维生素C对单试剂氧化酶法检测总胆固醇和三酰甘油的干扰分析*

李得娟，唐云芳，罗静萍，巩琳莉，李 红，张 瑶，梁珊珊，贺 勇△

(1.四川大学华西医院实验医学科，四川成都 610041；2.青海省心脑血管病专科医院检验科, 青海西宁 810000；3.云南省云县人民医院检验科，云南临沧 675800；4.四川省成都市 武侯区第三人民医院检验科，四川成都 610041；5.四川省成都市民用航空医学中心检验科， 四川成都 610041；6.四川省广元市旺苍中医院检验科，四川广元 628200； 7.四川省仁寿县中医医院检验科，四川眉山 620500)

随着人们生活水平的提高，动脉粥样硬化的患病率逐年上升，高脂血症作为动脉粥样硬化的危险因素日益受到重视[1-3]，血清总胆固醇(CHOL)和三酰甘油(TG)是临床普遍应用的重要血脂常规检测指标，目前，国内实验室多采用单试剂氧化酶法检测，最后显色反应均为偶联终点比色法(Trinder反应)，该反应易受到维生素C(VC)、胆红素等还原性物质的负干扰作用，造成检测值降低[4-9]。而临床对VC的应用越来越广泛[10-13]，大量地补充VC可使其在患者体内大量蓄积，对临床部分检验项目如CHOL、TG、葡萄糖(GLU)、尿酸(UA)等检测结果产生影响，现在还没有文献报道关于VC对CHOL和TG检测的干扰及多大干扰会使临床检测不可接受。本实验针对不同浓度的VC干扰浓度对CHOL、TG检测的干扰进行了系列干扰试验，分析了干扰值及干扰率与CHOL、TG浓度和VC干扰浓度的关系,临床及实验室分析提供相关数据。

1 材料与方法

1.1材料 收集四川大学华西医院2018年10月住院患者新鲜血清40例，覆盖CHOL、TG线性范围(CHOL的线性范围：0.10～20.70 mmol/L；TG的线性范围:0.22～8.95 mmol/L)，将CHOL分成4个浓度梯度(0.10～<5.00、5.00～<10.00、10.00～<15.00、15.00～≤20.70 mmol/L)、TG分成4个浓度梯度(0.22～<2.00、2.00～<4.00、4.00～<6.00、6.00～≤8.95 mmol/L)进行收集。因无法获取高浓度CHOL标本，所以CHOL只覆盖到11.43 mmol/L。每个梯度收集10个标本，然后制备成10个不同浓度的混合血清；VC标准液(10 mmol/L)：取VC(相对分子质量为176.13)分析纯品0.176 1 g，加纯水稀释至100 mL。所用仪器和试剂为罗氏c702全自动生化分析仪和配套的CHOL、TG试剂和校准品，检测方法为单试剂氧化酶法(GPO)，单试剂未含抗坏血酸盐。

1.2样品制备 如表1所示，配置系列干扰样品管，基础管中不加VC，7个干扰管中各加入不同浓度的VC。

表1 干扰试验样品制备

1.3CHIOL、TG样本检测方法 CHOL、TG室内质控检测在控后检测基础管及干扰管浓度。干扰物加入浓度、干扰值及干扰率按照干扰实验中公式计算：

干扰值(mmol/L)=干扰管测定值-基础管测定值；

1.4统计学处理 采用SPSS18.0进行实验数据处理和分析，计算干扰值与干扰率，根据国家卫生行业标准(WS/T403-2012)《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》总允许误差(TEa)作为标准判断相对偏差是否具有临床意义，若相对偏差>1/2TEa则有临床意义，若相对偏差≤1/2TEa则无临床意义。

2 结 果

2.1VC对CHOL及TG的干扰 VC可降低CHOL、TG的测定值，干扰为负干扰；干扰值与VC干扰浓度呈正相关关系，随着干扰浓度的增加，干扰值越大；虽然同一VC干扰浓度对CHOL、TG测定的干扰值基本相同，但干扰率与CHOL、TG浓度相关，同一VC干扰浓度下，随着CHOL、TG浓度增加，干扰率越小。根据国家卫生行业标准，CHOL检测分析的TEa为9.0%，TG的TEa为14.0%，以1/2TEa(CHOL为4.5%，TG为7.0%)为判断是否具有临床意义的标准。见表2、3。

表2 TG干扰试验结果

注：*表示检测受干扰具有临床意义；-表示无数据。

表3 CHOL干扰试验结果

注：*表示检测受干扰具有临床意义；-表示无数据。

2.2VC干扰浓度与干扰值的相关关系 CHOL、TG检测干扰值与VC干扰浓度呈正相关关系，随着干扰浓度的增加，干扰值越大。相关关系方程式为TG：Y=-1.002 1X(r2=0.995 6);CHOL：Y=-0.997X-0.021 3(r2=0.997 6)，从相关方程式可以看出，VC干扰浓度将产生约等摩尔浓度的负干扰值。

2.3CHOL、TG受VC负干扰具有临床意义的最低浓度 根据原数据算出的干扰值和干扰率反推出CHOL、TG受VC负干扰具有临床意义的最低浓度见表4。当TG浓度为1.00 mmol/L时，0.07 mmol/L的VC干扰浓度对TG产生的干扰就具有临床意义；当TG浓度为5.00 mmol/L时，0.35 mmol/L的VC干扰浓度对TG产生的干扰大于1/2TEa,具有临床意义；随着TG浓度的增加，产生临床意义的VC干扰浓度也增加;当TC浓度为1.00 mmol/L时，0.05 mmol/L的VC干扰浓度对TC产生的干扰就具有临床意义；当TC浓度为7.00 mmol/L时，0.32 mmol/L的VC干扰浓度对TC产生的干扰大于1/2TEa,具有临床意义；随着TC浓度的增加，产生临床意义的VC干扰浓度也增加。

表4 CHOL、TG受VC负干扰具有临床意义的最低浓度

续表4 CHOL、TG受VC负干扰具有临床意义的最低浓度

注：干扰值=样本浓度×1/2TEa。

3 讨 论

目前，国内实验室检测CHOL、TG、血糖(GLU)、尿酸(UA)等项目最后显色反应均为Trinder反应，VC能还原Trinder反应过程中产生的H2O2，使反应过程中生成的红色醌亚胺化合物减少而使检测结果呈负干扰，给实际检测结果带来一定的分析误差[14-17]。GLU和UA多采用双试剂，加入的抗坏血酸盐可以避免VC带来的干扰，但CHOL、TG检测多采用单试剂，无法避免VC的负干扰。

VC作为一种还原剂在临床大量使用时，在体内通常以脱氧型和还原型两种形式存在，可以经尿液从体内排出，因此在一般情况下，患者在空腹采血时不会存在干扰。但是对于住院患者来说，在使用大剂量VC治疗，或采血非空腹的情况下，CHOL、TG等检测项目很容易受到干扰；另外肾功能不良患者也会易存在干扰的情况[14]。

VC对单试剂氧化酶法检测CHOL、TG会产生负干扰,这与其他研究结果相近[3-5]，结合研究报道[18-20]，本研究首次采用国家卫生行业标准(WS/T403-2012)《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》TEa作为标准判断相对偏差是否具有临床意义。经过相关性分析，发现VC干扰浓度将产生约等摩尔浓度的负干扰值，通过1/2TEa，计算出了CHOL、TG不同浓度下，干扰具有临床意义的VC干扰浓度，给实验室及临床提供了数据依据。

4 结 论

因此，当实验室采用单试剂氧化酶法检测CHOL、TG时，应了解患者的用药情况，对检测结果造成的负干扰作出合理解释，协助临床医生的诊疗。另外，还应积极改进检验方法，消除干扰，减少误差，提高了实验结果的准确性。