基于HPLC法研究广藿香中加入陈皮后水溶性成分的变化规律*

齐乐辉，龙丹丹，孟 鑫，田 园，许树军

（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040）

广藿香，为唇形科植物广藿香（Pogostemon cablin（Blanco）Benth）的干燥地上部分，其拉丁名为Pogostemonis Herba[1]。广藿香是中医临床治疗过程中经常使用的中药，常用于鼻渊头痛、腹痛吐泻等症状的防治。有关于广藿香的研究文献表明，挥发油成分和水溶性成分是广藿香发挥药理作用的主要成分[2,3]。《中国药典》（2015年版）中选用了广藿香的挥发性成分百秋李醇作为标准品对广藿香进行了鉴定。

中医临床上经常使用广藿香和陈皮两种药材，陈皮和广藿香都可用于治疗恶心呕吐，并且中医临床中二者的配伍应用广泛，《医学从众录》中记载“陈皮藿香汤”，陈皮和广藿香各用5钱，主治霍乱吐泻。因此，对于加入陈皮后对广藿香中某种化学成分的提取效率的影响的研究是有证可循的。中药药对中两味药物的配伍比例不同，使用时其有效的化学成分往往会发生变化，或是有新的成分产生，或是化学成分的含量发生变化[4-6]。药物的药理效应基础在于其化学成分，尤其是有效活性成分[7,8]。可以结合运用“药对”的相关知识，探讨陈皮对广藿香中某些成分的提取效率是否有积极的影响，可对将来增强广藿香的有效药理活性或者降低广藿香的某些不良反应的相关研究提供切实可行的研究方法。

1 实验部分

1.1 材料及仪器

LT502型电子天平；KQ-500DB型数控超声波清洗器；HR-20 1000g大功率粉碎机；Ultimate 3000超快速液相色谱仪；SHB-III循环水式多用真空泵；98-I-B型电子调温电热套。

广藿香药材产于广东肇庆；陈皮购买于北京本草方源药业公司；香草酸和原儿茶酸对照品购买于上海源叶生物科技有限公司；甲醇（色谱纯）购买于天津星马克科技发展有限公司；乙腈（色谱纯）购买于成都市科隆化学品有限公司、磷酸（色谱纯）购买于天津科密欧化学试剂有限公司；纯净水为娃哈哈集团生产。

1.2 供试品溶液的制备

称取粉碎后的广藿香药材粉末2.5g两份，分别加入到250mL圆底烧瓶中。每个圆底烧瓶中都加50mL蒸馏水，搭好回流装置，开始加热。使用500mL抽滤瓶和真空泵进行减压抽滤，保留滤渣，用药匙将其小心的舀回圆底烧瓶中。重复上述步骤3次，合并滤液于蒸发皿中，100℃水浴蒸干，用色谱纯甲醇溶解残渣，定容至10mL容量瓶中，并用。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取香草酸标准品0.0039g、原儿茶酸标准品0.0036g，分别置于10mL容量瓶中，用色谱纯甲醇溶解，定容至刻度，作为标准品储备液。

1.4 色谱条件

表1 HPLC色谱条件Tab.1 HPLC chromatographic conditions

1.5 线性关系的考察

1.5.1 线性及相关系数 精密吸取混合标准品溶液0.5、3、5、7、9、11、13μL 共 7 份，进高效液相色谱仪，分别记录原儿茶酸所出峰和香草酸所出峰的峰面积，绘制标准曲线。

1.5.2 重复性考察 取同一批广藿香单味药材粉末、广藿香-陈皮混合药材粉末，按照“1.4”项下的实验步骤平行进行6次提取，取适量供试品溶液，按照“1.4”项下的色谱条件进行测定，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行处理，得到色谱图。分别记录原儿茶酸、香草酸所对应的色谱峰峰面积并计算求得RSD值。

1.5.3 精密度实验 取混合标准品溶液适量，置于进样瓶中，按照“1.4”项下的色谱条件连续进样6次，记录原儿茶酸所出峰、香草酸所出峰的峰面积，并计算其RSD值。

1.5.4 含量测定 供试品溶液过0.45μm微孔滤膜，进行测定，记录峰面积，从而测得广藿香中两种水溶性成分（香草酸，原儿茶酸）的含量。

2 结果与讨论

2.1 混合标准品共有峰的确定

如图1所示，将混合标准品溶液所出色谱图分别与香草酸标准品溶液和原儿茶酸标准品溶液所出色谱峰进行比较，确定混合标准品溶液色谱图中第一个色谱峰为原儿茶酸的吸收峰，保留时间为2.072min；第二个色谱峰为香草酸的吸收峰，保留时间为2.742min。

图1 混合标准品溶液、香草酸标准品溶液和原儿茶酸标准品溶液的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of mixed standard solution,vanilla acid standard solution and raw acid standard solution

2.2 标准曲线的制备

如图2、3所示，原儿茶酸的标准曲线回归方程为y=7.895x+4.5154，R2=0.9998；香草酸的标准曲线回归方程为y=7.6977x+1.7205，R2=0.9997。

图2 原儿茶酸的标准曲线图Fig.2 Standard chart of primary catechins

图3 香草酸的标准曲线图Fig.3 Standard chart of vanilla acid

2.3 精密度实验

表2 原儿茶酸、香草酸的峰面积及RSD值Tab.2 Peak area and RSD value of original catechin

由表2可知，原儿茶酸和香草酸对应色谱峰的峰面积平均值分别为79.1426、76.2365，RSD值分别为1.35%、0.25%。二者的RSD值均在0%～2%之间，该结果显示HPLC色谱系统具有良好的精密度，可以用于该实验的测定。

由表2可知，原儿茶酸和香草酸对应色谱峰峰面积的RSD值均小于3%，说明该测定方法的重复性较好。

2.4 含量测定

按上述方法进行广藿香加热回流后的供试品测定，得色谱图见图4和峰面积见表3。

图4 混合标准品溶液和广藿香单味药材提取药液得到的HPLC色谱图Fig.4 HPLC chromatogram obtained from the mixture of standard solution and patchouli herb extract

表3 广藿香单味药材提取液的含量测定Tab.3 Determination of extraction liquid of herbal medicine from patchouli

实验测得，原儿茶酸和香草酸的含量分别为0.001572mg·g-1，0.0004846mg·g-1。

加入配比量为1∶1的陈皮药材粉末后得到的色谱图见图5和峰面积数据见表4。

图5 混合标准品溶液和广藿香-陈皮混合药材提取液得到的HPLC色谱图Fig.5 HPLC chromatogram obtained from mixture of standard solution and patchouli and parsley mixture

配伍后对广藿香药材水溶性成分中的原儿茶酸、香草酸的提取含量有积极的影响见表4。

表4 广藿香-陈皮混合药材提取液的含量测定Tab.4 Determination of extraction liquid of patchouli-chen pi mixture

原儿茶酸、香草酸的含量平均值分别为0.003355mg·g-1、0.003216mg·g-1。其中原儿茶酸含量提升了2.13倍，香草酸的含量提升了6.64倍。

3 结论

与广藿香单味药材提取含量测定结果进行比较，广藿香-陈皮混合药材提取液中原儿茶酸及香草酸的含量均有所增长。其中原儿茶酸的含量变化较香草酸含量变化明显，其中原儿茶酸含量为广藿香单味药材提取所得的2.13倍，香草酸的含量为广藿香单味药材提取所得的6.64倍。加热回流提取广藿香中水溶性成分时，加入药材配比量为1∶1的陈皮药材，对广藿香水溶性成分的溶出有促进作用，其中对原儿茶酸的影响作用较小，对香草酸的影响作用较为显著。