炮制对生川乌生物碱的影响

曹瑞果

（河南省滑县中医院，河南 滑县 456400）

川乌是毛茛科植物乌头的干燥母根，味苦、辛、热，有大毒，具有温经止痛、祛风除湿的功效，因多生于四川，故称川乌。由于川乌有大毒，因此必须炮制后方可使用，从古至今有关川乌的炮制方法极多，但受炮制目的、辅料应用等多种因素的限制，方法不可同一而论［1-2］。史料记载川乌的炮制方法主要包括净制、切制、炮炙（浸泡、干热法制、湿热法制）等。物质基础是川乌药效和大毒的根本，并且直接影响川乌的治疗。研究发现川乌最主要的化学成分是生物碱，此外还包括多糖、挥发油和黄酮之类。其中川乌中所含生物碱主要是乌头碱类，乌头碱根据其结构又可分为单酯型生物碱、双酯型生物碱以及氨基醇型生物碱。其中双酯型生物碱是川乌的主要毒性成分，在加水加热的情况下能够发生水解，转化成单酯型生物碱［3-4］。因此《中华人民共和国药典》中对川乌炮制的双酯型生物碱的含量为限量要求，以保证川乌用药的安全。近年来关于川乌炮制不良导致中毒事件时有发生，因此川乌炮制对临床应用具有重要作用。本研究以生物碱为研究指标，观察不同方法、不同时间炮制对于单酯型生物碱和双酯型生物碱的影响。

1 材料与方法

仪器与试剂：实验主要仪器包括AGILENT高效液相色谱仪（Agilent 1260，北京京科瑞达科技有限公司）、超声波清洗器（KQ-250DE，昆山市超声仪器有限公司）、旋转蒸发仪（YRE，上海铌欧仪器有限公司）、循环多用真空泵（SHZ-DIII，上海羌强实业发展有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（DGG-9070G，上海森信实验仪器有限公司）。主要试剂包括乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱以及苯甲酰新乌头原碱对照品。

蒸制川乌片：取生川乌片浸泡水中5小时达到内无干心，取出后加水分别蒸制1、2、3、4、5、6、7、8h，蒸后取出晾凉。使用电热恒温鼓风干燥箱60℃鼓风干燥，得到不同时间蒸制川乌片，要求均达到内无白心方可合格。样品平行操作3次，分别粉碎过三号筛。

煮制川乌：取生川乌片浸泡水中5h确保内无干心，取出宽水分别煮制1、2、3、4、5、6h，取出凉凉。使用电热恒温鼓风干燥箱60℃鼓风干燥，得到不同时间下煮制川乌片，内无白心为合格。样品平行操作3次，分别粉碎过三号筛。

制备对照品溶液：取适量对照品按加入1∶1比例的异丙醇-三氯甲烷混合液，配制成对照品溶液，每毫升溶液含0.0244mg乌头碱、0.038mg次乌头碱、0.0236mg新乌头碱、0.022mg苯甲酰乌头原碱、0.097mg苯甲酰次乌头碱、0.1672mg苯甲酰新乌头原碱。

制备供试品溶液：取过2g三号筛的炮制品粉末于具塞锥形瓶中，加入3mL氨试液，加入1∶1比例的异丙醇-乙酸乙酯混合液，配成溶液。溶液于25℃、300W、40kHz下超声处理30分钟，冷却后用异丙醇-乙酸乙酯混合液补齐减少的重量。溶液过滤后取25mL滤液于40℃下进行减压回收溶剂，残渣继续加入3mL1∶1比例的异丙醇-三氯甲烷混合液，滤过后取得供试品溶液。

评价指标：比较相同时间内不同炮制方法下单酯型生物碱和双酯型生物碱含量，比较相同时间内不同炮制方法下乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱以及苯甲酰新乌头原碱含量。

统计学方法：用SPSS19.0软件进行统计学分析，计量资料用t检验，计数资料用χ²检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 蒸法和煮法单酯型生物碱含量比较

单酯型生物碱用蒸法在第2～8h均达到《中华人民共和国药典》规定0.07%～0.15%的含量要求，且随着时间增加，单酯型生物碱含量先增长后下降，在第5h达到峰值0.1004%，较生川乌片升高约142%。煮法在第1～6h内均未达到药典要求含量。

表1 蒸法和煮法单酯型生物碱含量比较

2.2 蒸法和煮法双酯型生物碱含量比较

双酯型生物碱用蒸法和煮法均在1～8h和1～6h内达到药典规定不高于0.04%的含量要求，且蒸法和煮法下双酯型生物碱含量均随时间增减而下降。

表2 蒸法和煮法双酯型生物碱含量比较

3 讨 论

研究发现双酯型生物碱在加热加水的条件下，会脱去一个乙酰基，转化成单酯型生物碱，而在加热无水的情况下会发生热解反应先转化成焦乌头碱类生物碱，焦乌头碱类生物碱继续加热会水解为单酯型生物碱。因此无论是蒸制还是煮制，双酯型生物碱的含量均会随时间的增加而减小。研究结果也发现蒸法1～8h、煮法1～6h双酯型生物碱的含量均呈不断走低的趋势。但就单酯型生物碱而言，蒸法和煮法都表现为含量先上升后下降，原因为随着加热时间的加长，双酯型生物碱会先转化为单酯型生物碱导致单酯型生物碱含量上升，之后加热时间进一步加长时单酯型生物碱会发生过水解，形成无毒的氨基醇型生物碱，因此单酯型生物碱呈现先升高后下降的趋势［5-6］。而蒸法较煮法单酯型生物碱含量更高，符合《中华人民共和国药典》规定标准，推测原因为水煮会导致单酯型生物碱在煮制的过程中随水流失，导致含量减少。

就同一方法不同炮制时间而言，4～6h是较为合适的时间。能够发挥药理作用的单酯型生物碱在蒸法第5h达到最高峰值，较生川乌增长140%以上，而5h后单酯型生物碱含量开始下降，因此控制蒸制时间为5h左右［7-8］。研究发现4～6h各生物碱含量处于较优阶段，川乌毒性较低，因此控制炮制4～6h最为合适。

以《中华人民共和国药典》所要求的制川乌生物碱含量为标准，生川乌制备制川乌应采取蒸法炮制，蒸4～6h单酯型生物碱含量最高。