标本处理方法对甲状旁腺激素检测的影响

王路长，魏晓玲，贺 晨，游 婷，胡 莹

四川省成都市第二人民医院检验科，四川成都 610017

甲状旁腺激素(PTH)在甲状旁腺合成，并分泌到血液中。完整甲状旁腺激素(iPTH)是含有84个氨基酸的单个直链多肽，相对分子质量约为9 500；其生物活性决定于N 端的第1～27 个氨基酸残基；生物活性N-端片段的半衰期仅有几分钟。iPTH的选择性测定可直接判定甲状旁腺的分泌能力[1-3]。血液中PTH存在3种形式[4]：(1)iPTH(1～84)，具有生物活性，占5%～20%，半衰期非常短(2～4 min)；(2)羧基端PTH片段，无生物活性，如PTH(36～84)、PTH(44～84)、PTH(49～84)、PTH(53～84)等，占75%～95%，半衰期可达25～60 min；(3)氨基端PTH片段，有生物活性，如PTH(1～34)，血中水平较低，半衰期亦短。《全国临床检验操作规程》[5]推荐使用血清检测；世界卫生组织(WHO)文件[6]则推荐使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血浆检测，但针对不同的机型，也可使用或限制性使用血清、肝素抗凝血浆和枸橼酸钠抗凝血浆。本院使用日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪，在测定PTH的说明书上要求使用血清或者EDTA 抗凝血浆。由于笔者曾遇到过因质控保存问题导致结果失控的事件，后来在文献中发现标本保存对其结果存在影响，为了明确标本类型及保存条件对PTH检测结果的影响，特设计此试验进行验证。

1 资料与方法

1.1标本来源 选择2019年3-7月在本院就诊的10例患者，所取标本的iPTH结果覆盖本仪器测定的线性范围(0～1 000 pg/mL)高中低值。

1.2仪器与试剂 日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪及其配套的iPTH检测试剂(批号:I9R5217)及校准品(批号：200520646180000)，质控品采用美国伯乐公司生产的内分泌质控品(批号：54640)双水平，采血管采用成都瑞琦科技实业有限公司生产的血清管(黄管)、EDTA管(紫管)、肝素管(绿管)，所有试管、试剂、定标液、质控品均在有效期内。

1.3方法 仪器处于稳定状态，所有测试与患者标本同时检测，在检测过程中，两水平质控CV值均低于8%(1/3个最大允许误差25%)。所有标本在采集后2 h内进行初次检测，每例患者采集9管血液，每种试管各3管，分为3组，每组包括每例患者每种试管各一管，一组冷藏(2～8 ℃，平均温度4.9 ℃)保存，一组冷冻(-18～-22℃，平均温度-21 ℃)保存，测定时间均为0、8、24、72 h；一组室温(18～25 ℃)保存，测定时间为0、2、4、8、24 h。

2 结 果

2.1各种试管0 h结果比较 以试剂说明书及WHO推荐的EDTA抗凝管作为标准管进行比较。所有标本0 h(2 h内)测定结果的比较时，血清管、肝素管分别与EDTA管之间的结果比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 血清及不同抗凝剂0 h(2 h内测定结果)所测PTH结果比较

2.2室温保存结果 血清管检测结果随着时间的推移，iPTH检测结果逐渐降低，2、4、8、24 h的检测结果与0 h比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，放置24 h后，结果降低幅度达22.56%。EDTA管检测结果随时间推移变化不大，2、4、8、24 h的检测结果与0 h比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。肝素管检测结果在4 h内结果稳定，8、24 h的检测结果与0 h比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 室温保存中血清及不同抗凝剂所测iPTH结果的比较及变化情况

2.3冷藏保存结果 血清管随时间的推移逐渐降低，8、24、72 h iPTH的检测结果与0 h比较，差异均有统计学意义(P<0.05),放置72 h后，结果降低幅度达23.35%，从结果上显示冷藏降低的幅度略低于室温，24 h达15.98%；EDTA管和肝素管在冷藏下72 h内结果稳定性较好，8、24、72 h的检测结果与0 h比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 冷藏(2～8 ℃)血清及不同抗凝剂所测iPTH结果的比较及变化情况

2.4冷冻保存结果 血清管、EDTA管和肝素管在冷冻保存下，8、24、72 h iPTH的检测结果均较0 h降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，但是在冷冻8 h后，随着时间增加降低效果不明显。见表4。

表4 冷冻(-18～-22 ℃)血清及不同抗凝剂所测iPTH结果的比较及变化情况

3 讨 论

PTH调节钙磷代谢，是维持机体钙平衡的主要激素，其分泌水平影响着血钙和血磷水平，促使血钙水平升高，血磷水平下降[7-8]。PTH作用的主要靶器官是骨和肾脏,其主要是通过促进肾小管对钙离子的重吸收和磷酸盐的排泄，使血钙水平增加和血磷水平下降。血清中PTH水平过低导致低钙血症，低钙血症导致的症状包括肌肉痉挛、手足抽搐，影响心功能，甚至引起心肌损伤，并有报告显示PTH导致的钙离子平衡紊乱与高血压相关。PTH通过抑制近端肾小管磷酸钠协同转运蛋白增加肾脏排磷，其缺乏可引起高磷血症、甲状旁腺功能亢进等，可造成肾性骨病、周围神经系统改变以及顽固性的皮肤问题等，对患者的生命质量造成影响。因此，准确测量PTH水平对于采取何种治疗，以及对治疗的效果进行评估都非常重要。检验科的责任就是为临床提供真实、可靠的检验指标，为其诊疗提供指导和帮助，而分析前的因素对检验准确性影响巨大，检验人员必须严格控制这些因素，降低这些因素带来的危害，为患者为临床提供一份高质量的检验报告。

PTH的检测最早使用放射免疫分析法，由于放免方法的污染性强，现在基本试剂厂家均采用化学发光法进行检测。本科室的日本东曹AIA2000全自动化学发光分析仪采用双抗体夹心的方法测定血清中iPTH，该片段为活性成分，但是半衰期较短，因此标本的保存处理将会大大地影响结果。通过本次研究，笔者发现该公司检测试剂的最佳抗凝剂与WHO推荐的使用EDTA抗凝管[6]相符，EDTA抗凝血清在室温(18～25 ℃)及冷藏(2～8 ℃)的稳定时间可以达到72 h,与之前王春雷[9]的研究结果基本相符,也可以使用肝素抗凝，虽然冷藏(2～8 ℃)稳定时间可达到72 h，但是在室温时，4 h内尚稳定，8 h后下降明显，可能是随着时间的推移，部分iPTH与肝素非特异性结合导致[10]；对于血清管，在放置2 h结果就已经开始下降大约4%，并且随后成倍降低，24 h就降低高达20%；原因可能为血标本在凝固时释放某些物质加速了iPTH的降解，而EDTA和肝素可以维持完整iPTH的稳定，降低其降解速度。虽然不同厂家在检测具体物质方面可能存在差异，但是通过本研究发现，对于检测完整的iPTH片段来说，最好使用EDTA或者肝素抗凝，而且在标本采集后应尽快离心检验，如果不能及时检验，可以放置于2～8 ℃冰箱内，可以稳定72 h，最好不要分装冻存。