HPLC-RID法测定银柴颗粒中蔗糖的含量研究

谢莹莹 龙海燕▲ 粟 贵 石 蓉

1.湖南省药品检验研究院 （湖南药用辅料检验检测中心），湖南长沙 410001；2.湖南省药品质量评价工程技术研究中心，湖南长沙 410001

银柴颗粒是我国独有品种，本品主要由忍冬藤、芦根、薄荷等5味药材组成，具有清热，解表，止咳的功效，临床上用于治疗风热感冒，发热咳嗽[1-2]。蔗糖作为药用辅料在药剂中主要作为甜味剂或矫味剂，广泛用于口服制剂中，是糖浆剂、颗粒剂的主要成分，片剂的填充剂、黏合剂，糖衣片的包衣材料等[3-4]。银柴颗粒制法中显示采用蔗糖作为甜味剂或矫味剂，而现行质量标准无蔗糖检查项，那么蔗糖的实际添加情况无法得知，不排除个别企业为降低成本低量投料的可能。调研时，有企业指出国内有厂家在蔗糖中可能人为添加葡萄糖等其他糖或直接用比蔗糖便宜的如葡萄糖、麦芽糖等单糖或双糖代替蔗糖以降低成本。目前，采用高效液相色谱法分析检测不同糖在食品、乳制品、中成药的文献很多[5-11]，我们参考相关文献[12-15]采用HPLC法结合示差折光检测器对蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖含量进行检测，为合理有效控制银柴颗粒质量提供技术手段。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters公司e 2695高效液相色谱仪（2414 RI检测器）；瑞士Mettler-Toledo公司MS205DU电子天平。

1.2 试药

果糖 对 照品（批号：100231-201606，纯 度：99.7%）；D-无水葡萄糖对照品（批号：10833-201506，纯 度：99.9%）；麦芽 糖 对 照 品（批号：100287-201303，纯度：94.3%）；蔗糖对照品（批号：111507-201303，纯度：99.8%）；以 上对照品均来自中检院。乙腈（批号：AH015-4HC）为色谱级，购自美国默克公司。银柴颗粒12批。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色 谱 柱：Alltechchrom Prevail carbohydrate ES 5u色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（75∶25）；流速：1.0mg/mL；色谱柱温度：35℃；检测器：示差检测器；检测器温度：40℃；进样量：10μL。

2.2 溶液的制备

供试品溶液制备：取本品0.5g，精密称定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品系列溶液制备：分别精密称取果糖、葡萄糖、麦芽糖和蔗糖对照品50.81、50.84、26.53、78.28mg，置同一10mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，分别精密量取适量，用水定量稀释，配成对照品系列溶液（其中果糖和葡萄糖浓度约为0.5、1、2、3、4、5mg/mL；蔗糖浓度约为 0.75、1.5、3、4.5、6、7.5mg/mL；麦芽糖浓度约为 0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg/mL。

2.3 专属性试验

取空白溶剂（水）、供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪记录色谱图，结果：空白溶液对样品测定无干扰，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖分离度符合规定。典型图谱见图1 。

图1 HPLC色谱图

2.4 线性关系考察

取“2.2”项下对照品溶液中的线性系列溶液，按“2.1”项下的色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为X轴、峰面积为Y轴进行线性回归，测定结果见表1。

2.5 检出限和定量限

取“2.2”项下对照品贮备液适量，逐级稀释，并进行测定，以信噪比S/N=10和S/N=3时各对照品的量为定量限和检测限，见表1。

表1 线性关系、检出限、定量限、方法检出限结果

表2 回收率试验结果（n=6）

表3 样品测定结果（%）

2.6 精密度试验

取“2.2”项下线性同一系列溶液，按“2.1 ”项下的色谱条件，连续进样6次，记录峰面积。结果蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖峰面积RSD分别为 1.50%、1.17%、1.63%、2.29%，说明进样精密度良好。

2.7 重复性试验

按“2.2”项下供试品溶液，取样品（批号：170401）0.5g，精密称定，平行制备6份供试品溶液，并按“2.1 ”项下的色谱条件进样分析，结果蔗糖、葡萄糖有检出，平均含量分别为49.37%、43.85%，RSD分别为1.45%、1.29%，说明本方法重复性好。

2.8 稳定性试验

取“2.7”项下的供试品溶液1，在室温25℃放置 0、2、4、6、8、12、24h 各进样 20μL，结果蔗糖、葡萄糖测定值的RSD分别为0.50%、2.03%，说明供试品溶液在24h内稳定性较好。

2.9 回收率试验

（1）分别称取6份样品（批号：170401，其中蔗糖、葡萄糖含量分别为49.37%、43.85%）0.25g，置50mL量瓶中，分别精密加入蔗糖、葡萄糖对照品适量，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为回收率溶液①；（2）分别称取6份样品（批号：170401，果糖、麦芽糖含量均未检出）0.5g，置50mL量瓶中，分别精密加入果糖、麦芽糖对照品适量，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为回收率溶液②；取回收率溶液按“2.1”项下方法测定，计算回收率，结果见表2。蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖的平均回收率分别为100.05%、99.01%、96.49%、96.62%，RSD分别为1.00%、1.36%、1.93%、4.49%。

2.10 样品测定结果

取银柴颗粒12批样品各适量，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算样品中蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖含量。见表3。

3 讨论

本实验结果显示12批样品均未检出麦芽糖，说明收集到的样品均未非法添加麦芽糖。B、C、E、F企业6批样品中均检出果糖，但果糖量仅为同批次样品中的蔗糖含量的1%，推测果糖可能为蔗糖辅料中的杂质成分，说明未非法添加果糖。A企业5批样品中均检出葡萄糖，且检出量较大43.85%～50.75%，与同批次样品中的蔗糖含量相比约为1∶1；根据购买A企业样品时收集到的说明书可知辅料为蔗糖，说明该企业可能人为添加葡萄糖进行投料，而企业并未对其质量进行评估，存在一定的安全隐患。

本研究建立了一种有效检测银柴颗粒中蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖的高效液相色谱法，该方法简便、准确，可有效分离各糖类成分，可真实反映银柴颗粒中蔗糖的实际添加情况，以防人为添加其他糖类物质，可为银柴颗粒在生产过程中的质量控制提供参考性资料依据。