陕西省延安地区汉族与国内其他地区育龄妇女MTHFR基因C677T位点基因型和等位基因分布研究

师文涛，白 蓉，黄剑林，雷杰喻

（延安大学附属医院，陕西延安 716000）

叶酸是一种水溶性维生素，其分子小，又称为维生素B9，其主要以离子形式参与人体的细胞增殖、基因活性调节、红细胞和白细胞的产生、皮肤和肠系膜代谢，是调节大脑功能化学物质的合成等多种重要生化过程的必须化合物；叶酸既可以化学合成也可以天然获得[1]；育龄妇女适当的补充叶酸可有效预防出生缺陷的发生[2]。

5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydr ofolate reductase，MTHFR）是叶酸代谢通路中的关键酶。MTHFR C677T 是目前发现MTHFR 最常见的突变位点，存在CC，CT 和TT 三种基因型，基因位点多态性影响着其编码的酶活性、血清和红细胞叶酸浓度以及血浆Hcy 浓度的变化[3-4]。2017年《围受孕期增补叶酸预防神经管缺陷指南》中提出，育龄妇女每日服用叶酸降低新生儿出生缺陷率，并建议MTHFR C677T 位点TT 基因型患者应当酌情增加叶酸补充剂量或延长孕前补充时间[5]。相关研究表明，MTHFR 基因突变导致新生儿发生出生缺陷概率为13.4%，并有逐年上升的趋势[6]。MTHFR C677T 基因在不同国家、地区、民族的分布具有明显差异，亚洲居中且占2.5%～36%。目前国内其他地区关于育龄妇女MTHFR C677T 基因多态性的地域分布报道很多，但延安地区还未见有大数据的相关研究。本研究以陕西省延安地区汉族女性为研究对象，通过探讨12 557 例延安地区育龄妇女MTHFR C677T 基因分布特征，旨在为本地区育龄妇女预防MTHFR C677T 基因突变引起的新生儿出生缺陷及其相关疾病提供参考依据，指导育龄妇女科学补服叶酸。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取对象为2015年1月～2020年6月期间，到延安大学附属医院进行孕检的12 557 例汉族女性，全部来自于陕西省延安市，年龄15～49 岁，平均年龄29.02±5.21 岁。本研究已通过医院伦理委员会批准同意，患者具有知情权并签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 核酸提取及纯化试剂、免疫显色试剂、MTHFRC677T 基因检测试剂盒均由上海百傲科技股份有限公司提供，严格按照检验试剂盒说明书操作。

1.3 方法 采集研究对象乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝全血，提取DNA，完全按照MTHFR 基因检测标准操作规程进行操作。采用DNA 微阵列芯片法进行PCR 扩增，反应体系22μl，反应条件：50℃5min；94℃5min；94℃25s，56℃25s，72℃25s，35 个循环；72℃5min。反应完成后，利用PCR-芯片杂交法检测，并应用分析软件识读芯片的基因分型，确定其结果。

1.4 统计学分析 采用Excel 2019，SPSS18.0 软件进行数据整理和统计学分析。计数资料采用率（%）表示，卡方检验，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 延安地区育龄妇女MTHFR C677T 基因Hardy-Weinberg 遗传平衡分析 见表1。MTHFR C677T 有CC，CT，TT 三种基因型。研究群体MTHFR C677T 基因多态性分布符合Hardy-Weinberg 遗传平衡，说明数据来自同一孟德尔群体。

2.2 延安地区与国内其他地区育龄妇女MTHFR 基因C677T 位点基因型和等位基因分布 见表2。延安地区女性MTHFR C677T 各基因型分布和基因频率分布情况与尚志、长春、辽源、延边、张家口、怀来、北京、廊坊、涞水、烟台、淄博、潍坊、新乡、济源、郑州、镇江、麻城、德阳、郫县、南充、武汉、遂宁、英山、荆州、松滋、眉山、绍兴、九江、长沙、湘潭、昆明、河源、广州、惠州、南宁、珠海、琼海[7-8,10-43]的差异均有统计学意义（P ＜0.05），与乌鲁木齐[9]比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。从各地区MTHFR C677T 基因型分布整体来看，纯合突变型TT 呈现北高南低的趋势（见图1）；并且各个地区T 等位基因频率呈现随着纬度下降而下降的趋势（见图2）。

表1 研究群体MTHFR C677T 位点遗传平衡分析

3 讨论

出生缺陷在我国较为常见，每年新增出生缺陷人数约90 万。我国常见的出生缺陷包括神经管缺陷、唇腭裂、先天性心脏病、唐氏综合征等。导致出生缺陷发生的因素非常复杂，一般认为出生缺陷的发生受环境、营养摄入情况、遗传等因素共同影响[45-46]。近年来，遗传因素影响越来越受人们重视。随着基因测序技术的发展，针对出生缺陷的病因学从分子层面进行的研究逐渐深入，补充叶酸预防出生缺陷已达成共识。如能孕前补充适宜剂量叶酸可降低出生缺陷的发生，减轻因患儿出生缺陷所致家庭、社会负担及降低大量医疗费用支出[5]。

本研究通过开展MTHFR C677T 基因多态性的地区特征研究，发现延安地区MTHFR C667T 基因型CC，CT，TT 的频率分别为25.5%，50.4%和24.0%。叶酸代谢关键酶MHTFR C677T 基因多态性会影响酶的活性，可介导同型半胱氨酸在人体内清除，促进DNA 甲基化反应。有临床研究表明，MTHFR C677T TT 型较CC 型酶活性降低60%～70%；在摄入等剂量叶酸情况下，TT 型相比CT，CC 型个体血清叶酸水平降低20%左右[47]；在血清叶酸浓度低时，TT 型相比CT，CC 型个体同型半胱氨酸高30%左右[48]。MTHFR C677T 等位基因的突变与其他各地区存在差异，具有地域特异性。根据数据分析得出，北方城市T 等位基因频率高于南方城市，该研究结果与向长港等[33]人研究结果一致。MTHFR C677T 基因多态性可能受地形地貌、气候、生活习惯、饮食等因素影响，经过较长时间的基因突变形成的结果。然而，基因多态性的发生是由于哪些主要因素决定，需要今后更精细 的调查研究。

表2 不同地区MTHFR 等位基因型频数和基因频率分布特征[n(%)]

图1 各地区人群中MTHFR 基因C677T 位点多态性分布

图2 各个地区MTHFR C677T 位点等位基因（C,T）随纬度变化趋势

叶酸主要存在于植物的叶绿体中，高温会导致大量失活，我国饮食主要以烹饪为主，所以实际能被人体吸收、利用的叶酸有限。孕期妇女对叶酸需求量大，甚至需要翻倍补充，一部分人由于MTHFR C677T 基因位点突变导致叶酸利用转化能力下降，这样极易出现叶酸缺乏。

国外有研究发现，将叶酸加入面粉中，提高公众叶酸的摄入量，可以有效预防新生儿出生缺陷的发生[49]。速存梅等[50]人证实农村妇女血清叶酸及红细胞叶酸水平明显低于城市育龄妇女，神经管畸形患儿出生率农村高于城市；有研究专门针对农村妇女进行随机对照实验，结果表明，每次服用0.4mg叶酸，1 次/天，服用至少3 个月，或者每次服用4mg 叶酸，1 次/天，服用1 个月以上时，红细胞叶酸浓度才能达到预防神经管畸形的有效水平[51]。

综上所述，针对育龄妇女MTHFR C677T 不同基因型并结合患者孕产史、家族史等因素综合评估风险，并按照个体化原则参考血液同型半胱氨酸水平和红细胞叶酸浓度，酌情增加补充叶酸剂量或延长孕前增补时间。同时，建议育龄妇女多食用含叶酸的食物，养成健康规律的生活方式。因此，基于该地区研究结果，了解 MTHFR C677T 与叶酸利用代谢的关系，为临床医生指导地区人群补充叶酸提供基础理论依据；也为降低本地区出生缺陷及制定公共卫生政策提供遗传学数据。