p53和CD56在甲状腺微小癌合并转移的表达及其相关性研究

2019-12-26杜菲菲

国际检验医学杂志 2019年24期

马越,杜菲菲

(延安大学附属医院：1.内分泌科；2.老年病科，陕西延安 716000)

甲状腺微小癌(TMC)是病灶小于或等于1 cm的甲状腺癌，其来源于滤泡或滤泡旁的甲状腺细胞[1]。TMC最有效的治疗方法是选择甲状腺切除术，然后进行放射性碘消融和促甲状腺激素(TSH)抑制治疗，另外化学和放射疗法也被利用于晚期和远处转移阶段，经过治疗后，患者5年生存率约为98.1%[2-3]。虽然上述方法治疗效果明显，但若能以指标水平表征TMC转移发生过程的变化，则能更好地帮助临床诊断和治疗这种疾病。肿瘤蛋白p53和CD56均被证实在DNA损伤修复和自然杀伤细胞免疫调节中起作用[4-5]。故本文拟分析TMC转移患者体内p53和CD56等指标水平变化，并分析其关联性。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2017年1月至2018年12月于本院接受治疗的甲状腺癌患者，纳入标准：年满18周岁，经同一组操作人员超声或X线检查和细胞活检确诊为甲状腺癌[6]，病灶直径小于或等于1 cm，有或无淋巴结转移，拟于本院进行手术治疗或有手术病理检查样本，自愿参与研究；排除标准：患其他恶性肿瘤，参与本研究前有相关疾病手术史，参与本研究前3个月服用相关治疗药物。将符合标准的154例患者纳入研究(观察组)，其中男41例，女113例，年龄18～76岁，平均(48.53±12.12)岁，病灶直径0.1～1.0 cm，平均(0.61±0.25)cm，病灶数量1～8个，单灶105例，多灶49例，单叶多灶21例，双叶多灶28例。选择同期同年龄段于本院行手术的甲状腺增生(TH)且非甲状腺癌患者50例作为对照组，纳入标准：行相关手术，留取甲状腺组织样本，年龄超过18周岁，无恶性肿瘤，自愿参与研究。其中男11例，女39例，年龄19～74岁，平均(46.41±10.58)岁。对照组和观察组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经伦理委员会批准且在其监督下完成。

1.2样本收集对于拟进行手术患者，在手术进行中获取病理样本后快速冰冻；对于已行手术并保有病理样本的患者，直接取样本进行组织学检查。另外，回顾全部患者临床和病理资料，分析其一般资料、病灶数量、大小，淋巴结转移情况和样本组织病理特征以用于多因素分析。

1.3指标检测 p53、CD56、CK19和PTEN均由同一组操作人员采用免疫组化实验检查，全部抗体均为鼠抗人单克隆抗体。其中空白对照使用1×PBS缓冲液替代一抗，其余操作不变。将手术中取得的病例组织和对照组样品全部进行石蜡包埋，连续切约为4 μm厚片后脱蜡进行免疫组织化学染色。大致操作为消除酶活后加入一抗过夜静置，滴加二抗后37 ℃孵育10 min，二氨基联苯氨(DAB)显色后，于镜下观察样本染色情况。其中阳性p53为细胞核棕黄色着色，阳性CD56为细胞膜棕黄色着色，阳性CK19为细胞浆棕黄色(颗粒)着色。根据着色情况将阳性强度分为四级，分别是无着色(无色，计0分)、淡着色(浅黄色，计1分)、中度着色(黄色，计2分)和重着色(棕黄色，计3分)；再在同等倍镜下单个视野内记阳性着色细胞数目，阳性细胞数超过一半计3分，不足一半但超过四分之一计2分，不足四分之一但超过5%计1分，其余计为0分；将上述两计分相乘得到最终阳性评估分，其中不足1分为阴性，大于1分但不足3分弱阳性，大于3分但不足6分为阳性，大于6分为强阳性，分别以-、+、++和+++表示[7]。

2 结果

2.1两组p53和CD56表达水平比较观察组p53阳性表达合并转移病例64例(69.57%)，非转移病30例(48.39%)；CD56弱阳性表达合并转移病例4例(4.35%)，非转移病例阳性表达19例(30.65%)，其余均为阴性表达；CK19合并转移病例全部阳性表达，其中强阳性73例(79.34%)，而非转移病例阳性表达56例(90.32%)。对照组p53弱阳性表达4例(8.00%)，其余为阴性表达；CD56阳性表达32例(64.00%)；CK19阳性表达16例(32.00%)，其余为阴性表达。对比两组p53、CD56和CK19表达情况发现，两组上述3个指标表达水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1及图1、2。

注：A为对照组、B为观察组

图1病理样本切片HE染色(×100)

表1 两组p53和CD56表达水平比较

注：与对照组相比，*P<0.05；与观察组合并转移相比，#P<0.05

注：A为p53阴性表达、B为p53阳性表达、C为CD56弱阳性表达、D为CD56阳性表达、E为CK19阴性表达、F为CK19阳性表达

图2p53、CD56和CK19在组织中表达情况(×100)

2.2观察组p53、CD56表达与TMC病理参数间的关系将观察组患者临床资料根据年龄、性别等因素进行细分，其后分析p53、CD56表达与各因素之间的关系，结果显示，p53表达与淋巴结转移、TNM分期、组织分化程度密切相关(P<0.05)，与其他单因素无明显关联(P>0.05)，而CD56表达仅与淋巴结转移呈明显相关性(P<0.05)。见表2。

2.3p53和CD56诊断TMC发生和转移的效能比较将术前多普勒超声和/或MRI和术后组织活检结果作为本研究的诊断金标准，分别以p53、CD56、p53+CD56作为TMC发生和转移的诊断指标进行效能分析。结果显示,p53+CD56的诊断TMC发生具较高准确率(96.57%)，p53、CD56单独应用时准确率明显低于联合检测(P<0.05)。见表3、4。

表2 观察组p53、CD56表达与TMC病理参数间的关系(n)

表3 p53和CD56诊断TMC发生的效能比较(%)

表4 p53和CD56诊断TMC转移的效能比较(%)

3 讨论

甲状腺癌可分为乳头状癌、滤泡癌、髓样癌、分化差的甲状腺和未分化癌，其中乳头状癌最为常见，经过治疗后虽然其预后较好，但是极易发生中央区淋巴结转移[8]。比较TMC和TH病例p53和CD56表达情况后发现，上述两个指标在上述两组病例中表达水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。然后又将TMC组病例分为合并淋巴结转移和非转移，再次对比他们之间的p53、CD56表达差异发现，p53在TMC合并转移病例中69.57%阳性表达，明显高于未转移的48.39%；CD56在合并转移病例中弱阳性表达4.35%，其余为阴性表达，而非转移病例中阳性表达30.65%，差异有统计学意义(P<0.05)；CK19在合并转移病例中全阳性表达，而在非转移病例中90.32%阳性表达，其表达情况分布差异有统计学意义(P<0.05)。上述结果说明，p53和CD56在TMC合并转移和非合并转移病例中表达差异明显，其可作为TMC合并转移的特异性指标被利用与临床。

现阶段研究表明，在DNA持续受损时，肿瘤蛋白p53激活DNA修复蛋白以保护其稳定；当DNA损伤被认为不可修复时，p53可启动细胞程序性死亡；p53还可以通过将细胞周期保持在DNA损伤识别的G1/S调节点以阻止细胞生长，这被认为是抗癌作用的一部分[9-10]。在肿瘤组织水平，其生长需要招募新的血管以供给，而p53通过干扰抑制血管生成促进因子的产生从而发挥作用[11]。因此，在TMC中p53阳性表达比例更高，与本研究结果一致。此外，p53的靶基因siva1是肿瘤转移和上皮细胞-间质细胞转化的重要调控因子，故其与肿瘤转移发生密切相关，也与研究者发现的在合并转移和非转移TMC病例中p53表达存在差异的结果一致[12]。在先天免疫反应中自然杀伤细胞通过表达CD56以产生更多的细胞因子，诸如白细胞介素-10、干扰素γ和肿瘤坏死因子b等[13]。另外在巨噬细胞促进自然杀伤细胞的细胞因子分泌过程中，CD56阳性比CD56阴性表达自然杀伤细胞其产生量更多，因而CD56表达与肿瘤发生和迁移密切相关，与研究者分析结果一致[14]。

目前在临床上，常以超声诊断TMC和TH，但因病灶较小故血液信号较弱，加之超声下回声稍高或等回声，常被误诊[15]。上述研究发现，p53和CD56在TMC和TH病例中出现明显的表达差异，因而推测这两个参数可辅助TMC和TH的鉴别。结果显示，p53、CD56单独应用时准确率分别为85.78%和70.59%，两参数联合使用时其诊断准确率为96.57%。因此，p53和CD56单独或联合辅助超声或MRI等常规检测能够帮助准确诊断与区分TMC和TH。另外，因为p53和CD56表达与TMC淋巴结转移密切相关，又推测其可以帮助诊断TMC的淋巴结转移。效能比较结果显示，p53和CD56单独或联合使用诊断TMC合并转移的准确率均不超过70.00%，故不建议单独使用p53、CD56及p53+CD56检测应用于临床诊断TMC转移，而可辅助现有常规检测手段，以达到更精准和快速的目的。