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SOX5和PrPc在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

2020-04-01王可楹郑军刘佳瑞赵娟徐江曾妍

实用口腔医学杂志 2020年4期
关键词:单克隆染色标本

王可楹 郑军 刘佳瑞 赵娟 徐江 曾妍

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC )是口腔最常见的恶性肿瘤,发病率占全身肿瘤的第九位,且近年来呈增高趋势[1-2]。尽管目前OSCC的治疗取得了进展,但在过去几十年中,整体5年生存率仍低于50%[3]。OSCC的发生、发展是多个因素导致的复杂过程,晚期的OSCC意味着病情加重,并且会出现癌细胞的扩散和转移,一旦出现转移必然会影响治疗效果和患者的生存期。性别决定区Y框蛋白5(sex determining region Y-box 5,SOX5)属于SOX(SRY-related high-mobility-group- box)家族中的重要一员,基因定位于12p 12.1, 最近许多研究发现 SOX5的异常表达参与多种肿瘤的发生、发展,包括垂体瘤、胶质母细胞瘤、淋巴瘤、肝癌等[4]。细胞型朊病毒蛋白(cellular prion protein,PrPc)广泛存在于真核生物中,是一种人体内分布较广的糖蛋白[5],现已有报道PrPc参与了包括胶质母细胞瘤、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等在内的多种肿瘤的发生、发展过程[6]。本课题组前期报道PrPc在OSCC中高表达并且与分化程度相关,参与了OSCC的发生、发展[7],同时也有文献报道SOX5在多种肿瘤中高表达,也参与了肿瘤的发生、发展[4],本课题组通过干扰PrPc后经基因芯片筛选发现SOX5低表达。但目前SOX5在OSCC中的表达情况及其与OSCC发生、发展的关系尚未见报道。本研究分析了OSCC中SOX5与PrPc的表达情况及二者的相关性,探讨二者在OSCC发生、发展过程中的作用及其在临床和病理诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料

标本均取自于2001~2017 年石河子大学医学院第一附属医院。包括94 例OSCC组织标本(发病部位:舌27 例、牙龈20 例、颊黏膜17 例、唇11 例、口底10 例、腭9 例)和30 例配对的癌旁组织标本,所有患者术前均未行任何抗肿瘤治疗。用石蜡包埋标本,由病理医师对标本进行观察并制作成组织芯片。

1.2 试剂

EDTA(pH 8.0)(北京中山金桥公司);兔抗SOX5单克隆抗体(Abcam公司, 英国);PrP WH2鼠抗人单克隆抗体(中国科学院武汉病毒研究所李朝阳实验室馈赠);酶标羊抗兔/鼠IgG(DAKO公司,美国)。

1.3 实验方法及结果判定

采用Envision方法检测SOX5和PrPc的表达水平。 60 ℃烘烤过夜,切片脱蜡至水,EDTA抗原修复,3%过氧化氢孵育10 min, 10%山羊血清封闭2 h, 在4 ℃下分别滴入兔抗SOX5单克隆抗体和PrP WH2鼠抗人单克隆抗体孵育过夜,PBS 振洗后滴加二抗,DAB显色,苏木精染色,脱水,透明,封片; 实验结果由病理科2 位经验丰富的医师随机双盲阅片并评分。标准如下:根据染色强度评分:无色(0 分)、浅棕着色(1 分)、棕黄色(2 分)、棕褐色(3 分)。根据着色细胞的百分比评价染色范围:0%~5%(0 分)、 6%~25%(1 分)、 26%~50%(2 分)、 51%~75%(3 分)、 76%~100%(4 分)。 染色强度和范围之积作为最终染色评分:0~1 分为阴性(-), 2~4 分为弱阳性(+), 5~8 分为阳性(++), 9~12 分强阳性(+++)。

1.4 统计学处理

采用SPSS 20.0软件进行分析,采用χ2检验对计数资料组间进行比较,采用Spearman等级相关分析方法,对94 例OSCC组织中SOX5和PrPc水平进行相关性分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 SOX5、PrPc的表达情况

SOX5的阳性表达表现在细胞核中(图1A),PrPc的阳性表达表现在细胞质中(图1C)。SOX5、PrPc在OSCC阳性表达率分别为69.15%(65/94)、68.09%(64/94),在癌旁组织中的阳性率分别为30.00%(9/30)、20.00%(6/30)(图1B、D),组间差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 SOX5、 PrPc在口腔鳞癌和癌旁组织中的表达情况

2.2 SOX5、PrPc在OSCC组织中的表达与临床病理因素之间的关联

SOX5表达水平与OSCC的淋巴结转移相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度无关(P>0.05)。PrPc表达水平与肿瘤分化程度、年龄大小相关(P<0.05),与患者性别、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移无关(P>0.05)(表2)。

A: SOX5在OSCC组织中表达(红色箭头); B: SOX5在癌旁组织中表达; C: PrPc在OSCC组织中表达(红色箭头); D: PrPc在癌旁组织中表达

表2 SOX5、PrPc表达与口腔鳞癌患者临床病理特征的关系

2.3 SOX5、PrPc在OSCC组织中表达的相关性

经Spearman等级相关分析,在94 例OSCC中,SOX5与PrPc的表达呈正相关(r=0.432,P<0.01)(表3)。

表3 SOX5和PrPc在口腔鳞癌组织中表达的相关性

3 讨 论

OSCC的发生、发展是多基因、多步骤突变的结果,目前OSCC的发生、发展机制及其早期诊断及预后靶向治疗成为研究的热点。

SOX5具有HMG(high-mobility group)结构域和 coiled-coil 结构域,因而它可以直接结合DNA或者与其他蛋白结合调节基因的表达[8]。已有研究证实SOX5参与多种肿瘤的发生、发展,但其功能并不一致,在乳腺癌中SOX5高表达并且促进乳腺癌细胞发生EMT,通过调控 Twist促进乳腺癌转移[9],在肺腺癌中SOX5高表达并且促进肺腺癌细胞的增殖和转移[10],SOX5在肝癌中高表达也调节Twist1的表达,调控EMT的发生[11]。SOX5在肿瘤领域已经广泛研究,然而有关SOX5在OSCC的表达情况尚未见报道。本研究结果显示,SOX5在OSCC中高表达,且显著高于癌旁正常组织,提示SOX5高表达可能对OSCC的发生、发展起重要作用。并且本研究发现在OSCC中SOX5的表达与淋巴结转移密切相关(P<0.05),提示SOX5在肿瘤的转移及恶性发展中可能发挥着重要作用。并且SOX5定位于OSCC组织和癌旁组织的细胞核中,提示其可能发挥转录因子的活性。目前SOX5在OSCC中的研究鲜有报道,鉴于其在OSCC中高表达并且与转移密切相关,因此SOX5在OSCC迁移侵袭中的作用及机制值得进一步探讨。

有研究报道显示细胞膜脂筏上的PrPc能与包括FLNa 在内的一些细胞外基质和黏附分子相互发挥作用,影响肿瘤的发生、发展[12]。已有报道PrPc参与了结直肠癌[13]、胃癌[14]、乳腺癌[15]等多种肿瘤的发生、发展。本研究结果显示,在OSCC组织中,PrPc的表达显著高于癌旁组织,并且PrPc的表达与肿瘤的分化程度相关(P<0.05),高分化OSCC组织中PrPc表达程度低,中低分化OSCC组织中PrPc表达程度较高,结果与张杰等[7]的报道基本一致,表明PrPc可能参与了口腔癌变的过程,通过检测PrPc的表达情况可能会对OSCC的早期诊断提供帮助。在本研究结果中PrPc的表达与年龄大小相关(P<0.05),但张杰等未报道在OSCC组织中PrPc的表达与年龄有关,结果的差异可能是标本的选择、抗体类型以及实验环境等因素不同导致的。本实验发现在OSCC组织切片中SOX5与PrPc均高表达且表达强度相似,提示二者可能对OSCC的发生、发展有协同促进作用,结合课题组之前的研究,认为二者在OSCC局部组织可能存在调控关系。

综上所述,检测SOX5与PrPc的表达水平有助于OSCC的早期诊断,未来有可能将对SOX5和PrPc的检测用于OSCC早期诊断及恶性程度的评估当中,但是二者在OSCC中的作用机制还有待于进一步研究。

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