升清降浊方对慢性肾功能衰竭重要脏器的保护效用及其对炎症因子的影响

*傅贵平，龚志南，王 霞，李 升，戴彩华，王冬芽，江嘉陵，武 蓉，陈 晨

（井冈山大学医学部，江西，吉安343000）

炎症反应是慢性肾功能衰竭(chronic renal failure，CRF)重要的病理基础之一。前期研究显示，升清降浊方治疗CRF疗效确切[1-6]，并可有效地降低外周血及肾组织微炎症因子的浓度[6-7]。近期有研究显示，CRF 随着病情的恶化，对人体的心脏功能、消化系统均会产生严重损害[8-9]。本研究从炎症因子角度探讨以升清降浊方及其主要单味药大黄、升麻对慢性肾衰竭中的重要脏器的保护的效应，以明确升清降浊方治疗CRF 的作用靶点，为中医治疗CRF提供理论依据。

1 材料及方法

1.1 实验动物

SPF 级SD 雄性大鼠180 只，体重180～200 g/只，由湖南省斯莱克景达实验动物有限公司提供，实验动物许可证号:SCXK ( 湘) 2016－0002。

1.2 药物情况

升清降浊方组：升麻10 g，大黄10 g，黄芪20 g，丹参20 g，蒲公英10 g，白花蛇舌草12 g，鹿衔草15 g，菟丝子15g，枸杞15g，桃仁10 g，马鞭草15 g。以10倍量的水合煎，每次30 min，共2 次，合并2 次滤液，浓缩至120 mL，每mL 相当于原药材1 g。

升麻单体治疗组：以升麻有效成分异阿魏酸8 mg／kg 用药剂量，每日分2次灌注CRF 大鼠（此剂量约相当于成人每日升麻10 g）；异阿魏酸（南京泽朗医药科技有限公司生产，纯度98%，产品批号：ZLSC171208001-YAWS）

大黄单体治疗组：以大黄有效组份大黄总蒽醌 240 mg／kg 用药剂量，每日分2 次灌注CRF 大鼠（此剂量约相当于成人每日大黄10 g）。大黄总蒽醌（南京泽朗医药科技有限公司生产，纯度98%，产品批号：ZLSC170409003-DHZEK）

基本方治疗组：此方为益气活血、清热解毒方，它是课题组前期基础方，丹参20 g，黄芪20 g，桃仁10 g，白花蛇舌草12 g，蒲公英10 g，马鞭草15 g，鹿衔草15 g。将基本方的各饮片分别用8倍、6倍水煎煮2 次，第1次煎煮1.5 h，第2次煎煮1 h，两次煎煮液相混，减压浓缩后低温冷冻，干燥成粉状，灌胃前按100 g（原药材）／加水100 mL 溶解。按10 mL／kg 用药剂量给CRF 大鼠灌胃。

替米沙坦组：以替米沙坦(上海信谊天平药业有限公司，国药准字：87181204)干预CRF大鼠，以1.5 mg／只／d 给药。

1.3 主要试剂与仪器

戊巴比妥钠液(德国默克集团生产，批号：140618)；MM-0046R 大鼠IL-1(货号：1806R)、MM-0190R 大鼠IL-6(货号:1806R)、MM-0180R 大鼠TNF-α ( 货号:1806R)ELISA 试剂盒均由德国IBL 公司生产；C-反应蛋白ELISA 试剂盒为上海奥普生物有限公司生产（货号CRP-1501，批号20171206）；大鼠酪蛋白B级饲料，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号:SCXK (湘)2014－0002。EVO-LSI5电镜(德国Zeiss公司)；MDF-U53超低温冰箱(日本三洋公司)；ADVIA 2400 全自动生化检测仪(Siemns 公司)；BM_VIII 生物组织包埋机(湖北孝感市宏业医用仪器有限公司)TS-12μ 生物组织自动脱水机(湖北孝感市宏业医用仪器有限公司)。

1.4 造模方法

参照沙朝晖等制备CRF动物模型技术[10]，采用大鼠5/6 肾切除的方法（即采用二次手术的方式）。具体方法：在大鼠腹腔内注射戊巴比妥钠25 mg/kg进行麻醉，打开腹腔，先切除2/3左肾，用明胶海绵止血，1周后再切除右肾全部，仅余下1/6肾组织，缝合。造模30 d 在大鼠尾部静脉采血，采血量0.5～1 mL／只，离心，测定Scr、BUN，Scr水平>177 μmol/L（2 mg/dL）以上，BUN 水平升高>7.0 mmol/L（20 mg/dl）为造模成功。

1.5 动物分组及给药方法

将180只造模成功的大鼠随机分组，每组30只，即空白对照组、升清降浊方组、升麻单体治疗组、大黄单体治疗组、基本方治疗组、替米沙坦组。

升清降浊方组给予升清降浊方溶液(浓度为1 g/mL) 10 mL/K g 灌胃；升麻单体治疗组以升麻有效成分异阿魏酸8 mg／kg（约相当于成人每日升麻10 g）用药剂量，每日分2次灌胃；大黄单体治疗组以大黄有效组份大黄总蒽醌240 mg／kg 用药剂量（约相当于成人每日大黄10 g），每日分2次灌胃；基本方治疗组以课题组前期基础方(浓度为1 g /mL)10 mL/K g 灌胃；替米沙坦组以替米沙坦干预CRF大鼠，1.5 mg／只／d。空白组每日以与升清降浊方等量的生理盐水灌胃。各组灌胃均为28 d。

1.6 观察指标

各组灌胃干预28 d，采集大鼠血液，检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)等生化指标；检测白细胞介素1（IL-1），白细胞介素6（IL-6），肿瘤坏死因子α（TNF-α），C反应蛋白（CRP）等炎症因子水平；处死大鼠，对肾组织进行病理切片，做HE 染色和电镜观察；炎症因子水平等。

1.7 统计学分析

采用SPSS统计学软件对数据进行统计学处理。计量资料用x±s表示；各组干预前后比较采用配对t 检验，多组间比较采用单因素方差分析，其中的两两比较用q 检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠肾功能指标比较

如表1 所示，升清降浊方组、升麻单体治疗组、大黄单体治疗组治疗前后Scr、BUN、UA、有显著差异(P＜0.05)；

2.2 各组大鼠血清炎症因子含量比较

升清降浊方组、升麻单体治疗组、大黄单体治疗组治疗前后Scr、BUN、UA、CRP、IL-1、IL-6、TNF-α 有显著差异(P＜0.05或P＜01)；升清降浊方组、升麻单体治疗组、大黄单体治疗组的Scr、UA、IL-1、CRP 较其它治疗组更显著(P＜0.05 或P＜01)。

表1 各组大鼠肾功能指标比较( x± s)Table 1 Comparison of renal function indexes of rats in each group

表2 各组大鼠血清炎症因子表达比较(x± s)Table 2 Comparison of the expression of serum inflammatory factors in rats of each group

2.3 各组大鼠肾组织的病理改变

如图1 所示：空白组肾间质弥漫淋巴细胞浸润，局灶见肾小管内中性粒细胞聚集形成脓肿，大部分肾小球球囊扩张，毛细血管丛萎缩；基本方组肾间质灶性淋巴细胞浸润，小球血管丛萎缩明显，小管上皮水肿部分脱离；升清降浊方组肾小球毛细血管丛肥大，小管上皮水肿，散在少量炎细胞浸润；升麻单体组肾小球毛细血管丛萎缩，淋巴细胞灶状分布，小管上皮脱落；大黄单体组肾小球毛细血管丛萎缩，淋巴细胞灶状分布，小管上皮水肿，部分脱落。

截至2012年8月份，宿州市现有注册的物业管理企业约50家，其中最高资质等级为二级，所占比例不足20%，其余大多是三级资质，还有部分是刚刚注册的暂定三级资质。很多物业公司都是开发置业公司的亲子单位，专业的物业公司很少。在这50家左右的企业中，小型企业居多，中型企业不占主体，物业管理面积达到规模的企业偏少，从而导致物业服务成本的增加，直接制约物业管理行业的健康发展。并且，在现有公司中，绝大部分企业来自外地，宿州市本地大型物业管理公司极其缺乏。这也是导致宿州市物业管理行业出现不良状态的原因之一[1]。

如图2所示：空白组心肌大面积瘢痕纤维化；基本方组心肌重度水肿；升清降浊方组心肌轻度水肿；升麻单体组心肌重度水肿；大黄单体组心肌中度水肿。

如图3所示：空白组肝窦扩张淤血；基本方组肝窦扩张淤血；升清降浊方组肝细胞轻度水肿；升麻单体组肝窦扩张淤血；大黄单体组肝细胞中度水肿淤血。

空白组肾间质弥漫淋巴细胞浸润，局灶见肾小管内中性粒细胞聚集形成脓肿，大部分肾小球球囊扩张，毛细血管丛萎缩。升清降浊方组的大鼠肾小球毛细血管丛肥大，小管上皮水肿，散在少量炎细胞浸润。而升麻单方组及大黄单方组大部分肾小球毛细血管丛萎缩，小管上皮脱落，淋巴细胞灶状分布。阳性对照组大鼠心肌大面积瘢痕纤维化，观察升清降浊方大鼠心肌轻度水肿，相对其他组大鼠心肌均有重度水肿。升清降浊方组大鼠肝细胞轻度水肿，余各组大鼠肝细胞水肿并且伴有不同程度淤血。

动物造模后对比不同用药组大鼠的肾、心、肝重要器官病理观察，明显发现：升清降浊方组对大鼠肾脏、心脏及肝脏保护作用明显优于其他组。

图1 各组间肾组织HE 染色对比（×100）Fig.1 Comparison of HE staining in renal tissue of each group

图2 各组间心肌HE 染色对比（×100）Fig.2 Comparison of HE staining in myocardium of each group

图3：各组间肝脏HE 染色对比（×100）Fig.3 Comparison of liver HE staining of each group

3 讨论

肾脏主要生理功能之一是将机体产生的代谢废物排出体外，并保持体内水、电解质和酸碱平衡即“降浊”。这一功能的实现依赖于肾小球的滤过屏障，肾小管的重吸收和分泌的精细调节，机体需要的营养物质会被“保留”下来而用于生物合成，功能调节等生理功能的实现即“升清”。CRF 状态下这种“升清”与“降浊”的功能丧失，形成清阳不升、浊阴不降的病理状态。

中医认为CRF 状态，清阳不升、浊阴不降是病机关键，“痰、浊、湿、毒”是主要病理产物，且清阳不升，浊阴不降与“痰、浊、湿、毒”互为因果关系[11]。“痰、浊、湿、毒”在体内影响络脉运行气血，久则蕴结难解，病势胶着，顽固不化。

而从最近的研究来看，CRF 不仅对人体肾脏，对其他一些脏器也有明显损伤。研究表明，CRF 患者普遍存在超声心动图异常改变，其左室、左房、左室后壁厚度、左室心肌重量指数、室间隔均高于正常对照组。相比于正常对照组，CRF 组病人左室射血分数、二尖瓣口舒张早期与末期血流峰值速度比值均明显下降(P< 0.05)，CRF 病情越严重，心脏异常改变的幅度越大[8]。此外，在消化系统方面，肠道菌群失衡普遍存在于CRF 患者中，这种肠道菌群失衡表现为低丰度细菌类群最先受到影响,并且对肠道健康有益的丁酸盐产生菌数量明显减少，肾功能障碍程度越高，肠道菌群的结构失衡越严重。CRF 患者还存在肠黏膜屏障的损伤，主要表现为肠黏膜通透性增加，由此引发细菌易位及肠源性内毒素血症[9]。

针对上述病机，我们研究组创新综合治法，以升麻大黄药对为主药组成的方剂，是基于人体的五脏阴阳平衡角度来制定。生死之机，升降而已。有升必有降，有降才有升，升降有序，五脏才得协调。而升麻大黄药对为主方的中药配伍防治CRF，正是遵循这一规律。大黄见于《本经》，“主下瘀血，血瘀，寒热”；《医学启源》称大黄：“气味俱厚，沉而降，阴也”，因而必须加用升浮药才能达到更好的疗效。升麻最早见于《本经》：“味甘，平，主解百毒”。《心印绀珠经》称之为：“无毒，升也”。升麻补益脾气升清降浊，健运精微，杜绝湿浊（毒）内生[12]。升麻与大黄相配升清降浊为君药；黄芪补益脾气，健运精微，菟丝子，枸杞益肾填精，桃仁，丹参化瘀通络，五药相配共创补肾健脾，益气活血为臣药；蒲公英，白花蛇舌草，马鞭草，鹿衔草相配清利湿热为使药。全方共奏升清降浊、补益脾肾、化瘀利湿之效。