大肠腺癌组织中环状核糖核酸92400的表达及临床病理意义

颜 云, 郭玉莲, 王成海, 3

(1. 扬州大学附属医院 病理科, 江苏 扬州, 225009;2. 扬州大学医学院/转化医学研究院 病理学教研室, 江苏 扬州, 225009;3. 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室, 江苏 扬州, 225009)

大肠癌是常见的恶性肿瘤，是导致死亡的重要原因[1]。绝大多数大肠癌患者最终死于无法控制的远处转移和复发[2-3]。环状核糖核酸(circ-RNA)是一种共价闭环或者腺苷尾巴的非编码蛋白RNA。研究[4-5]表明circ-RNA参与了肿瘤发生、发展过程，如肺癌组织中circ-13958的表达明显上调，已成为一种新的肺癌促癌基因[6]。circ-MTO1可促进p21表达并抑制肝癌细胞的发生、发展[7]。circ-92509作为一种促癌基因，可通过结合miR-448促进骨肉瘤的增殖和转移[8]。本研究采用RNA原位分子杂交技术检测环状核糖核酸92400(circ-92400)在大肠腺癌组织及癌旁正常肠组织中的表达情况，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2020 年3月扬州大学附属医院102例大肠腺癌组织标本及对应的正常肠黏膜组织标本，患者年龄 38～75 岁，中位年龄49岁; 男56例，女46例。所有大肠癌患者术前均未行放射治疗和药物治疗。腺癌病理学类型经病理医师确诊。标本使用及临床病理参数的收集整理均经扬州大学附属医院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。 采集新鲜大肠腺癌组织后立即置于液氮罐里长期保存待用。

1.2 RNA原位分子杂交实验

circ-92400 RNA探针和原位杂交试剂盒购自武汉BOSTER生物工程有限公司。主要实验步骤: 将厚度5 μm病理切片按常规方法石蜡脱水。使用胃蛋白酶消化切片并暴露切片组织中RNA核酸片段。预杂交后使用RNA探针进行杂交，在42 ℃恒温箱里放置12 h, 加过氧化氢封闭液后滴加一抗(生物素化鼠或兔抗地高辛)1 h, 然后滴加二抗(链霉亲和素-生物素复合物)，最后滴加生物素化过氧化物酶。使用二氨基联苯胺(DAB)呈棕黄色显色，流水中止后用苏木素将细胞核对比染成蓝色，烘干透明封片，光镜下观察。

染色结果判定标准: 细胞中出现棕黄色颗粒为circ-92400阳性细胞; 光镜下随机选择5个高倍视野，计算阳性细胞占总细胞数的百分率, <1%为阴性, 1%～100%为阳性。根据试剂盒说明书设置阳性对照组，不加一抗的染色组织为阴性对照。

1.3 统计学方法

采用SPSS 10.0对数据进行统计分析，运用Graph Pad Prism6 软件对图片进行处理。计量资料符合正态分布，采用均数±标准差表示，组间比较采用配对样本t检验。计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 circ-92400在大肠腺癌组织中的表达情况

RNA原位杂交实验结果表明, 102例大肠腺癌组织中circ-92400 的染色表达主要定位于细胞浆，呈现为大小不等、着色深浅不同的棕黄色颗粒，为阳性表达; 其在癌旁正常肠黏膜组织中几乎没有棕黄色颗粒表达，为阴性表达。见图1。circ-92400 在大肠腺癌组织中的阳性细胞百分比数值为(58.00±13.00)%, 高于癌旁正常肠组织的(11.00±3.00)%, 差异有统计学意义(t=5.84,P<0.05)。

2.2 circ-92400的阳性表达与临床病理参数的关系

在102例大肠腺癌组织中, circ-92400的阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤TNM分期、分化程度有相关性，差异有统计学意义(P<0.05), 与年龄、性别、肥胖、肿瘤直径、肿瘤分级均无相关性，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

3 讨 论

大肠癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤之一，与高脂低膳食纤维饮食习惯、吸烟、嗜酒、炎性肠病等因素有关。目前大肠癌的致病机制尚未明确。SANGER H L等[9]在病毒中发现一种与线性 RNA不同的单链环状RNA, 命名为circRNA。研究[10]表明, circRNAs作为一类广泛而多样的内源性RNA, 可以调节编码基因和非编码基因的表达，如大肠癌组织中circ-20397与miR-138 表达水平呈显著负相关，其参与了大肠癌的发生、发展过程。circRNAs能以外泌体的形式存在于微囊泡中，完成细胞与细胞间的信息传递[11-12]。circ-KLDHC10在大肠癌患者血液中的表达水平显著高于健康对照组，有望成为诊断大肠癌的新型检测分子[13]。circ-12673和circ-MAN2B2可通过海绵吸附相关的微小RNA解除其对下游靶基因的抑制作用，从而促进肺癌细胞的增殖[14-15]。三阴性乳腺癌组织中circ-EPSTI1 能通过海绵体抑制miR-4753/6809, 促进BCL11A的蛋白表达，从而诱导癌细胞增殖和凋亡，为临床提供新的治疗靶点[16]。circ-181在胃癌组织和血浆中表达上调，且其高表达与肿瘤直径、淋巴结转移、肿瘤病理分期和癌胚抗原(CEA)表达密切相关[17]。研究[18]发现circ-78710对肝癌细胞的增殖和侵袭有很好的促进作用。circ-67934在宫颈癌组织和细胞系中表达上调，而沉默circ-67934 表达后则会抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移[19]。

A: circ-92400在大肠腺癌组织中呈阳性表达，胞浆中出现棕黄色颗粒; B: circ-92400在癌旁正常肠黏膜组织中呈阴性表达。

表1 circ-92400在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义

本研究采用RNA原位分子杂交技术发现在102例大肠腺癌组织中circ-92400呈现阳性表达，为77.45% (79/102), 并用阳性细胞百分比证实circ-92400在大肠腺癌组织中的表达量高于癌旁正常组织中的表达量，差异有统计学意义(P<0.05), 提示circ-92400可能是一种新的促癌基因，参与了大肠腺癌的发生、发展过程。本研究结果还表明，大肠腺癌患者circ-92400阳性表达率越高，则肿瘤瘤体越大，分化程度越低，淋巴结越容易发生转移，以及TNM 分期越高，提示circ-92400阳性率与患者预后结局有相关性, circ-92400的阳性表达对大肠腺癌的诊断、转移和预后评估有一定的价值。

综上所述，大肠腺癌组织中circ-92400呈阳性表达，其阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤TNM分期、分化程度密切相关，circ-92400或可作为大肠腺癌的新的肿瘤标志物。