间充质干细胞治疗猫难治性贫血的病例分析

王 斌， 周小艇， 赵宝娜， 梁 璐

(1. 天津百恩生物科技有限公司， 天津东丽300308 ； 2. 厦门瑞派宠物医院思北分院， 福建厦门361001)

犬猫贫血是一种常见的临床疾病，指外周血单位容积内血红蛋白量、红细胞数量和(或)红细胞压积低于参考范围下限。临床表现为黏膜苍白、心率和呼吸加快、全身无力等特征。按照骨髓再生功能贫血可分为再生性贫血和非再生性贫血。网织红细胞数是再生性贫血的重要指标，当外周血中的网织红细胞数量不呈明显增加即为非再生性贫血，表现为红细胞无效性生成(红细胞成熟缺陷性贫血)或是红细胞生成减少(再生障碍性贫血)[1]。常规血液学检查可以确认红细胞成熟状态和幼稚红细胞数量，但无法评判造血功能，因此由造血功能障碍导致的再生障碍性贫血必需通过骨髓涂片细胞形态学检查来确诊[2]。

在贫血治疗中，除使用促红细胞生成素(Erythropoietin，EPO)、铁剂等，由于病例经常存在免疫因素，所以传统治疗手段常包括免疫抑制剂治疗，如环孢素、肾上腺皮质类激素、硫唑嘌呤等[3]。但免疫治疗中的感染问题、肝肾损伤及耐药问题影响了疾病的整体预后。间充质干细胞是一类具有自我更新、多向分化和强大旁分泌能力的干细胞[4]，它兼具促造血支持能力和免疫调节能力对治疗贫血具有非常独特的优势。本文对1例难治性非再生性贫血的病例进行干细胞治疗，并对治疗过程进行分析，旨在探索干细胞对难治性贫血的临床疗效。

1 病例信息

家猫，8月龄，雄性，2019年3月9日来厦门瑞派宠物医院思北分院就诊。主诉：主人发现患猫鼻头发白1周有余，食水正常，精神不振，活动意愿差，不与同屋其他猫玩耍，触诊正常，猫粮储存于壁橱，壁橱近期曾粉刷，有浓重油漆及有机化合物挥发味道，免疫驱虫完全，近期无手术、外伤以及用药史。

2 临床检查

患猫体温、呼吸、心率正常，对患猫进行了血常规检查，生化检查，病毒检查及寄生虫检查。

就诊当天的血常规检查结果：红细胞计数(RBC)为2.7×1012/L↓(参考范围：6.54×1012～12.20×1012/L)；红细胞压积(HCT)为10.3%↓(参考范围：30.3%～52.3%)；血红蛋白含量(HGB)为34 g/L↓(参考范围：98～162 g/L)，网织红细胞(RETIC)、血小板、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)均正常。白细胞计数(WBC)为28.97×109/L↑(参考范围：2.87×109～17.02×109/L)，淋巴细胞(LYM)为18.11×109/L↑(参考范围：0.92×109～6.88×109/L)。血涂片检查未见红细胞凝集，未见寄生虫。骨髓涂片未做。

生化检查结果：天冬氨酸氨基转移酶(AST)：83 U/L↑(参考范围：0～48 U/L)。

病毒检测结果：猫免疫缺陷病毒(FIV)和猫白血病病毒(FeLV)阴性。体表及粪便未见寄生虫。

3 初步诊断

重度非再生性贫血，再生障碍性贫血待查。

4 治疗及转归

初步治疗：分别于入院第1天、第6天给予输血治疗、EPO输注10 d，同时给予肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor，HGF)、甘利欣、速克、干扰素、维生素B10、维生素B12等治疗。入院第2天白细胞数量恢复正常。第5天AST恢复正常，血细胞检测RBC、HCT、HGB指标无明显改善，网织红细胞由13×109/L持续降低至4.3×109/L，治疗期间患猫精神萎靡，不进食，依靠人工饲喂，无活动意愿，症状无改善。入院第8天不进食，依靠液体治疗，再次输血。入院第11天复查血常规，RBC为1.39×1012/L，HCT为5%，HGB为19 g/L，网织红细胞为4.7×109/L。贫血治疗无效。

干细胞治疗：入院第11天(干细胞治疗第1天)予以单次静脉输注猫间充质干细胞(由天津百恩生物科技有限公司提供)，之后未再给予其他治疗，观察患猫精神食水逐步改善，入院第19天(干细胞治疗后第9天)恢复自主进食，出现主动活动意愿。网织红细胞大量生成，造血功能开始恢复，RGB、HCT、HGB随之逐渐升高。入院第46天(干细胞治疗后36 d)血细胞检测RBC、HCT、HGB指标恢复正常。干细胞治疗第65天血细胞检测RBC、HCT、HGB维持正常，且持续升高(见表1、图1)。

5 讨论

贫血的治疗应尽可能在明确病因的基础上开展，对于非再生性贫血的确切病因需要进行骨髓穿刺来确认，但由于条件限制无法进行相关检查，因此只能在病因无法明确和疾病无法确诊的情况下尝试现有治疗手段，以期获得治疗效果。然而经过11 d的常规手段治疗患猫的贫血症状未见改善，且病情加重，精神萎靡，需要人工饲喂。因其之前与化学物品有密切接触，而这有可能会导致骨髓异常，考虑使用间充质干细胞进行治疗。在单独并单次使用间充质干细胞治疗第9天后，患猫的网织红细胞大量生成，随之造血功能开始恢复，提示间充质干细胞具有促红细胞生成作用。

图1 红细胞、红细胞压积、血红蛋白及网织红细胞变化趋势Fig.1 Trends of red blood cells,hematocrit,hemoglobin and reticulocytes↑：干细胞治疗 ↑：Stem cell treatment

表1 干细胞治疗前后血常规检查结果Table 1 Blood examination results before and after stem cell treatment

导致骨髓损害和造血功能障碍的原因有很多，包括化学物质、辐射、病毒、免疫因素等，骨髓再生障碍或血细胞减少症可能是骨髓造血的“种子”—造血干(祖)细胞受到了损害，也可能是骨髓造血的重要“土壤”—骨髓造血微环境受到损害。

造血干细胞在骨髓中的自我更新和分化能力是由骨髓造血微环境来精细调节的；骨髓造血微环境是由支持造血的多种细胞组成的复杂网络，包括间充质干细胞、成骨细胞、破骨细胞、内皮细胞、交感神经细胞、巨核细胞等[5]。间充质干细胞是维持造血稳态的重要的基质细胞，可以促进造血干细胞的移植[6]和归巢[7],其机制主要是通过分泌与造血干细胞植入和归巢相关的细胞因子，例如趋化因子12(CXCL12)、干细胞因子(SCF)、趋化因子受体(CXCR4)等[7-8]，从而促进其有效植入。间充质干细胞可以分泌多种造血调控相关因子进而有效支持造血干细胞的增殖[9]。此外，间充质干细胞还可以促进造血干细胞向巨核细胞分化和生成血小板,其机制是其表达调节巨核细胞生成的血小板生成素和相关的细胞因子、集落刺激因子等[10]。

大量的细胞因子/化学因子，活性氧化物和外泌体在造血微环境中起到了重要的调节作用[5]。间充质干细胞具有强大的旁分泌功能，它通过分泌血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、CXCL12、血管生成素1(Ang-1)来维持造血微环境的稳态，并促进压力诱导下的造血生成[11]。间充质干细胞可以分泌前列腺素E2(PGE2)，而PGE2可通过激活蛋白激酶B(AKT)信号通路抑制活性氧的升高，并上调CXCL12的表达，从而保护造血干细胞不被损伤[12]。

研究表明，多种免疫细胞参与造血干细胞微环境的直接调控，间充质干细胞对免疫细胞具有调节作用，从而间接的调控干细胞微环境。间充质干细胞可以促进调节性T细胞(Treg)增殖[13]，而Treg细胞可参与造血干细胞在骨髓中的归巢、定位及维持[14]。间充质干细胞可以通过调节CD4+T细胞和CD8+T细胞之间的失衡来平衡免疫系统进而改善造血微环境[15]。

应用间充质干细胞可以促进造血干细胞的增殖与分化，并修复失衡的造血微环境，维持造血稳态，进而促进造血功能恢复，本文将为临床治疗难治性非再生性贫血提供全新的治疗思路和策略。