“抢青”采摘对酸枣仁质量的影响△

周赛男，郭宝林

1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.山西医科大学，山西 太原 030001

“抢青”多指果实种子类药材在未达到适合采收期而提前采收的现象。“抢青”产生的原因主要是产新期前该药材价格一般处于高位，提前采收后能提前上市获得好的收益。连翘、五味子、栀子、八角、决明子等都存在“抢青”现象，以没有权属的野生药材最为严重。采收期的差异将带来药材质量的变化，是非常值得关注的问题。本课题组曾经报道过连翘“抢青”带来的成分含量变化[1]。近年来，酸枣仁药材的“抢青”问题也比较严重，“抢青”采收的酸枣种子不成熟、总产量降低、种子干瘪、种皮占比较大，可能影响其质量。酸枣仁是鼠李科植物酸枣ZiziphusjujubaMill. var.spinosa(Bunge) Hu ex H. F. Chow的干燥种子，具有养心补肝、宁心安神、敛汗生津的功效[2]。酸枣仁是药食同源品种，在养神助眠等功能食品中也广泛使用，用量逐年增加。野生酸枣分布于华北各地，产地的老百姓一般在8月中旬酸枣未成熟时开始采收，到9月中旬采收基本结束。传统的采收时间在10月1日之后，也就是说对于酸枣仁，“抢青”这一做法已经形成了当今采收的惯例。本研究设计分离出种皮和种仁2个部位，在多个产地，从“抢青”时间到种子完全成熟的各个时期采收酸枣，测定酸枣仁不同采收时间和不同部位成分含量变化，在课题组前期建立的含量测定方法[3]基础上，测定了三萜皂苷类(酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B)和黄酮类(斯皮诺素和6‴-阿魏酰斯皮诺素)4个主要成分含量。

1 材料

1.1 样品

1.1.1酸枣仁不同部位实验样品 酸枣仁样品购自河北安国，产地分别为甘肃(GS)和山东(SD)，手工将种皮和种仁分离干净，每份样品不少于10 g，样品信息见表1。

表1 酸枣仁不同部位实验样品信息

1.1.2不同采收期实验样品 在山西大宁、河北元氏、山东莱芜和北京海淀4个主要产地，采集对象为生长旺盛、结果多的植株，采集时间为8月中旬—11月上旬，每次采样均间隔半个月。1个重复10株，每株采集20粒果实，合并200粒果实为1个样品，3个重复。每个采收期来自同样的植株。每次收集完果实样品，均晾干后去果肉去壳。样品经中国医学科学院药用植物研究所郭宝林研究员鉴定为鼠李科植物酸枣Z.jujubaMill. var.spinosa(Bunge) Hu ex H. F. Chow的干燥种子，样品信息来源见表2。

表2 不同采收期酸枣仁药材信息

1.2 试药

斯皮诺素、6‴-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品均购自成都曼思特生物科技有限公司，纯度均大于98%；乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；蒸馏水购于杭州娃哈哈集团有限公司；其他试剂均为分析纯。

1.3 仪器

ACQUITY UPLC(美国Waters公司)包括四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、ELS检测器、TUV检测器、Empower色谱工作站；AT261DeltaRange+w十万分之一天平(METTLER TOLEDO仪器有限公司)；FA210N电子天平(上饶市鸿翔实业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

分别精密称取4种对照品适量于5 mL容量瓶中，甲醇溶解，定容至刻度，得斯皮诺素2.110 mg·mL-1、6‴-阿魏酰斯皮诺素1.950 mg·mL-1、酸枣仁皂苷A 2.176 mg·mL-1、酸枣仁皂苷B 1.004 mg·mL-1的对照品储备液，并各取1 mL置5 mL的容量瓶中，定容，既得混合对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取酸枣仁药材粉末(过三号筛)1.0 g于50 mL具塞锥形瓶中，加入30 mL的70%乙醇，常温超声提取(功率500 W，频率40 kHz)90 min，过滤，滤渣用8 mL的70%乙醇洗涤，合并滤液与洗液，将其转移至旋蒸瓶中，旋干，用甲醇定容至5 mL的容量瓶中，摇匀，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

色谱柱：ACQUITY C18柱(150 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～4 min，14.5%～16%A；4～5 min，16%～20%A；5～9 min，20%A；9～11 min，20%～37%A；11～17 min，37%A；17～19 min，37%～100%A；19～22 min，100%A；22～24 min，100%～14.5%A；24～27 min，14.5%A)；体积流量：0.3 mL·min-1；柱温：35 ℃；进样量：3 μL；检测波长：335 nm；ELSD条件漂移管温度：60 ℃；气压：172 kPa。色谱图见图1。

注：A.对照品UV色谱图；B.样品UV色谱图；C.对照品ELSD色谱图；D.样品ELSD色谱图；1.斯皮诺素；2.6‴-阿魏酰斯皮诺素；3.酸枣仁皂苷A；4.酸枣仁皂苷B。图1 酸枣仁对照品和样品UPLC图

2.4 含量测定

所有样品的含量结果见表3～4，不同采收期含量变化见图2。

表3 酸枣仁不同部位中2种黄酮和2种皂苷的质量分数(n=3) %

在种仁和种皮中同时存在2种黄酮和2种皂苷，但在种仁中的含量显著高于种皮，2种黄酮的种仁含量约为种皮含量的3倍，酸枣仁皂苷A的种仁含量约为种皮含量的2倍，酸枣仁皂苷B在种皮和种仁含量相近。

所采集样品中，不同采收期4个产地的测定结果所显示的变化规律一致，即随着酸枣果实成熟，黄酮类成分和皂苷类成分的含量均逐渐升高，该变化和文献报道一致[4]，其中在9月下旬斯皮诺素和6‴-阿魏酰斯皮诺素的含量达到最高点，其后直到11月上旬基本稳定，而在9月中旬酸枣仁皂苷A和B的含量达到最高点(其中酸枣仁皂苷B稍早一些)，其后基本稳定，和酸枣果实的完全成熟时间相一致[5]。

表4 酸枣仁4个产地不同采收期样品中2种黄酮和2种皂苷的质量分数 %

注：A.河北元氏；B.山东莱芜；C.北京海淀；D.山西大宁。图2 酸枣仁4个产地不同采收期样品含量变化

4个成分中随果实成熟变化幅度最大的是斯皮诺素。这一结果表明，酸枣仁的采收时间是影响质量的重要因素，传统的酸枣仁采收时间(10月1日后)是合理的，而“抢青”采收降低了酸枣仁的质量，越早采收两类成分的含量越低，如传统采收期采收的酸枣仁中斯皮诺素含量约为8月中旬采收的含量的3倍。

2.6 结论

由本研究可以看出，“抢青”采收将严重影响酸枣仁药材中黄酮类成分和皂苷类成分的含量，《中华人民共和国药典》规定酸枣仁药材中斯皮诺素的质量分数不低于0.08%，酸枣仁皂苷A的质量分数不低于0.03%。经市场调研发现，酸枣仁药材中斯皮诺素的含量差异比较大，除不同产地影响其含量外[6-7]，“抢青”采收也可能是主要影响因素。“抢青”采收后的未成熟酸枣仁比较干瘪，种皮占比例较高，而种皮中各成分含量显著低于种仁，应该是导致含量低的一个原因，应严格控制酸枣仁的采收期，但两类主要成分在酸枣仁发育成熟过程的各个部位中的含量变化还可以做进一步研究。

“抢青”采收和其中黄曲霉毒素产生有一定的关系。早期采摘的果实果肉含水量大，比较黏，大多用堆沤方法，让果肉腐烂后清洗去果肉，过程中引入了黄曲霉菌的感染[8]。未成熟种子比较干瘪，加工过程容易产生种皮破裂，丢失了厚种皮的防护而易染菌。此外，未成熟种子含水量高，容易受到黄曲霉菌浸染。因此“抢青”采收可能也是引起黄曲霉毒素增加和超标的重要因素。