黑色素瘤抗原A3 mRNA表达与NSCLC发生发展的关系

何宗林 杜先智 邓 嘉 张国越

非小细胞肺癌(NSCLC)的发生发展，能够导致患者近期生活质量的显著下降，并能够影响到患者的总体生存时间[1]。部分地区的报道研究发现，NSCLC的发病率或者致残率均呈现出了明显的上升趋势[2]。临床上在探讨NSCLC的发病机理的过程中，越来越多的研究关注到基因水平的改变对于NSCLC的发生影响。黑色素瘤抗原A3 mRNA(MAGE-A3 mRNA)的表达浓度的上升，能够通过影响到癌细胞的上游转录活性，促进癌细胞内不同信号通路的激活，最终参与到肺癌的病情进展过程[3-4]。为了揭示MAGE-A3 mRNA的表达与肺癌患者的病情关系，从而为临床上肺癌的诊疗提供参考，选取我院病例中心收集的80例NSCLC组织及其对应的癌旁组织中作为研究对象，探讨了MAGE-A3 mRNA的表达及其与肺癌的临床病例特征关系。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取我院2015年1月至2018年5月收集的80例NSCLC组织及其对应的癌旁组织中作为研究对象。80例NSCLC患者，年龄44～75岁，平均(56.5±9.0)岁，性别：男性49例、女性31例，TNM分期：Ⅰ期22例、Ⅱ期34例、Ⅲ期18例、Ⅳ期6例；肿瘤分化程度：高分化20例、中分化35例、低分化25例；病灶最大径≥3.0 cm 36例、<3.0 cm 44例；淋巴结转移阳性37例；病理学类型：鳞癌10例、腺癌70例；吸烟27例。入选标准：①NSCLC患者的诊断标准参考中华医学会制定的标准[5]；②患者年龄≤79岁；③患者手术前经胸部CT、MRI、纤支镜取活组织病检或者手术后病理学检查证实；④获取病理学标本前，患者未接受放化疗、免疫学治疗；⑤纳入研究对象的各类资料完整。

排除标准：①合并免疫系统疾病；②合并其他部位恶性肿瘤；③具有放化疗史；④未经病理学检查证实。

1.2 qRT-PCR检测方法

采用组织研磨的方法进行组织细胞中RNA的提取，在无酶的操作条件下加入焦炭酸二乙酯，测量RNA浓度后，逆转录成cDNA后进行基因扩增，应用primer 5软件进行检测基因的合成和引物设计，采用GADPH作为内参，MAGE-A3 mRNA引物5'CAAGGACCAACTACAACC 3':下游5'TGCCTCTTCTTTAATTG3'，经历45个循环后进行曲线溶解，每个孔设置3个复孔，取平均值。Bio-Rad iQ5实时荧光定量PCR仪购自美国伯乐公司。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 NSCLC组织和癌旁组织中MAGE-A3 mRNA表达的差异

NSCLC组织中MAGE-A3 mRNA表达水平显著高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2 MAGE-A3 mRNA表达与NSCLC组织临床病理学参数的关系

在不同TNM分期、是否发生淋巴结转移的NSCLC组织中MAGE-A3 mRNA表达水平比较，差异具有统计学意义(P<0.05)；在不同年龄、性别、病理学类型、肿瘤分化程度、不同病灶直径、是否吸烟患者NSCLC组织中MAGE-A3 mRNA表达水平比较，差异均不具有统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 NSCLC组织和癌旁组织中的MAGE-A3 mRNA表达差异

表2 NSCLC组织中MAGE-A3 mRNA表达与其临床病理学参数的关系

3 讨论

MAGE-A3 mRNA是黑色素瘤相关家族成员，其能够通过提高癌细胞内黑色素瘤转录调控基因的激活程度，最终促进癌基因的异常转录，提高了癌细胞的增殖速度。MAGE-A3 mRNA还能够通过提高癌细胞内MAPK的激活程度，促进癌细胞凋亡抑制和分化成熟的障碍，促进上皮细胞的异常病变。基础领域的研究还认为，MAGE-A3 mRNA对于癌细胞癌基因错配修复能力的影响，能够显著干预到癌基因突变比例的改变，加剧癌基因的激活和抑癌基因的沉默[6]。部分研究者探讨了MAGE-A3 mRNA的表达与消化系统肿瘤的关系，认为在消化系统肿瘤患者中，MAGE-A3 mRN的表达明显上升[7-8]，并认为MAGE-A3 mRNA的表达上升与消化系统恶性肿瘤临床病理特征的进展密切相关，但在NSCLC患者中的分析较少。

本次研究通过基因分析的方法，探讨了MAGE-A3 mRNA在肺癌患者中的表达情况，发现在肺癌病灶组织中，MAGE-A3 mRNA的表达水平明显的上升，高于肺癌癌旁组织，统计学差异显著，表明MAGE-A3 mRNA的高表达考虑影响到了肺癌的早期发生或者病情进展过程。MAGE-A3 mRNA的表达上升，不仅能够通过影响到基因转录水平的改变，同时还能够通过提高癌浸润和粘附能力的改变，最终促进恶性肿瘤的病情进展。刘帮助等研究者也一致认为，在肺癌患者中，MAGE-A3 mRNA的表达程度可上升3～4倍，同时MAGE-A3 mRNA的表达还具有明显的病情依赖性，在中晚期肺癌或者合并有明显远处转移的肺癌患者中，MAGE-A3 mRNA的表达可进一步上升[9]。在探讨MAGE-A3 mRNA的表达与肺癌患者临床病例特征的关系中，发现在淋巴结转移较为明显或者肺癌临床分期较晚的患者中，MAGE-A3 mRNA的表达水平较高，表明MAGE-A3 mRNA的表达与肺癌的临床病例特征密切相关，这主要考虑由于MAGE-A3 mRNA的表达上升，能够通过提高癌细胞淋巴结粘附分子adherin的表达，进而促进了淋巴结的粘附[10]；同时MAGE-A3 mRNA的表达还能够增加癌细胞上皮间质转换的风险，最终促进肿瘤浸润深度和临床分期的进展。但在不同病理学类型或者中分化程度的患者中，MAGE-A3 mRNA的表达并无明显的差异，表明MAGE-A3 mRNA的表达并不会影响到肺癌的癌细胞分化来源，不会影响到肺癌细胞的分化成熟能力。

综上所述，在NSLCL患者中，MAGE-A3 mRNA的表达水平明显上升，同时MAGE-A3 mRNA的表达与肺癌患者的临床分期或者淋巴结转移密切相关。对于MAGE-A3 mRNA的表达在肺癌诊断过程中的价值仍然需要研究。本次研究的局限性在于未能够通过PCR电泳的方法探讨MAGE-A3 mRNA的表达情况，希望后续研究可以跟进。