宫颈腺癌中HPV、IL-6、STAT3的表达及其相关性

姚文娟 宋会双 史玉卿 王凤琴 于 婧 吴冬梅

宫颈癌是妇科临床上1种较为常见的恶性肿瘤，按照病理类型的不同，其包括鳞癌和腺癌，其中腺癌的发病率占10%～15%[1]。近年来，随着女性工作生活压力的增加以及生活方式的改变，宫颈腺癌的发生率呈现逐年升高的趋势，严重威胁女性的生命健康[2]。宫颈癌的发生和发展是1个复杂的过程，大量的研究表明，人乳头瘤病毒(HPV)不仅是鳞癌的主要致病因素，与大多数宫颈腺癌的发生也具有密切的关系[3]。随着对宫颈癌发病机制研究的深入，一些细胞因子以及相关蛋白质的过度表达或异常激活开始受到大家的关注[4]。白细胞介素-6是1种由单核巨噬细胞、T细胞等分泌的一种炎症细胞因子，其具有调节细胞的增殖与分化、调控机体免疫反应等功能，已经被证实与乳腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤有关系[5-6]。信号转导与转录活化因子-3(STAT3)是STAT 家族的重要成员，在近年来被研究发现，它可以参与细胞信号转导和转录激活，在结肠癌、胃癌中均被发现有持续活化[7]。也有相关研究发现，在结直肠腺癌中，IL-6可以激活STAT路径，两者表达水平具有正相关关系[8]。本研究分析了宫颈腺癌患者的HPV感染情况及病变组织中IL-6、STAT3的表达，并分析了它们之间的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2013年1月至2018年12月期间118例在我院进行手术治疗(根治性子宫切除及盆腔淋巴结切除术)的宫颈腺癌患者临床资料，所有患者经病理证实为宫颈腺癌，将其作为宫颈腺癌组，纳入标准：①所有患者在手术前未进行放疗和/或化疗治疗；②所有患者临床病理资料和随访资料完整。排除标准：①并发有严重的心脏、肝、肾脏等重要器官功能障碍的患者；②有其它恶性肿瘤的患者；③合并有严重感染的患者。患者的年龄为31～76岁，平均(51.32±11.24)岁；病程1～3年，平均(2.32±0.81)年；Ⅰ期43例，Ⅱ期55 例，Ⅲ期20例;病理组织分级:高分化12 例，高-中分化25例，中分化48例，中-低分化18例，低分化15 例;伴有淋巴结转移者22 例。另外收集同时期全子宫切除术的子宫良性病变患者118例，将其作为对照组，纳入标准：因子宫良性病变而行全子宫切除术者，如子宫肌瘤、子宫腺肌症等;宫颈薄层液基细胞学检查未见非典型鳞状细胞或癌细胞。排除标准：①并发有严重的心脏、肝、肾脏等重要器官功能障碍的患者；②有其它恶性肿瘤的患者；③合并有严重感染的患者。患者年龄为30～78岁，平均(51.66±11.08)岁；病程1～3年，平均(2.27±0.76)年。比较2组患者的年龄、病程等一般资料无统计学差异(P>0.05)，可比性良好。

1.2 研究方法

1.2.1 HPV检测 将被检者的宫颈脱落细胞为样本，采用导流杂交基因芯片技术检测其HPV感染情况。本研究主要检测了HPV的21种常见分型，包括15种高危型HPV病毒(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)和6种低危型HPV病毒[(HPV6、11、42、43、44，CP8304(81)]。

1.2.2 IL-6和STAT3检测 利用免疫组织化学Elivision二步法检测被检组织中的IL-6和STAT3表达水平。操作要严格按照试剂盒操作说明书进行，一抗抗体分别采用鼠抗人STAT3(1∶100)、鼠抗人IL-10(1∶100)，二抗采用即用型羊抗兔二抗抗体，PBS冲洗后利用DAB显色。阴性对照组中，以PBS液代替一抗。显微镜下观察IL-6和STAT3染色细胞计数情况。参照Mattern 等[9]的方法对结果进行判定:IL-6主要为胞质表达，染色为棕黄色；STAT3主要在细胞核表达，染色主要为明显的黄色。无阳性表达细胞或阳性细胞表达率<5%为(-)，阳性细胞表达率≥5%～30%为(+)，阳性细胞表达率>30%～50%为(++)，阳性细胞表达率>50%为(+++)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 HPV感染情况

118例宫颈腺癌患者中，有102例(86.44%)被检出HPV(+)；正常对照组HPV(+)患者有26例(22.03%)，比较差异具有统计学意义(χ2=98.606，P=0.000)。

2.2 IL-6和STAT3表达

2组被检者宫颈组织中的IL-6和STAT3表达量具有显著的差异，且宫颈腺癌组的IL-6和STAT3细胞阳性率明显高于对照组，比较差异具有统计学意义(P<0.05)；见表1。

表1 2组被检者的IL-6和STAT3表达情况(例，%)

2.3 HPV、IL-6、STAT3之间的相关性

Pearson 相关分析结果显示，118例宫颈腺癌患者中，宫颈癌组织中的HPV感染情况与IL-6、STAT3的表达量成正相关关系(γIL-6=0.724，PIL-6=0.035;γSTAT3=0.7132，PSTAT3=0.013)，IL-6表达量与STAT3表达量也呈现正相关关系(γ=0.899，P=0.000)。

3 讨论

宫颈的腺上皮瘤体病变也伴随着一些列的演变过程，由于其组织结构的特殊性，其癌前病变的评估相对鳞状上皮病变有一定的困难，加之其早期的临床症状不明显，其临床诊断更加困难[10]。早期的诊断和及时合理的治疗是改善患者生活质量，降低死亡率的主要方法[11]。随着人们对宫颈癌认识的深入，以及分子生物学、分子免疫学等的迅速发展，免疫靶向治疗在宫颈癌的治疗中得到越来越多的关注。国内外大量的研究表明，宫颈局部免疫状态的变化是促进宫颈腺癌发生和发展的重要因素[12-14]。

炎症反应已经被证实在多种肿瘤的发生发展中起到了极其重要的作用，机体中的炎症可以降低机体的免疫能力，导致肿瘤心血管的生成，从而促进肿瘤细胞的生长、增殖和转移[15]。IL-6是由Th17 细胞所分泌的一种细胞因子，它与机体的免疫应答具有密切的关系，并且参与了炎症反应、肿瘤及免疫排斥等过程[16]。相关的动物试验表明，IL-6在用二乙基亚硝胺诱导肝癌模型小鼠中中高表达，而经过IL-6基因的小鼠在经过二乙基亚硝胺诱导后肝癌的发生率会显著的降低，认为IL-6与肝癌的发生具有密切的关系[17]。本研究的结果显示，宫颈腺癌组织中的IL-6表达水平明显的高于正常宫颈组织，提示，IL-6与宫颈腺癌的发生发展有关。IL-6可能通过参与宫颈腺癌中的免疫应答过程发挥其调节细胞增殖和分化、调控炎症反应等作用[18]。细胞信号转导在肿瘤发生发展中的作用也是近年来的一个热点，其可能在肿瘤细胞中的凋亡和增殖分化中具有一定的作用[19]。STAT3作为STATs家族的主要成员，其在多种细胞因子的信号转导中具有较为重要的作用，它是一种近年来新发现的癌基因，相关的研究表明，它的过度激活会使机体细胞发生异常增殖，还会对细胞的凋亡产生一定的抑制作用，从而促进了肿瘤的细胞的形成和生长[20]。本研究的结果显示，宫颈腺癌组织中的STAT3表达水平明显的高于正常宫颈组织，提示，STAT3与宫颈腺癌的发生发展也具有密切的关系。

HPV感染在宫颈癌中的作用已经被国内外大量的研究所证实，在对其致病机理的作用研究中发现，HPV的致病机制可能与多种癌基因有关[20]。本研究对是否与IL-6、STAT3具有相关性进行了分析，结果显示，宫颈癌组织中的HPV感染情况与IL-6、STAT3的表达量成正相关关系。IL-6与STAT3之间也具有正相关关系。张晓芹等[21]的研究显示，结肠癌组织中STAT3的表达与IL-6 表达水平亦呈现正相关，IL-6 作为STAT3 的细胞活化因子，能够分别通过经典途径和跨信号途径诱导STAT3 活化，促进下游信号的转导，从而促进结肠癌的进展[22]，这一结论也得到了众多研究者们的认可[23-24]。而对于HPV是如何通过调节IL-6、STAT3发挥其致病作用目前还缺乏充分的认识，需要进一步的大样本深入研究。

综上所述，宫颈腺癌患者中多数伴有HPV感染以及IL-6、STAT3高表达，HPV感染情况与IL-6、STAT3的表达量呈现正相关，IL-6表达量与STAT3表达量也呈现正相关关系。IL-6、STAT3相关信号通路在宫颈腺癌的诊治中具有重要的参考价值，可为其治疗提供一种新型的靶点和思路。