德系乳肉兼用型西门塔尔牛胚胎移植效果研究

伍丽仙， 陈永玻， 王成高， 张立喜， 赵 敏，龙 俊， 佟万祥， 和占星

(1.云南文山州畜牧站，云南 文山 663099；2.云南文山州动物疫病预防控制中心，云南 文山 663099；3.云南马关县畜牧技术推广工作站，云南 马关 663700；4.云南省草地动物科学研究院，昆明 650212)

德系西门塔尔牛(弗莱维赫牛)是由瑞士西门塔尔牛和德系红荷斯坦牛杂交，并引入部分其他品种血液选育而成[1]，是世界著名的乳肉兼用牛品种之一[2]。弗莱维赫牛遗传稳定，具有产奶和产肉性能高，适应性强等优良特性[3-4]，与其他品种牛杂交后，更能体现出其优越性，对改良中国黄牛具有积极的意义[5]。我国自2008年启动“德系西门塔尔乳肉兼用牛区域试验示范推广项目”，通过引进德国优良的乳肉兼用德系西门塔尔牛冷冻精液与中国西门塔尔牛及其杂交牛、黄牛等进行杂交，大大提高了中国西门塔尔牛及其杂交牛等群体的日增重、产肉性能和产奶性能，杂交改良效果好，综合养殖效益明显，适合在我国推广应用[2,6-7]。我国已从德国引进弗莱维赫牛胚胎，通过胚胎移植获得纯种后代，并对纯种牛进行培育、生产胚胎和冻精，经快速扩繁，增加种群数量，或用冻精改良我国奶牛和肉牛的方式，逐步在全国范围内推广应用该品种[3,6,8-12]。文山牛(Wenshan cattle)又名文山高峰牛，属役肉兼用型黄牛遗传资源，其具有体躯结实，繁殖力强，耐粗饲、适应性强，肌肉发达、皮薄骨细、肉质好等优点。主产区为云南省文山壮族苗族自治州广南、富宁、邱北、砚山等县海拔900 m以上的地区[13]，以广南县、富宁县结合部的百乐、格当、花榜、下枝梅等地所产的为典型品种代表[14]。文山牛1987年录入《云南省家畜家禽品种》，2011年被列入《中国畜禽遗传资源志·牛志》，2014年获农业部农产品地理标志登记证书。文山州作为云南省打造世界一流“绿色食品牌”肉牛产业的重点地区，牛存栏和出栏数一直位居云南省16州市前列，2019年文山牛存栏76.11万头，其中能繁母牛存栏23.79万头。文山州是云南省率先开展肉牛杂交改良的地区之一，杂交改良牛存栏数较多。家畜胚胎生物技术是优良家畜快速扩繁、新品种培育及遗传资源生物多样性保护的有效技术之一。近30多年来，牛胚胎生物技术的研究应用取得了重大进展，2011 年全世界生产牛体内胚胎73.3万枚，移植受体牛 57.2万头次[15]。自20世纪70年代以来，我国家畜胚胎移植研究与应用取得重要进展，云南省牛胚胎移植的研究始于20世纪80年代末，奶牛、肉牛胚胎移植先后获得成功，并得到应用[16-19]。近几年来河北、山东等开展了弗莱维赫牛胚胎移植工作，并获得成功[8-12]。为全面推动马关县的肉牛产业发展，提高肉牛品质，缩短品种改良年限，文山州马关县引进德系乳肉兼用型西门塔尔牛胚胎，以文山牛及杂交母牛为受体进行胚胎移植“借腹怀胎”，开展了肉牛胚胎移植技术的应用及效果研究，现总结如下，谨供参考。

1 材料与方法

1.1 胚胎来源

德国乳肉兼用型西门塔尔牛冻胚由新疆动物胚胎工程技术研究中心提供。

1.2 药品试剂

喜达(CIDR)孕酮阴道缓释剂(1.38 g孕酮/支，宁波三生药业有限公司)；氯前列醇注射液(宁波三生药业有限公司)；盐酸利多卡因(山东华鲁制药有限公司)；新洁尔灭(昆明兴中制药厂)；维生素ADE注射液(中国农业科学院畜牧研究所)。

1.3 器 材

专用埋栓枪、解冻杯、胚胎移植枪等。

1.4 受体牛的选择

在文山州马关县大讯肉牛养殖专业合作社、马关县都龙康达肉牛养殖农民专业合作社等共12个肉牛养殖合作社或养牛场饲养的牛群中选择年龄2～10岁、体重300 kg以上的西本杂(西门塔尔♂×文山黄牛♀)、短本杂(短角牛♂×文山黄牛♀)和本地黄牛母牛600头，从中选择空怀、产犊3个月以上，生殖器官发育良好、发情周期正常、无生殖系统疾病的270头健康母牛作为受体供同期发情处理。

1.5 受体牛的同期发情处理

采用CIDR+PG法进行受体同期发情处理，具体处理程序为：第1天在母牛阴道内插入(埋植)CIDR孕酮阴道栓1个/头(在性周期的任一天，除发情当天外)，同时肌注维生素ADE 5 mL/头；第8天注射氯前列醇0.6 mg/头，同时肌注维生素ADE 5 mL/头；第11天撤出CIDR；第19～21天进行胚胎移植。

1.6 胚胎移植

对同期发情处理第19～21 d(发情第7天)的受体牛进行直肠检查，触摸卵巢上的黄体,对黄体质量较好(A、B级)的采用非手术法进行胚胎移植。

1.7 妊娠检查

受体牛胚胎移植后60～90 d，经直肠检查进行妊娠诊断。对妊娠的受体牛加强饲养管理。

1.8 试验时间

2016—2017年分3批进行移植。

1.9 统计分析

移植妊娠率比较采用卡方(x2)；不同性别犊牛的初生重和体尺比较采用t检验；不同季节出生犊牛的初生重和体尺比较采用单因子方差分析。数值以平均值±标准差表示，并以p<0.05和p<0.01表示分别达到显著和极显著差异。

2 结果与分析

2.1 受体牛同期发情效果

同期发情处理受体牛270头，其中达到移植标准的81头，占同期发情处理牛的30.00%，即受体牛经同期发情处理后的可移植率为30%。

2.2 受体牛胚胎移植效果

胚胎移植87头受体(含选择自然发情6头)，妊娠28头，平均妊娠率32.18%。

2.2.1 不同品种受体的移植妊娠率比较 表1所示，西本杂受体的移植妊娠率达40.74%，明显比短本杂受体和文山黄牛受体的分别高18.01百分点和31.65百分点(p<0.01)，短本杂受体的移植妊娠率亦明显比文山黄牛受体的高13.64百分点(p<0.01)。

表1 不同品种受体的胚胎移植妊娠率

2.2.2 季节对受体胚胎移植妊娠率的影响 表2所示，受体同期发情处理后可移植率以春季最高(52.86%)，极显著高于冬、秋季节的(p<0.01)；秋季移植受体的妊娠率比春季和冬季的分别极显著高27.52百分点和36.37百分点(p<0.01)，春季比冬季极显著高8.86百分点(p<0.01)。表明春季同期发情处理效果好，而移植妊娠率以秋季高于冬、春季。

2.2.3 自然发情和同期发情受体的移植妊娠率比较 表3所示，自然发情受体的胚胎移植妊娠率极显著比同期发情受体的高1.23个百分点(p<0.01)。表明受体牛的移植效果以自然发情受体更好，但可能与样本数少有关。

表2 季节对受体同期发情处理效果及胚胎移植妊娠率的影响

表3 自然发情和同期发情受体胚胎移植妊娠率比较

2.2.4 受体牛移植单胚和双胚的妊娠率比较 表4所示，移植双胚受体牛(n=2)的妊娠率100%，极显著高于移植单胚受体(n=85)的妊娠率30.59%(p<0.01)，但此次试验中双胚移植的样本数少，有待进一步研究。

表4 单胚和双胚移植受体的妊娠率比较

2.3 产犊率

在28头妊娠受体中流产11头，流产率39.29%，17头受体产犊(其中2头母牛产双犊)，产犊率60.71%，按移植产犊率为21.84%，共产犊19头，产犊成活16头(公犊6头，母犊10头)，产犊成活率84.21%。

2.4 犊牛的初生体重和体尺

2.4.1 不同性别犊牛的初生重和体尺的比较 表5所示，公、母犊(n=16)的平均初生重、体高、体斜长、胸围和管围分别为33.00 kg，69.50 cm，62.19 cm，72.69 cm和13.50 cm，公犊的体高、胸围和管围大于母犊的，体重和体斜长小于母犊的，但公、母犊的体重和体尺分别比较差异不显著(p>0.05)。

表5 胚胎移植所产犊牛的初生体重和体尺比较

2.4.2 不同季节出生犊牛的初生体重和体尺比较

表6所示，产犊季节对犊牛初生体重和体尺有一定的影响。夏季出生犊牛的初生重最小，分别比春、秋和冬季出生的分别轻6.2 kg，3.7 kg和5.4 kg，但差异不显著(p>0.05)；夏季出生犊牛的体斜长显著比冬季出生的分别短13.60 cm(p<0.01)，比春季和秋季出生的分别短3.30 cm和10.10 cm(p>0.05)；各季节出生犊牛的体高、胸围和管围分别比较，差异不显著(p>0.05)。表明产犊季节对犊牛的体斜长影响较大。

表6 不同季节出生胚胎移植所产犊牛的初生体重和体尺比较

3 讨 论

影响牛胚胎移植妊娠率的因素很多，包括胚胎质量等级与胚龄、冷冻与否、移植胚胎的数量及受体牛的饲养方式、营养状况与移植时的黄体质量、移植季节、移植人员的技术熟练程度等。

胚胎移植过程中气候和季节是必须考虑客观因素[20]。胡高博[10]研究表明，在春季、秋季节移植德系西门塔尔牛胚胎的妊娠率分别为60.00%和51.22%，高于夏季和冬季节的45.56%和44.74%，但差异不显著；文志平等[21〗研究表明，春、夏、秋、冬的妊娠率分别是61.11%，72.41%，80.00%和25%，在寒冬不宜进行同期发情、胚胎移植和产犊；陈永昌等[18]研究表明在云南省内偏冷凉地区，夏、秋季是开展胚胎移植的最佳季节。本研究秋季移植的妊娠率(54.55%)极显著高于春季和冬季，春季显著高于冬季的，与前人的报道基本一致。同时，产犊季节对犊牛的初生体重、体尺有一定影响，体重和体斜长以夏季最小，提示在考虑移植季节的同时还应考虑到产犊季节。

黄牛、西黄杂和黑黄杂受体移植荷斯坦牛胚胎的妊娠率分别为49.09%，46.67%和42.86%，差异不显著[22]。本研究杂种受体的移植妊娠率极显著高于黄牛受体的，其中以西本杂最高(40.74%)，其次是短本杂受体(22.73%)，黄牛最低至9.09%。这可能与杂种牛的体格较大，膘情好等有关。建议今后开展牛胚胎移植中多选用杂种母牛作为受体，以便获得更高的妊娠率和产犊率。

移植双胚是提高胚胎移植妊娠率的措施之一。和占星等[23]在母牛自然交配后第7天在有黄体一侧子宫角移植1枚奶牛IVF冻胚和母牛发情的第7天在有黄体一侧子宫角同时移植2枚奶牛IVF冻胚，两者妊娠率均为50%，前者双胎率50%；桑润滋等[24]通过移植双胚胎，获得的妊娠率和双胎率分别达61.3%和52.6%；卢克焕等[25]采用体内胚胎单侧移植后获得的妊娠率和双胎率分别为 65%和50%。本研究对2头受体移植双胚获得的妊娠率和双胎均为100%，但由于试验样本数过少，有待今后通过加大样本数移植进一步探讨。

文志平等[21]研究表明，春、夏、秋、冬季节胚胎移植后受体的流产率分别是31.82%，23.81%，30.55%和100%。本次胚胎移植受体的妊娠率偏低，流产率较高，其主要原因与受体牛饲养管理不到位，诸如饲喂酒糟、频繁更换饲料、饲料营养差等诸多因素的影响有关。其次是与初期移植时操作熟练程度不够也有一定的关系。

德系西门塔尔牛具有产奶和产肉性能好、适应性强、杂种优势明显等特点[2-4,26-27]，利用其胚胎移植获得纯种牛作为种牛，通过人工输精或本交扩繁，并选择优秀种公牛改良本地黄牛或杂交牛，着力提高杂交后代的生产性能，有利于由单一的肉用或乳用向兼顾乳、肉业同步发展，调动农户养殖母牛的积极性，降低养殖风险，增加经济收入和稳定牛源，促进养牛业的可持续健康发展。

4 结 论

首次在文山州开展牛胚胎移植并获得成功。杂交牛受体的移植妊娠率极显著高于文山牛受体的，秋季移植的妊娠率极显著高于春季和冬季的。提示以杂交牛为受体在秋季进行胚胎移植可有效提高移植成功率，并且在今后胚胎移植中需加大受体牛的选择力度和重视受体的同期发情处理细节，加强受体牛的全程饲养管理，尽量降低流产率，着力提高移植成功率。本次胚胎移植技术的应用为文山牛的快速扩繁和保种提供了技术支持和积累了宝贵经验。