郑州地区献血者人群中HLA-A、B基因多态性与HBV相关性分析*

康轶青，刘 铮，张伯伟

( 河南省红十字血液中心科研外事科，郑州 450012)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是全球分布的重大公共卫生健康问题，HBV可以通过血液传播，因此也是输血安全研究领域中的重要研究方向。全球有 2.57 亿人长期感染HBV，其中15%～25%的 HBV 感染患者最终发展为肝硬化及肝癌，2015年HBV感染在全球共造成了 88.7 万人死亡[1]。我国更是乙型肝炎(简称乙肝)大国，2015年国家调查数据显示1～59岁人群中HBsAg感染率为5.2%[2]，虽然健康成年人在受到HBV感染后有90%以上会在半年内完全清除病毒并痊愈，但仍有8%～10%会逐渐转为慢性乙肝、肝硬化甚至是肝细胞癌[3]，HBV感染的结局在很大程度上取决于个体对于病毒的免疫过程。免疫反应不同进而出现不同的临床过程和表型[4-5]，人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)在人类所有基因组中多态性最高，最为复杂,在人类免疫应答中的重要作用是提呈抗原以供T细胞识别，已有研究[5]显示机体对于HBV的易感性或抗性与个体HLA基因有关，感染后的转归和结局也会受到不同程度的影响，但由于全世界不同种族、不同地域人群的HLA等位基因及其单体型分布具有明显特征性，因此各地的研究结论也不尽相同。本研究通过分析比较2组研究对象间HLA-A、B等位基因分布差异，进一步研究郑州地区献血者HLA-A、B多态性和HBV之间的关联性，为针对乙肝开展基因预防和基因治疗提供理论基础，报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 选取HBV抗体经过2遍酶联免疫吸附试验(ELISA)检测均阳性的129名献血者为乙肝组，并以郑州地区3 874名健康造血干细胞志愿者为健康对照组。本研究所有血液标本的采集均征得献血者的同意。2组研究对象的基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 2组研究对象基本资料比较[ n(%)]

1.2 方法

1.2.1 HBV抗体检测 对乙肝组标本采用2个厂家的试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司及北京万泰生物药业有限公司)进行2遍 ELISA平行检测。实验操作和判定结果严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 HLA检测 提取人类基因组DNA均采用TBG全自动DNA提取系统(DNA提取试剂盒购自美国TBG公司)，采用聚合酶链-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence-specific oligonucleotide,PCR-SS0)技术对HLA位点在Luminex平台进行基因分型(SSOP试剂盒购自美国Thermo Fisher公司)。

2 结果

HLA-A、B位点在2组间有明显差异的基因频率，见表2。其中A*11、A*29、A*31、B*56的频率在乙肝组中高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.001)，B*07在乙肝组中频率低于健康对照组，差异有统计学意义(P=0.022，OR=0.369)。

表2 HLA-A、B基因型与HBV的关联分析[ n(%)]

表2(续)

3 讨论

大多数人感染HBV后能自动清除，而有些人群感染后却发展为肝炎甚至肝癌，表明HBV感染具有个体差异。HBV 病毒的清除依赖于宿主的免疫应答差异，而个体的免疫应答能力取决于主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)[6]，HBV感染初期由NK细胞介导的天然免疫反应缺失，宿主依靠MHC分子对HBV的识别并提呈给T细胞或B细胞，因此MHC分子是通过细胞免疫和体液免疫对HBV感染作出清除反应的[7-8]。相对于HLA-Ⅱ类基因，HLA-Ⅰ类基因与HBV感染的相关性研究报道较少，2013年HU等[9-10]通过对 5 181 例HBV感染者与 6 610例健康人之间的基因关联分析研究，发现 HLA-C 相关明显增加HBV感染风险，并发现该SNP rs3130542A位点与HBV持续性感染及增加宫内 HBV垂直感染均相关。HLA-A、B基因与HBV感染相关性研究国内较少开展，卢晓敏等[11]对于山东地区HLA-A基因频率与HBV感染的相关性研究中发现HLA-1101与HBV携带者相关以及刘铮等[12]对于河南地区的研究结果中HBV感染患者组HLA-B*07明显低于对照组，与本研究结果相近；而梁军等[13]对于新疆维吾尔族的研究中发现，HLA-A33与HBV携带者相关，HLA-B52具有较强抗HBV感染能力，与本研究结果相差较大，可能为不同种族与地区研究人群HLA多态性相差较大的原因。

本研究采用PCR-SS0完成乙肝组和健康对照组血液标本的HLA-A、B基因分型，分析2组基因频率是否存在统计学差异，结果显示，A*11、A*29、A*31、B*56等基因型与HBV抗体阳性有显著正相关，而B*07则与HBV抗体阳性呈负相关，2组基因型可能分别为HBV感染的易感基因和保护基因。为深入研究HLA 基因型对人类HBV感染的影响提供了线索，从而达到在基因水平进行HBV的预防及治疗。