秀珍菇母种培养基最佳碳、氮源探究

谢 永，谌金吾，宋吉玲，王 杰，孙厚静，王正文，姜发洋，吴凤莲

(1.贵州省黔东南州农业科学院，贵州 凯里 556000； 2.杭州市农业科学研究院，浙江 杭州 310024)

秀珍菇母种培养中碳源和氮源筛选中，冯志勇等[1]认为，秀珍菇营养碳源可溶性淀粉优于葡萄糖和蔗糖；而郭炜等[2]人认为葡萄糖优于蔗糖和可溶性淀粉；鲁欣等[3]人秀珍菇在蔗糖碳源中生长速度最快，可溶性淀粉、果糖次之，葡萄糖碳源中生长速度最慢，而李守勉[4]等则认为在果糖和麦芽糖碳源中生长速度最快，蔗糖、可溶性淀粉次之。

在氮源筛选中，冯志勇、鲁欣、李守勉等人对氮源筛选是结果一致，酵母粉优于蛋白胨；尿素作为唯一氮源时，菌丝不生长。而郭炜等人最优为蛋白胨，其次是酵母粉，以尿素作为唯一氮源时菌丝仍然生长。鉴于以上研究结果差异甚大，特进行本试验。

1 材料与方法

1.1 供试材料

共收集来源不同的秀珍菇种质资源6份(见表1)。

表1 供试秀珍菇菌株

1.2 试验方法

1.2.1菌株间拮抗试验

将供试菌株接种于直径为7 cm的PDA平板培养基上，6个菌株间彼此相互两两配对，置于平板中心并相距2 cm。封口后置于25 ℃恒温培养箱中培养，观察菌株的菌落前端接触部分的拮抗反应，以区别相同或不同的菌株。

1.2.2不同碳源对菌丝生长的影响

分别用果糖、蔗糖、糊精、淀粉替代基础培养基中的葡萄糖。具体配方如下：葡萄糖20 g，蛋白胨8 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL。

每个碳源处理为每个平板接入活化的7 mm菌种块，置于25 ℃恒温培养箱中黑暗培养，设3次重复。当有一个处理的菌丝长满培养皿时，结束全部培养，记录菌丝生长速度，观察菌丝生长势。

1.2.3不同氮源对菌丝生长的影响

分别酵母粉、硫酸铵、硝酸钾、尿素替代基础培养基中的蛋白胨。每个处理3次重复，试验步骤同1.2.2。

2 结果与分析

2.1 拮抗试验结果

本研究中将6个供试菌株两两直接配对培养，观察生长情况。试验结果表明，除菌株P 618和P 629之间无拮抗反应外(图1-m)，其余各菌株间均有拮抗反应，其中菌株秀大与P 608、P 612之间拮抗反应不是很明显(图1-a、图1-b)。说明P 618与P 629之间亲缘关系近，但是否属于同一品种还需进一步进行遗传物质DNA分析；秀大与P 608和P 612之间的亲缘关系较近，拮抗线不明显；其余菌种之间拮抗线隆起非常明显，说明彼此之间亲缘关系远。

表2 各菌株间的拮抗反应

2.2 不同碳源对菌丝生长的影响

由表3可知，不同碳源对秀珍菇菌丝生长速度及生长势有不同的的影响。以可溶性淀粉为碳源时，秀大、P 612、P 618和P 629四个菌株的菌丝生长速度最快，明显大于其他碳源；其次是以蔗糖为碳源时，菌株P 608的菌丝生长速度最快，为5.488 mm/d；以糊精为碳源时，菌株NH 7438的菌丝生长速度最快，为5.356 mm/d。从菌丝生长势上看，以可溶性淀粉和糊精为碳源时，菌丝生长势最好，优于其他处理组，表现为健壮、洁白、菌落完整、边缘整齐，葡萄糖和果糖次之，能形成完整的菌落，以蔗糖最差，菌丝纤细。

表3 不同碳源中各菌种的菌丝生长速度 (单位：mm/d)

2.3 不同氮源对菌丝生长的影响

从表4可以看出，秀珍菇菌丝对氮源的利用具有选择性，酵母粉是秀珍菇菌丝生长较好的氮源，其对菌丝生长势及长速的作用明显高于其他氮源，其次为蛋白胨；以尿素做氮源时，菌丝不萌发。在硝酸钾和硫酸铵作为氮源培养时，菌丝生长速度虽然稍慢于酵母粉和蛋白胨，但是菌丝生长稀疏、长势不良。

表4 不同氮源中各菌种的菌丝生长速度 (单位：mm/d)

3 小结与讨论

在秀珍菇碳源筛选试验中，秀珍菇菌丝生长最适碳源是可溶性淀粉，糊精在这几个品种中的适用性不及可溶性淀粉广；其次是葡萄糖和果糖，蔗糖最次。在秀珍菇菌丝氮源筛选试验中，无论从菌丝生长速度还是菌丝生长势方面，酵母粉都是最适氮源。以硝酸钾和硝酸铵为氮源时，菌丝生长速度稍慢，长势较弱，因此不适宜做秀珍菇氮源。以尿素为氮源时，菌丝不萌发，这与冯志勇等人研究结果一致。这可能是由于高温灭菌时尿素发生缩合反应生成缩二脲、缩三脲、三聚氰酸等，导致无法被菌丝利用，故不生长。本研究针对不同地区收集和杂交选育的种质资源进行不同碳氮源对其生长影响的研究，结果表明，秀大、NH 7438菌丝生长速度最快，秀大菌丝更浓密、粗壮。综合菌丝生长速度、浓密度、粗壮与否等因素对以上品种进行排序，秀大>NH 7438>P 612>P 608>P 618=P 629。