祛风止痛贴膏薄层鉴别方法的建立

李向欣，王法宇，高梓漠，何 蕊，王 琦，都 帅，李庆杰*

（1.长春中医药大学附属医院，长春 130021；2.北京医药集团职工大学中药系，北京 100053；3.南昌大学玛丽女王学院，南昌 330000；4.吉林农业大学，长春 130118）

祛风止痛贴膏为长春中医药大学附属医院的院内制剂，通过与临床经验相结合，用以治疗体质虚弱、肝肾亏虚、肾虚腰痛或者足膝痿弱所致的腰椎间盘突出症。但由于长期以来，缺少对组方药的定性鉴别，不能有效地对其进行质量控制，使每批成品的质量亦不能得到有效保证[1-3]。当归、赤芍、马钱子和麻黄作为祛风止痛贴膏中的有效成分，与其制剂的疗效密切相关[4-8]。因此，为了更好地控制产品质量，我们建立了4 种药材的薄层色谱鉴别方法，更好的对其进行质量控制，保证制剂的质量控制和临床疗效。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 SK8200HP 超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），XMTD-8222 恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），BT125D 型十万分之一电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），CAMAG 薄层扫描色谱仪（瑞士 CAMAG 公司）。

1.2 试剂 高效预制薄层板（青岛海洋化工厂）。藁本内酯对照品（111737-201608）、芍药苷对照品（110736-201741）、士的宁对照品（110705-201307）、马钱子碱对照品（110705-201306）、盐酸麻黄碱对照品（120927-201514）、当归对照药材（120927-201617）、赤芍对照药材（121092-201003）、马钱子对照药材（121164-200603）、麻黄对照药材（121604-201502），均购于中国药检所。祛风止痛贴膏由长春中医药大学附属医院实验研究中心提供。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 当归的鉴别 取批号为20180310 供试品15.0 g，加入150 mL H2O，并将其一起放入体积为250 mL 的圆底烧瓶中。将烧瓶上端连到挥发油收集装置，并从挥发油收集装置上端倒入蒸馏水，直到水充满挥发油收集装置，并溢流到下面连接的圆底烧瓶中为止，再向挥发油收集装置中加入CH3CH2OOCCH32 mL，并在挥发油收集装置上端连接冷凝管，采用电热套加热至回流，保持回流状态2 h，取CH3CH2OOCCH3层，作为供试品。取藁本内酯对照品，用CH3OH 作为溶剂配制成1 mg/mL 的对照品溶液。再取当归对照药材0.5 g，用CH3CH2OCH2CH3作为溶剂，采用超声波提取机超声10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加CH3CH2OOCCH31 mg/mL 制成对照药材溶液。按照本制剂的处方及比例称取除当归以外的其他药材，并按照本制剂的加工方法制备，得到当归阴性样品，按照供试品溶液的处理方法操作得到当归阴性样品溶液。取以上4 种溶液各5 μL，依次先后点在硅胶G板上，用正己烷（CH3CH2CH2CH2CH2CH3）醋酸乙酯（CH3CH2OOCCH3）（9:1）作为展开溶剂，上行展开，取出以后晾干，等待观察[9-11]。层析结果：通过在365 nm波长下进行观察，发现供试品、对照品、对照药材色谱相应的位置有相同斑点，阴性样品对应位置不存在干扰，并且特征斑点清晰，具有良好的重现性，见图1。

图1 当归薄层鉴别

2.2 赤芍的薄层鉴别 取鉴别 1）项下水液，加入水饱和正丁醇CH3（CH2）3OH 溶液，均匀振摇提取3 次，每次使用水饱和正丁醇30 mL，合并CH3（CH2）3OH溶液，蒸干后残渣加CH3OH 1 mL 溶解，得到供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5 g，加CH3OH 10 mL，采用超声波提取机超声5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加CH3OH 1 mL，得到对照药材溶液。取芍药苷对照品加CH3OH 制成1 mg/mL 溶液，作为对照品溶液。按照本制剂的处方及比例称取除赤芍以外的其他药材，并按照本制剂的加工方法制备，得到赤芍阴性样品，按照供试品溶液的处理方法操作得到赤芍阴性样品溶液。吸取上述4 种溶液各5 μL，依次先后点于同一硅胶G 薄层板上，以（CHCL3）三氯甲烷-（CH3OH）甲醇-（H2O）水（13:7:2）的下层溶液为展开剂，上行展开，取出后晾干并喷以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰[12-14]。层析结果：通过观察发现，供试品、对照品、对照药材色谱相应的位置有相同斑点，阴性样品对应位置不存在干扰，并且特征斑点清晰，具有良好的重现性，见图2。

图2 赤芍薄层鉴别

2.3 马钱子的薄层鉴别 取批号为20180310 供试品20 g，加入H2O 稀释至30 mL，加适量NH3·H2O 对照比色卡调PH 至10，加入CHCl3，每次20 mL，分3 次振摇提取，合并上层清液，蒸干。残渣加1 mL CHCL3溶解得到供试品溶液。再取马钱子对照药材0.5 g，加入5 mL（CHCL3）三氯甲烷-（CH3CH2O）乙醇（10:1）的混合溶液与0.5 mL NH3·H2O 试液，加上塞子密闭，采用超声波清洗机超声处理20 min，超声后滤纸过滤，取过滤后的溶液作为对照药材溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加CHCL3制成2 mg/mL 的溶液，得到对照品溶液。按制剂的处方比例称取马钱子以外的其他药材并按照本制剂的加工方法制备，得到马钱子阴性样品。按供试品溶液制备方法操作得制马钱子阴性样品溶液。吸取上述4 种溶液各10 μL，依次先后点于同一硅胶G 薄层板上，以（C7H8）甲苯-（CH3COH3）丙酮-（CH3CH2O）乙醇-（NH3·H2O）浓氨试液（4:5:0.6:0.4）为展开剂，上行展开，取出后晾干，喷以改良铋钾试液[15-16]。层析结果：通过观察发现，供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品色谱对应位置不存在干扰，并且斑点分离清晰，具有良好重现性，见图3。

图3 制马钱子薄层鉴别

2.4 麻黄的薄层鉴别 取批号为20180310供试品45 g，加硅藻土15 g，研磨均匀，加CH3OH 120 mL，共同放置于250 mL 的锥形瓶内，采用超声波提取机超声20 min，滤过后滤液蒸干，残渣加水30 mL 使溶解，加适量HCL 对照比色卡调pH 至2～3，用C4H10O提取3 次，每次30 mL，弃去上层C4H10O 溶液，加入适量NH3·H2O 对照比色卡调PH 至10～11，再用C4H10O 分3 次提取，每次30 mL，合并上层C4H10O 液，蒸干，残渣加CH3OH 0.5 mL 溶解，作为供试品溶液。再取麻黄对照药材1.0 g，同上法制成其对照药材溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，用CH3OH 作为溶剂制成1 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。按照本制剂的处方及比例称取除麻黄以外的其他药材，并按照本制剂的加工方法制备，得到当归阴性样品，按照供试品溶液的处理方法操作得到麻黄阴性样品溶液。吸取上述4 种溶液各5 μL，依次先后点于硅胶G 薄层板上，以（CHCL3）三氯甲烷-（CH3OH）甲醇-（NH3·H2O）浓氨试液（20:5:0.5）为展开剂，上行展开，取出后晾干，喷以茚三酮试液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰[17-19]。层析结果，通过观察发现，供试品、对照品、对照药材色谱相应的位置有相同斑点，阴性样品对应位置不存在干扰，并且特征斑点清晰，具有良好的重现性，见图4。

图4 麻黄薄层鉴别

3 讨论

中药复方制剂是指在中医药理论指导下，以中药饮片为原料，根据规定的处方制剂工艺加工成一种供临床使用的剂型。其质量与中药药材的质量和制剂密切相关，只有保证中药材的质量，才能确保批次不同的中药复方制剂具有稳定的质量[20]。薄层鉴别作为中药制剂鉴别的主要方法之一，因其设备简单、操作方便而被广泛应用，使用薄层鉴别首先就是要考虑方法的适用性，尽量使用毒性较小的试剂进行提取和薄层展开，以保证试验的操作性[21]。

祛风止痛贴膏是由16 味中药组成的复方制剂，组成成分复杂，干扰多。各味药的鉴别分别尝试了多种样品提取及纯化方法，优化色谱条件，最后选定了本文中的当归、赤芍、马钱子和麻黄的定性鉴别方法，实验结果中阴性对照表明其他成分对本方法无干扰，该方法操作便捷、结果可靠，专属性强，重现性好，可用于本品质量控制。

本文通过薄层鉴别法对祛风止痛贴膏进行了定性鉴别，下一步还将从含量测定方面进行研究，为祛风止痛贴膏的质量提供更全面、更可靠的支持。