HPV E6/E7 mRNA联合TCT在老年妇女宫颈疾病诊断中的临床应用价值

宫颈癌是常见恶性肿瘤，对女性健康造成严重威胁，该疾病的发生发展比较缓慢，早期检查发现癌前病变，可以有效预防宫颈癌的发生[1]。新柏氏液基薄层细胞检测(TCT)是对宫颈细胞进行细胞学诊断[2]，人乳头瘤病毒(HPV)持续感染可以通过上调HPV E6/E7肿瘤蛋白的表达导致癌症发生，通过检测HPV E6/E7肿瘤蛋白的表达可进行疾病严重程度判断[3]。我们此次研究采用HPV E6/E7 mRNA联合TCT对疑似宫颈癌前病变病人进行检查，分析联合应用在诊断中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015～2017年连云港市妇幼保健院收治的疑似宫颈病变病人98例，年龄62～79岁，平均(69.4±4.3)岁;孕次1～5次，平均 (3.2±0.3)次;产次1～3次，平均 (1.8±0.6)次。纳入标准：(1)临床表现为阴道排液、接触性出血以及阴道异常出血等；(2)在入组前3 d未阴道给药；(3)对于本次研究内容知情，并且在同意书上签字。本次研究是在获得医院伦理委员会批准的前提下开展。排除标准：(1)临床资料不完整；(2)在入组前曾接受阴道给药方式治疗；(3)已经明确宫颈上皮病变或子宫内肿瘤；(4)病人存在精神障碍或沟通障碍；(5)不愿参与本次研究。

1.2 方法

1.2.1 TCT：主要收集病人宫颈管以及宫颈外脱落细胞，将收集到的样本放置于事先准备好的小瓶中，离心处理后，对上皮细胞、炎症细胞、黏液进行分离保存，对其进行归类处理。采用高精密过滤器实施操作，对细胞薄层进行染色处理，然后进行细胞学检查。采用全自动液基细胞制片机进行细胞均化、转移、追片以及固定、染色等操作，检测采用美国liquid protest系统进行，根据国际癌症协会在2001年推荐的TBS分类标准对细胞学检测结果进行分类[4]：(1)未见上皮内病变(NILM)；(2)不明确非典型鳞状细胞(ASC-US)；(3)不能排除高级别非典型鳞状细胞上皮内病变(ASC-H)；(4)低度鳞状上皮内病变(LSIL)；(5)高度鳞状上皮病变(HSIL)；(6)腺癌(AC)；(7)鳞癌(SCC)。ASC-US及以上程度病变定义为阳性，包含ASCUS、ASC-H、LSIL、HSIL、AC以及SCC。

1.2.2 HPV E6/E7 mRNA检测：采用TCT剩余标本进行HPV E6/E7 mRNA检查，所有样本均进行2次检测，取平均值。本次研究所用试剂盒由郑州科蒂亚生物技术有限公司提供，且操作严格按照试剂盒说明进行。

1.2.3 病理检查：先使用低倍镜对病人宫颈病变部位进行观察，判断病人宫颈病变程度，用浓度为3%的醋酸浸湿宫颈，对上皮形态、鳞状上皮、柱状上皮、组织血管以及鳞柱转化区颜色等相关病变情况进行观察，使用碘液对病人宫颈进行染色，对于碘试区疑似病变的组织进行取样送检。由本院2名专业病理医师进行显微镜下观察，确定病理结果。病理诊断标准：参照《病理学》[5]中关于宫颈癌前病变以及宫颈癌的诊断标准，对病理学结果进行划分。将HSIL、原位腺癌、腺癌、鳞癌和鳞腺癌归为阳性结果，将正常子宫颈及LSIL归为阴性结果。

1.3 观察指标 对病人TCT检查、HPV E6/E7 mRNA检查以及病理检查结果进行统计记录，并根据统计结果计算灵敏度、特异度以及准确度。

1.4 统计学方法 数据应用SPSS 18.0进行分析，其中计数资料以百分表示，组间比较采用卡方检验。 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV E6/E7 mRNA检查与病理检查结果比较 HPV E6/E7 mRNA检查与病理检查结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA检查与病理结果比较(n，%)

2.2 TCT与病理检查结果比较 TCT与病理检查结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 TCT检查与病理检查结果比较(n，%)

2.3 HPV E6/E7 mRNA联合TCT检查与病理检查比较 HPV E6/E7 mRNA检查联合TCT检查结果与病理结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3HPV E6/E7 mRNA检查联合TCT检查与病理检查比较(n，%)

项目联合检查阳性联合检查阴性合计病理阳性75(76.5)3(3.1)78(79.6)病理阴性1(1.0)19(19.4)20(20.4)合计76(77.6)22(22.4)98(100.0)

2.4 灵敏度、特异度以及准确度分析 联合检查灵敏度明显高于TCT检查(P<0.05)，联合检测特异度明显高于HPV E6/E7 mRNA检查(P<0.05)，HPV E6/E7 mRNA检查灵敏度高于TCT检查(P<0.05)，TCT检查特异度高于HPV E6/E7 mRNA检查(P<0.05)，联合检查准确度高于TCT检查以及HPV E6/E7 mRNA检查(P<0.05)，见表4。

表4 不同检查灵敏度、特异度以及准确度比较(%)

3 讨论

宫颈癌是目前临床常见的女性恶性肿瘤，由于老年病人绝经后体内雌激素水平显著降低，生理及心理会有较大的变化，加上社会因素的影响，往往未能及时就医，有效诊断是预防宫颈癌的关键[6]。有学者在研究中指出，对于早期发现的宫颈癌，治愈率可达90%以上。TCT属于细胞形态学检测，在明确观察到细胞形态异常时，一般宫颈病变已发展至中晚期，而且该检测方法假阴性概率比较高，进而增加漏诊率[7]。HPV DNA检测是高危宫颈癌检测的有效手段，当发生HPV感染后，只有不到10%的人群会出现整合和进展，因此在进行病毒DNA检测时，宫颈细胞内的HPV载量、病毒种类以及病毒整合程度均未在基因里体现，从而降低DNA检测的准确度[8]。在宫颈疾病的发生以及发展过程中，高危HPV E6/E7基因发挥着重要的作用[9]。HPV E6/E7基因对抑癌基因p53和Rb的降解起到介导作用，进而导致细胞周期调节受到干扰[10]。 HPV E6/E7 mRNA检测可以充分反映与宫颈病变程度相关的病毒活动指标，因此在HPV持续感染的女性宫颈疾病诊断中，HPV E6/E7 mRNA检测更具有临床应用价值[11]。

本研究结果显示，因入选研究对象为有临床症状的老年病人，绝经后阴道出血或排液，故阳性率高。单纯采用HPV E6/E7 mRNA检测具有较高的准确度(87.8%)，但是其特异度(70.0%)相对较低，进而导致误诊率提高。而TCT检测的特异度(90.0%)比较高，联合使用2种检测方法可以将灵敏度提升至96.2%，特异度提升至95.0%，准确度提升至95.9%。曾有学者在研究中指出，细胞学检测联合HPV E6/E7 mRNA检测可以极大程度地提高检测的灵敏度以及特异度，该结论与本次研究结果一致[12]。HPV E6/E7 mRNA及TCT检测均属于无创操作，可降低检查期间发生感染的概率，对老年病人具有更好的临床推广价值[13]。经2种方式诊断为阳性的病人，建议其行进一步病理检查确定，以免存在误诊，影响病人治疗时机。

综上所述，由于老年病人卵巢功能衰退，雌激素水平降低，阴道萎缩，局部抵抗力差，在宫颈疾病的诊断中，采用HPV E6/E7 mRNA及TCT检测不仅避免创伤导致病人出现感染等不良事件，而且具有更高的灵敏度以及特异度，可以有效地提高诊断准确率，临床上应当进一步推广应用。