归仁润肠颗粒对慢传输型便秘小鼠肠道动力的影响

李国峰，李庆杰，金世峰，孙一涵

（1.长春中医药大学附属医院，长春 130021；2.长春中医药大学，长春 130117）

结肠慢传输型便秘（slow transit constipation,STC）是指结肠传输功能减弱，肠内容物传输缓慢所引起的便秘，主要症状为便意减少或消失，导致排便困难，粪质干硬，一般伴有腹胀，严重影响患者的生活质量[1-2]。本研究主要观察归仁润肠颗粒对慢传输便秘小鼠结肠传输的影响，为临床应用归仁润肠颗粒治疗慢传输便秘提供动物实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 健康KM 小鼠40 只，SPF 级，体质量18～20 g，雌雄各半，购于辽宁长生生物技术股份有限公司，合格号：SCXK（辽）2015-0001。饲养于长春中医药大学实验动物中心。

1.2 药物 氯化钠注射液（100 mL：0.9 g）、印度墨水（100 mL/瓶，北京索莱宝科技有限公司）。归仁润肠颗粒（当归、生白术、桃仁、肉苁蓉、枳壳、厚朴、蒲黄、五灵脂、全瓜蒌、甘草）：长春中医药大学附属医院实验研究中心提供。枸橼酸莫沙必利片：（5 mg/片，亚宝药业集团股份有限公司，H20090158）。

1.3 试剂与仪器 电子天平、灌胃针、解剖台、烧杯、刻度尺等。

1.4 方法

1.4.1 慢传输便秘小鼠模型复制 参照许海尘[3]STC制备方法的文献报道进行，具体如下：将40 只小鼠随机分成正常组、模型组、归仁润肠颗粒组、莫沙必利组，每组各10 只，每组雌雄各半。分别置入笼中，适应3 d 后，模型组、归仁润肠颗粒组、莫沙必利组小鼠皮下注射盐酸吗啡注射液，2.5 mg·kg-1·d-1，连续注射45 天。正常组注射等量生理盐水。隔日测量小鼠体质量，根据体质量调整注射剂量。

1.4.2 给药方法 造模成功后，各组分别给药。归仁润肠颗粒组：生药量9.44 g·kg-1，1 次/d。莫沙必利组：给药剂量为1.15 g·kg-1，1 次/d。正常组、模型组按同体积生理盐水灌胃，1 次/d。各组均连续灌胃14 d。期间隔日测量小鼠体质量，根据体质量调整给药剂量。在给药期间，所有小鼠自由摄食与饮水。

1.4.3 测定24 h 粪便干重 灌胃结束后，收集小鼠24 h 粪便。收集粪便前24 h 每只小鼠单独置于笼中，各饲养笼中放置滤纸，期间自由饮食饮水，收集各笼中小鼠24 h 粪便，晾干称重。

1.4.4 肠道推进率测定 给药结束后，给予2 组禁食不禁水24 h。禁食24 h 后，给予每只小鼠印度墨水0.5 mL灌胃，灌胃结束同时开始计时30 min，用颈椎脱臼法处死2 组小鼠。摘除从幽门到肛门的所有肠道，轻轻牵拉肠道，使其拉直，使肠道处于无张力状态。测量幽门至肛门的肠道总长度及肠道推进距离（墨汁距幽门距离即肠道推进距离）。计算肠道推进距离占肠道全长的百分比。按照公式计算肠道推进的百分比，即：肠道推进率=（肠道推进距离/肠道总长度）×100%。

1.5 观察指标 24 h 粪便干重及肠道推进率。

1.6 统计学方法 采用SPSS 22.0 进行数据分析，实验数据均以均数±标准差（）表示，采用单因素方差分析和多重比较等。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组造模前后小鼠24 h平均粪便干重比较 见表1。

表1 各组造模前后小鼠24 h 平均粪便干重比较（，n=10） g

表1 各组造模前后小鼠24 h 平均粪便干重比较（，n=10） g

注：与正常组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△△P＜0.01

2.2 各组给药后小鼠肠道推进率比较 见表2。

表2 各组给药后小鼠肠道推进率比较（，n=12） %

表2 各组给药后小鼠肠道推进率比较（，n=12） %

注：与正常组比较，## P＜0.01；与模型组比较，△△P＜0.01

3 讨论

中医学认为慢传输型便秘可从“气虚”“阴虚”两方面论治[4]，阴伤液亏，燥热干涩不润，腑气滞留不下[5-6]。近年来，流行病学调查显示，全球范围便秘发病率为0.7%～79%[7],国内为3%～17%[8]。功能性便秘根据肠道动力改变和肛门直肠功能变化分为4 型[9]：慢传输型便秘（STC）、排便障碍型便秘、混合型便秘、正常传输型便秘。SHAHID 等[10]报道STC 发病率占慢性功能型便秘4 种亚型之首。戴菲等[11]报道我国STC 占功能性便秘的45.5%。目前认为，便秘的发病机制与Cajal 间质细胞、肠道动力改变、肠神经系统异常、水通道蛋白、神经递质异常等密切相关[12-14]。其中Cajal 间质细胞（ICC）起源于胃肠道间质干细胞，李国峰等[15-16]报道的ICC 所表达的c-kit 是维持正常数量及形态功能的关键，乐音子等[17]报道的通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠c-kit 和MLCK 表达的影响，肖国辉等[18]报道的应对STC 疾病的中医证型的方法，都明确了慢传输型便秘的作用机制。STC 的治疗以药物治疗为主，由于STC 往往由多种病因共同作用导致，虽然药物种类繁多，但多数药物只针对部分病因，整体治疗效果欠佳。中医药治疗便秘有着悠久的历史和丰富的经验，从中发掘出有效的治疗方法，并阐明治疗的机制，是学者探索的重点。蒋峰等[19]报道的关于养阴润肠方治疗慢传输型小鼠的机制研究，于永铎等[20]报道的小柴胡汤加减治疗慢传输型便秘临床疗效评价相关内容，都体现了中医药对治疗慢传输型便秘的不同方法，学者们通过不同研究提出中医药可通过恢复ICC 细胞数量及表型、影响肠神经递质的释放、结肠水通道蛋白的表达治疗STC，童卫东[21]报道的结肠慢传输型便秘的病因和诊断中提到，没有发现与ICC 相关的细胞变性、坏死和调亡，这些研究为ICC 的可恢复性提供了依据，同时也说明了中医药可能通过多靶点发挥作用。

本研究结果显示，归仁润肠颗粒可以显著增加便秘模型小鼠粪便干重及肠道推进率，效果优于莫沙必利，证明归仁润肠颗粒能提高小鼠肠道传输功能，为归仁润肠颗粒治疗慢传输便秘提供了理论依据。