性或慢性传染病，常造成鸡群增重下降、跛行、产蛋量大幅下降，屠体废弃率升高，给家禽养殖场造成巨大经济损失。关节肿胀、跛行是滑液囊支原体病的特征性症状之一，若出现跛行，并伴有呼吸道症状，配合其他临床症状，如消瘦、胸部起水疱等可考虑MS感染。在临床上，本病应与金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等病原菌引起的关节炎及病毒性关节炎相区别，应根据病情的急、慢及各自的临床症状进行区别，必要时做病原分离鉴定；在呼吸道症状方面，应与鸡毒支原体(MG)所致的疾病进行区别。

在预防滑液囊支原体病方面应做到：从源头上培育无MS感染的健康种鸡群；做好鸡舍通风换气工作，合理控制饲养密度，选择营养全面的饲料以提高鸡群免疫力；还可使用疫苗对MS感染进行预防，目前我国尚无MS疫苗上市，澳大利亚已有商品化MS-H疫苗。药物治疗能有效减轻MS感染，但没有抗生素能根除鸡体内的MS。在治疗发病鸡时，最好用本场分离的MS作药敏试验，根据药敏试验结果，使用高敏感药物对发病鸡进行治疗。

(参考文献略)