中药猫爪草捣碎前后煎煮溶出度和多糖含量比较研究

郑文川，罗明超，黄华文，邓广海

(广州中医药大学第二附属医院 药学部，广东 广州 510120)

猫爪草为毛茛科植物小毛茛RanunculusternatusThunb.的干燥块根[1]，始载于《中药材手册》，1977年后历版《中国药典》均有收载。猫爪草性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有消肿散结、清热解毒的功效[1]，临床上用于淋巴结核、淋巴结炎、肺结核、咽炎、淋巴瘤、甲状腺瘤、乳腺肿瘤、肺癌等疾病的治疗[2]。现代研究表明，猫爪草主要含有多糖、有机酸、甾醇及脂、挥发油、氨基酸、黄酮及其苷、生物碱及多种微量元素[3]，其中多糖为其主要的活性成分之一，具有抗肿瘤[4]、保肝[5-7]、抗氧化[8]、调节免疫[8-11]的作用。我们在临床实践中发现，市场上猫爪草多以栽培为主，栽培品个头较大，簇生块根的直径多在4～9 mm之间，质地结实显粉性，浸泡和煎煮过程中常存在浸泡不透，中间“干心”的现象，影响临床疗效。目前，关于猫爪草煎煮方法的相关文献未见报道。为了探索猫爪草经捣碎处理后能否一定程度上缩短煎煮时间，提高煎煮溶出度，本研究将以水溶性浸出物的含量和多糖含量为评价指标，考察猫爪草捣碎前后煎煮液中指标的变化，通过综合分析，得出猫爪草最佳饮片形态和煎煮参数，从而达到提高临床疗效的目的。现将实验过程报道如下。

1 仪器与材料

UV-2401型分光光度计(日本岛津)；SK1200H型超声波提取器(上海科导有限公司)；240型电子分析天平(德国赛多利斯集团)；全自动紫砂锅煮药机(彩塘友泰五金器械厂)；RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。猫爪草饮片(批号：181109071)由康美药业股份有效公司提供，经广州中医药大学中药鉴定教研室鉴定为毛茛科植物小毛茛RanunculusternatusThunb.的干燥块根；葡萄糖(≥98%)、无水乙醇、苯酚、浓硫酸等试剂均为分析纯，购于广州化学试剂厂；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 饮片捣碎处理

取适量猫爪草饮片，放入饮片专用铜盅中，将其捣碎成粒度约为2～5 mm的粗颗粒，取出，即得。

2.2 猫爪草捣碎前后浸泡情况比较

分别取猫爪草饮片(整粒)和猫爪草饮片(捣碎)约60 g，加入500 mL清水，使清水完全淹没饮片，每隔10 min取出适量饮片，切开，观察水浸泡情况。结果表明，猫爪草饮片(整粒)浸泡30 min后，切开大部分直径6～9 mm的饮片，中间仍存有“干心”的现象，浸泡60 min后“干心”现象明显减少；而猫爪草饮片(捣碎)浸泡20 min后，基本未发现“干心”现象。如表1所示。

2.3 猫爪草捣碎前后煎煮溶出度比较

分别取猫爪草饮片(整粒)和猫爪草饮片(捣碎)约30 g，加入450 mL清水浸泡30 min，放入全自动紫砂锅煲药机中，武火加热至沸腾，文火煎煮1 h。煎煮液经纱布滤过，放冷，滤液加水定容或低温浓缩至300 mL，即为猫爪草煎煮定容液，摇匀，精密量取此溶液15 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃干燥3 h，然后置干燥器中冷却30 min，称定重量，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。结果，猫爪草饮片(整粒)和猫爪草饮片(捣碎)的水溶性浸出物的含量分别为13.42%和17.05%(n=3)。结果见表2。

表1 两种猫爪草饮片浸泡过程观察结果

表2 猫爪草捣碎前后煎煮溶出度测定结果

2.4 猫爪草捣碎前后煎煮液多糖含量比较

2.4.1 供试品溶液的制备 精密吸取“2.3”项下猫爪草煎煮定容液1 mL，置10 mL试管中，滴加无水乙醇4 mL(速度约2滴/s)，边滴边置于快速旋涡振荡器上振荡，密封，冷藏放置24 h，取出，以2 500 r/min离心15 min，弃去上清液，沉淀部分加入80%乙醇2 mL，充分混合，以2 500 r/min离心15 min，弃去上清液，沉淀部分加入无水乙醇2 mL，充分混合，离心，弃去上清液，反复处理3次，沉淀部分再用热蒸馏水溶解，放冷，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，振摇混匀，滤过，即得供试品溶液。

2.4.2 对照品制备及线性关系考察 精密称取无水葡萄糖对照品100.80 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得葡萄糖对照品溶液。分别精密吸取葡萄糖对照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密吸取上述浓度对照品溶液2 mL，加入5%的苯酚溶液1.0 mL和浓硫酸5.0 mL，超声处理5 min，于40 ℃恒温箱放置20 min，冷却至室温，同时以2 mL蒸馏水按上述条件处理作为空白溶液，于490 nm波长处测定吸光度(图1)。结果，葡萄糖线性回归方程为：Y=9.973X+0.005 18，线性范围为：0.010 08～0.100 8 mg/mL，r=0.999 8(n=6)。

2.4.3 稳定性试验 吸取“2.3”项下猫爪草煎煮定容液1 mL，按照“2.4.2”项下线性关系考察方法进行操作，自“分别精密吸取葡萄糖对照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀”起进行操作，分别在0、2、4、6、8 h测定多糖的吸收度值，结果不同时间多糖的吸收度值RSD(%)=2.19%(n=5)。表明吸收度值在24 h内稳定。

2.4.4 重复性考察 吸取“2.3”项下猫爪草煎煮定容液1 mL，5份，按照“2.4.2”项下线性关系考察方法进行操作，自“分别精密吸取葡萄糖对照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀”起进行操作，测定样品中多糖的吸收度值，结果5份样品吸收度值RSD(%)=1.36%(n=5)，表明所用方法的重复性较好。

2.4.5 加样回收率考察 精密吸取“2.3”项下猫爪草(整粒)煎煮定容液0.5 mL，加入适量葡萄糖标准液0.5 mL，按照“2.4.2”项下线性关系考察方法进行操作，自“分别精密吸取葡萄糖对照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀”起进行操作，测定其吸光度，计算猫爪草(整粒)多糖平均回收率及RSD，结果猫爪草(整粒)多糖平均回收率为97.66%，RSD=2.71%(n=5)，表明所用方法准确性较高。

2.4.6 多糖的含量测定 精密吸取“2.3”项下猫爪草(整粒)和猫爪草(捣碎)煎煮溶液1.0 mL，按照“2.4.2”项下线性关系考察方法进行操作，自“分别精密吸取葡萄糖对照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀”起进行操作，测定两者的吸光度，计算其多糖含量。结果猫爪草饮片(整粒)和猫爪草饮片(捣碎)中煎煮液的多糖含量分别为5.44%和6.67%(n=3)。结果见表3。

表3 猫爪草捣碎前后煎煮多糖含量测定结果

3 讨论

2009年卫生部和国家中医药管理局联合颁发《医疗机构中药煎药室管理规范》，对中药饮片的煎煮步骤及操作进行了明确规定[12]。然而我们在临床实践中，发现不同饮片形态对饮片煎煮质量影响较大，如法半夏、夏天无、猫爪草等饮片，2015年版《中国药典》规定其整粒入药，然而这类药材直径较大、富含淀粉、质地致密，导致浸泡和煎煮过程中水分难以渗透到药材内部，有效成分也很难渗透到煎煮液中，甚至煎煮后药渣还存在“内有干心”的现象，严重影响了饮片的煎煮质量，从而影响了临床疗效。本研究对猫爪草两种饮片形式(整粒和捣碎)浸泡和煎煮进行考察，结果发现，猫爪草经过捣碎处理后有利于水分渗透，促进了成分溶出，因此可得出“临用时捣碎”是猫爪草一种较为理想的饮片形式，建议新版《中国药典》对猫爪草项下“用法用量”进行修订，目的是提高猫爪草煎煮质量，节省药材资源。