2型糖尿病患者血清Fetuin B水平与并发下肢动脉粥样硬化性病变的相关性研究

陈树鑫，宁 晔，韩登科(中山大学附属中山医院 .急救中心；.检验医学中心，广东中山 528403）

近年来，随着居民生活水平的提高和人口老龄化社会进程加剧，2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者并发下肢动脉粥样硬化性病变（lower extremity atherosclerosis artery disease，LEAD）的发生率呈逐年升高的趋势，严重危害着患者的生存质量。LEAD 是指动脉粥样硬化使下肢动脉狭窄或闭塞的一组病变，导致T2DM 患者出现远端肢体缺血、坏死甚至截肢等严重情况。T2DM是LEAD 发生的重要原因[1]。近年来，胎球蛋白B（Fetuin B）与T2DM 血管并发症密切相关[2-3]，但胎球蛋白B 在LEAD 患者中的作用机制尚未清楚，本研究旨在探讨T2DM 患者中Fetuin B 水平与下肢动脉粥样硬化之间的变化情况，为减低T2DM 患者并发下肢动脉粥样硬化的发病率提供一定的临床依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 随机选取2018年7月～2019年3月，在我院内分泌专科住院进行治疗的T2MD 患者作为研究对象，分为T2DM 组和LEAD 组。T2DM 组共41 例，其中男性18 例，女性23 例，年龄29 ～86岁，平均年龄50.340±15.490 岁，病史1 周～23年，平均在6.947±6.983年。LEAD 组共81 例，其中男性35 例，女性46 例，年龄18 ～88 岁，平均年龄65.730±13.050 岁，病史从1 周～20年，平均为7.357±5.730年。选取同时期健康体检者作为对照组共45 例，男性14 例，女性31 例，年龄29 ～82 岁，平均年龄46.500±16.267 岁。三组研究对象之间性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。所有入组研究对象都符合T2DM 诊断标准和LEAD 的诊断标准，签署知情同意书并且经过医院伦理委员会审批。依据2014年美国糖尿病协会的糖尿病指南诊断标准诊断2 型糖尿病。LEAD 诊断标准：行下肢动脉彩超检查，包括双下肢股总动脉、股浅动脉、股深动脉、胫前动脉、胫后动脉和腘动脉。斑块：局限性内中膜增厚凸入动脉官腔＞1.5mm。按形态特征分为规则型和不规则型斑块；按声学分为低回声、等回声、高回声和不均质型斑块。排除标准：①其他类型糖尿病患者；②恶性肿瘤者；③自身免疫性疾病者；④妊娠者；⑤严重肝肾功能不全者。

1.2 仪器和试剂 检测双下肢动脉病变采用飞利浦HD15 多普勒超声仪，生化指标采用罗氏公司的Cobas8000 全自动生化分析仪检测，试剂、校准品和质控品来自罗氏公司，血清Fetuin B 检测试剂盒来自中国上海江莱生物公司。

1.3 方法 采集研究对象的静脉血3ml，化学发光法检测血清中尿素（BUN），肌酐（Cr）、尿酸（UA）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、同型半胱氨酸（Hcy）、葡萄糖（GLU）、空腹葡萄糖（FPG）、糖化血清蛋白（GSP）、β 羟丁酸（β-HB）和糖化清蛋白（GA）水平。采集研究对象静脉血3ml，分离血清置于-70℃冰箱中保存备用，酶联免疫法检测Fetuin B 时，严格按照上海江莱生物公司的说明书进行操作；用水银血压计检测研究对象的收缩压（SBP）和舒张压(DBP)；测量研究对象的身高和体重计算出体重指数（BMI）＝体重／身高2（kg/m2）。

1.4 统计学分析 应用SPSS 23．0 统计软件，三组间计量资料采用单因素方差分析，多重比较为LSD 方法，采用二元Logistic 回归分析筛选影响下肢动脉粥样硬化的危险因素，用ROC 曲线分析得出诊断指标，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般临床资料的比较 见表1。用单向方差分析（One-Way ANOVA）三组研究对象的Fetuin B，SBP，DBP，BMI，BUN，Hcy，TC，TG，HDL，LDL，GLU，FPG，GSP，β-HB 和GA 水平，差异均有统计学意义（均P ＜0.05）。在样本均数间的多重比较中，T2DM 患者和LEAD 患者的Fetuin B水平与对照组比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。且随着病情变化，血清中Fetuin B 水平呈逐渐升高趋势。

2.2 二元Logistic 回归分析 见表2。Fetuin B，TG 是影响LEAD 患者的独立危险因素（P ＜0.05）。BUN，UA 和Hcy 不是LEAD 患者的独立危险因素。

2.3 ROC曲线分析 将LEAD患者作为研究对象，建立ROC 曲线分析模型，见图1。ROC 曲线分析结果，见表3。ROC 结果显示，LEAD 患者血清中Fetuin B 在19.639 ng/ml 时，具有较好的诊断价值（AUC：0.835，灵敏度：0.700，特异度：0.977）。TG 在1.375mmol/L 时，具有较好的诊断价值（AUC：0.773，灵敏度：0.625，特异度：0.841）。

图1 LEAD 患者的ROC 曲线

表1 一般临床资料的比较（±s）

表1 一般临床资料的比较（±s）

注：*P ＜0.05，多重比较为LSD 方法，与对照组比较aP ＜0.05，与T2DM 组比较，b P ＜0.05。

项目 对照组(n=45) T2DM 组(n=41) LEAD 组(n=81) F P Fetuin B（ng/ml）SBP（mmHg）DBP（mmHg）BMI（kg/m2）BUN（μmol/L）Cr（μmol/L）UA（μmol/L）Hcy(μmol/L)TC（mmol/L）9.384±5.014 110.110±6.001 74.500±4.868 22.706±2.120 4.386±0.888 65.814±16.176 397.566±495.290 7.655±1.706 4.425±0.477 55.700±37.902a 142.710±30.530 a 86.650±14.977 a 23.642±5.719 6.244±4.985 a 88.050±82.718 360.190±129.043 10.545±5.344 a 4.909±1.333 58.752±69.377 a 155.240±26.966a 87.800±16.235a 25.025±4.791a 7.452±3.732a 90.820±55.203 394.860±130.547 12.123±3.714a 5.009±1.474a 13.962 50.306 14.179 3.708 10.156 2.908 0.232 18.801 3.223 0.000*0.000*0.000*0.027*0.000*0.058 0.793 0.000*0.043*TG(mmol/L）HDL（mmol/L）LDL（mmol/L）GLU（mmol/L）FPG (mmol/L)GSP(μmol/L)β-HB(mmol/L)GA (%)1.093±0.626 1.474±0.320 2.310±0.455 5.205±14.424 5.127±5.091 242.205±24.989 0.143±0.090 13.250±2.374 2.278±2.282 a 1.068±0.322 a 2.523±1.076 14.424±7.410a 8.509±3.309 a 376.150±116.813a 0.503±0.847 a 0.968±0.411 a 2.037±1.414a 1.089±0.332a 2.749±0.973a 15.605±7.695a 9.542±4.549a 396.796±121.587a 0.167±0.224 1.045±0.481a 7.632 22.838 3.554 35.354 20.948 33.410 8.709 1 223.868 0.001*0.000*0.031*0.000*0.000*0.000*0.000*0.000*

表2 LEAD 患者二元Logistic 回归分析

表3 LEAD 患者的ROC 曲线分析

3 讨论

LEAD 是T2DM 最常见的慢性血管并发症之一，也是动脉粥样硬化的标志之一，下肢动脉粥样硬化使血管狭窄甚至闭塞，导致糖尿病足的发生，严重者不得不面临截肢甚至死亡。近年来，该病出现年轻化、病情严重和预后差等特点，报道显示，T2DM 患者中LEAD 患病率达26.32%[4]，因此，明确T2DM 患者下肢血管动脉粥样硬化的发病危险因素，对预防和延缓T2DM 患者并发下肢粥样硬化性疾病的发生发展具有重要意义。

本研究探讨了LEAD 患者的血糖、血脂和血压指标的变化情况，本研究结果发现在血糖指标中，LEAD 组患者的FPG，GLU，GSP，TC，TC，LDL，SBP 和DBP 水平高于T2DM 组和对照组，而T2DM 组β-HB 水平最高，T2DM 组HDL 水平最低，LEAD 组低于对照组，LEAD 组GA 水平低于T2DM组和对照组，并且二元Logistic 回归分析表明TG是T2DM 患者并发下肢动脉粥样硬化性疾病的风险因素。在ROC 回归分析中得出，TG 在1.375mmol/L 时，对LEAD 发生发展具有较好的诊断价值，这与文献报道相符[5-6]。T2DM 患者并发高血脂和高血压时，氧化应激反应会损伤动脉血管内皮细胞，使血管内皮功能障碍，导致动脉粥样硬化的发生出现下肢动脉血管狭窄甚至闭塞，而下肢动脉血管狭窄或者闭塞时，下肢供血变差，出现组织缺血缺氧，加剧血管的氧化应激反应，形成恶性循环。曾隽等[7]人发现，T2DM 患者并发重度下肢血管病变的FBG，LDL 水平高于轻中度下肢血管病变者，李薪等[8]人发现，T2DM 患者并发动脉粥样硬化组和T2DM 并发高脂血症组中TG 高于单纯T2DM 组，这与本研究结果一致。这提示高血糖、高血脂和高血压与LEAD 的发生发展密切相关[9-10]。本研究中，LEAD 组、T2DM 组和对照组中UA 的水平相差不大，且差异无统计学意义，在二元Logistic 回归分析中，UA 水平不是LEAD 患者的独立危险因子，这与马鸣飞等[4]人的研究结果不一致。其中的原因可能是本研究中，纳入正在使用降尿酸药物的患者，而马鸣飞等人的研究中，则排除一个月前使用过影响尿酸代谢的药物。本研究中，LEAD 组患者的Hcy 水平高于T2DM 组和对照组，这与李小青等[11]人研究结果相一致。同时，大量研究表明，Hcy 水平升高，与LEAD 患者的发生发展密切相关[12-13]。可能机制是Hcy 可减低血浆中一氧化氮的浓度，加重血管内皮的损伤，同时，它能促进血管平滑肌的增殖、诱发凝血酶的产生和血小板的凝集，促进下肢动脉粥样硬化的形成。

Fetuin B 与Fetuin A 都属于胎球蛋白家族中的糖蛋白，两者具有22%的同源性，在组织分布上和功能上具有众多相似之处。研究表明，Fetuin A 基因位点与T2DM 并发下肢动脉硬化相关，也是LEAD 发生发展的危险因素[14]，同时，也与颈动脉粥样硬化斑块程度有关[15]，这与本研究结果相似。本研究发现，LEAD 患者的Fetuin B 水平高于T2DM 患者和对照组，随着病情加重，Fetuin B呈逐渐升高的趋势，且二元Logistic 回归分析中，Fetuin B 水平是LEAD 患者的独立危险因子。另外，从ROC 曲线分析结果得出，当血清中Fetuin B 水平在19.639 ng/ml 时，对LEAD 患者具有较好的诊断价值。这也与JUNG 等[16]人研究结果相一致。Fetuin B 可通过增加单核细胞、巨噬细胞的迁移，使巨噬细胞中脂质沉淀，促进动脉血管内斑块形成。因此，血清中Fetuin B 水平增加，可促进T2DM 患者并发下肢动脉粥样硬化性病变的发生发展。

综上所述，Fetuin B 在LEAD 的发生、发展过程中起到一定的作用，检测血清中Fetuin B 水平变化情况，对LEAD 患者早诊断、早治疗有着重要的临床意义。由于本研究对象数量不大，而且是单一中心的临床研究，没有从病理生理中进一步研究。接下来，本课题需结合基础实验研究和大规模临床试验，进一步研究阐明Fetuin B 在LEAD 的作用机制。