T细胞亚群和TSP-1、β2-GP1-Ab检测在系统性红斑狼疮中的诊断价值

2019-12-26高振庄郭亚平王雅宁杨桂云

国际检验医学杂志 2019年24期

高振庄，梁妍，李佧，郭亚平，王雅宁，杨桂云

(保定市第一中心医院东院：1.检验科；2.产科，河北保定 071000；3.保定市中心血站，河北保定 071000；4.保定市第一中心医院西院检验科，河北保定 071000；5.保定市第一中心医院体检科，河北保定 071000)

系统性红斑狼疮(SLE)是一种可累及机体多脏器损害的自身免疫性疾病，其中70%～90%为女性患者[1]。SLE发病机制十分复杂，但目前确切机制尚未完全阐明。研究报道，SLE的发生可能与环境、遗传等因素有关，尤其是T细胞亚群失衡及细胞因子分泌紊乱最终导致的免疫系统异常应答在SLE的发病及病情迁延中起着重要作用[2]。T细胞亚群包含了Th1、Th2、Th17及调节性T细胞(Treg)，各种细胞分泌的细胞因子及在体内免疫方面发挥着不同作用。最初，人们认为Th1/Th2失衡与SLE患者的发病有关，但研究发现，抗心磷脂抗体异常、动静脉血栓、内分泌异常等均是SLE发病的危险因素[3-4]。本研究通过观察SLE患者T细胞亚群及血小板反应蛋白1(TSP-1)、β2糖蛋白1抗体(β2-GP1-Ab)变化情况，并分析其在SLE中诊断应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2016年8月至2018年8月保定市第一中心医院收治的抗磷脂抗体阳性SLE患者65例进行研究(SLE组)，所有患者均符合1997年美国风湿病学会(ACR)制定的分类标准[5]，其中男27例，女38例，年龄(42.36±10.69)岁，平均病程(28.65±12.57)月，根据《系统性红斑狼疮诊断及治疗指南》[6]以SLEDAI积分评估疾病活动性：轻度21例，中度33例，重度14例。同期选取本院体检健康者35例作为对照组，其中男4例，女31例，年龄(42.19±9.67)岁。本研究得到所有受试者知情同意，并得到本院伦理委员会核准。两组受试者的基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2纳入标准与排除标准纳入标准：(1)符合上述诊断和分类标准者；(2)年龄>18岁者；(3)临床资料完整者；(4)经肾脏病理学检查证实。排除标准：(1)近期使用过可能影响本研究结果的药物者；(2)伴有原发性心血管疾病、糖尿病及其他肾损害者；(3)具有家族免疫性疾病史者；(4)正在参与其他研究者。

1.3仪器与试剂 FACSCalibur型流式细胞仪(美国Sigma公司生产)，Microfuge 20型离心机(贝克曼库尔特生产)，酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒(武汉默沙克生物科技有限公司)。

1.4方法 SLE组患者于入院治疗前清晨静脉空腹采血5 mL，对照组于体检当天采集血液标本5 mL。采用美国贝克曼ALLEGRAX-12医用离心机3 000 r/min离心15 min后，分离血清，置于-60 ℃冰箱保存待测。采用美国BD医疗器械有限公司FACSCalibur型流式细胞仪进行Th1、Th2、Th17及Treg检测，酶联免疫吸附测定(ELISA)进行TSP-1、β2-GP1-Ab检测。所有指标均检测3次取平均值。操作流程由专业检验人员严格按照仪器及试剂盒说明书进行操作。

1.5观察指标记录并观察两组受试者的Th1、Th2、Th17、Treg、TSP-1、β2-GP1-Ab水平变化情况，分析其与SLEDAI评分的关系，对模型中有价值指标进行受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析评估其在SLE中的诊断价值。

1.6统计学处理采用SPSS22.0进行数据处理，T细胞亚群和TSP-1、β2-GP1-Ab水平各指标等计量资料用表示，进行t检验，Pearson相关性分析，计数资料进行χ2检验，有价值指标进行ROC曲线分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1两组受试者的T细胞亚群检测结果比较与对照组比较，SLE组的Treg水平明显降低，而Th2、Th17水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组受试者的T细胞亚群检测结果比较

2.2两组受试者的TSP-1、β2-GP1-Ab水平比较与对照组比较，SLE组患者的TSP-1水平明显升高，β2-GP1-Ab水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组受试者的TSP-1、β2-GP1-Ab水平比较

2.3T细胞亚群和TSP-1、β2-GP1-Ab水平与SLEDAI评分的相关性相关性分析显示，Th2、Th17、TSP-1与SLEDAI评分呈正相关(r=0.552、0.318、0.364，P=0.000、0.014、0.001)，β2-GP1-Ab、Treg与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.552、-0.353，P=0.000、0.003)。

2.4T细胞亚群和TSP-1、β2-GP1-Ab检测诊断SLE的效能分析将T细胞亚群和TSP-1、β2-GP1-Ab水平与SLEDAI评分存在相关性的指标应用ROC分析其诊断效能。因变量为二分类变量，对照组标记为0，SLE组标记为1。自变量为血清Th17、Th2、Treg及TSP-1、β2-GP1-Ab水平，ROC曲线分析显示，TSP-1、β2-GP1-Ab检测的ACU下面积均明显大于Th17、Th2及Treg单独检测(ZTSP-1=2.637、3.964、2.871，P=0.008、0.001、0.004；Zβ2-GP1-Ab=2.412、3.964、2.802，P=0.016、0.000、0.005)，TSP-1、β2-GP1-Ab检测的灵敏度、特异度均优于单独检测(P<0.05)，见图1和表3。

注：1为Th7；2为Th2；3为Treg；4为TSP-1；5为β2-GP1-Ab

图1血清各指标诊断SLE的ROC曲线

表3 T细胞亚群指标和TSP-1、β2-GP1-Ab诊断SLE的价值

3 讨论

SLE是一种自身免疫介导的，以免疫性炎症为主要表现累及多脏器、多系统的弥漫性结缔组织疾病[7]。其病情迁延难愈，病死率较高，确切病因至今尚未阐明。多数学者认为，SLE的发病机制中，Th细胞亚群比例失衡是重要环节之一，“Th2优势”说、“Th1优势”说等多种免疫紊乱状态均被证实[8]。Th2优势学说表明SLE患者存在Th2功能亢进，即Th1相关细胞因子IL-12、IFN-y等主导细胞免疫的细胞因子分泌降低；即Th2相关细胞因子IL-4、IL-10等促抗体生成参与体液免疫的细胞因子分泌增加，促进B细胞增殖、成熟及活化，导致产生多种自身抗体，进一步引起组织损伤。此外，抗磷脂综合征、免疫应答异常也与SLE的发生发展关系密切[9]。

细胞因子既是免疫系统功能执行介质，又是其他系统如内分泌、神经系统等联系的重要桥梁。但有研究表明，在SLE活动期患者的“Th2优势”说、“Th1优势”说中细胞因子异常分泌的表现并不一致[10]。本研究发现，与对照组比较，SLE组的Th2水平明显升高，这提示本研究SLE患者是偏向Th2失衡型，与GERGIANAKI 等[11]和陈海莲等[12]研究报道的狼疮肾炎患者的CD4+T细胞绝大多数表达Th2型相关趋化因子CCR4受体，而很少表达Th1型CCR5受体基本一致。Treg和Th17是调节性T细胞新近发现的两个成员，研究证实在Th1/Th2失衡的基础上，Treg/Th17失衡也在SLE疾病的发生、进展中发挥着重要作用[13]。Treg是具有免疫抑制作用CD4+T细胞，通过分泌IL-4、IL-10等细胞因子在介导炎症、防御感染和免疫应答调控等过程中发挥作用[14]。本研究中，与对照组比较，SLE组的Treg水平明显降低，而Th17水平明显升高。TSP-1是血小板的重要组成部分，是一种多功能细胞外基质蛋白，最初从血小板细胞膜中分离得到，在新血管生成、细胞凋亡中均有重要作用，且参与机体免疫应答反应关系密切[15]。血管异常性病理改变也是SEL患者主要的病理基础之一，可出现在机体任何器官中。研究证实，SEL患者血小板数量减少，可导致患者自发性出血，加重预后[16]。正常情况下，吞噬细胞吞噬活化或衰老的血小板不会引起炎性反应，但当β2-GP1-Ab异常表达时刻引起吞噬细胞释放炎性因子介导免疫炎症，β2-GP1-Ab还可通过血小板Fc受体抑制血小板活化，大量凝集血小板导致血小板数量减少。本研究结果显示，与对照组比较，SLE组患者的TSP-1水平明显升高，β2-GP1-Ab水平明显降低，这进一步证实其参与SLE的发生与进展。近年来，研究也指出β2-GP1-Ab与血栓性疾病之间存在直接关系[17]。本研究从T细胞亚群，以及TSP-1、β2-GP1-Ab水平方面入手，分析了其在SLE中的应用价值。

Pearson相关性分析提示，Th2、Th17、TSP-1与SLEDAI评分呈正相关(r=0.552、0.318、0.364,P=0.000、0.014、0.001)，β2-GP1-Ab、Treg与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.552、-0.353，P=0.000、0.003)。提示SLE患者的Th17、Th2、Treg、TSP-1、β2-GP1-Ab指标均异常与病情存在一定关系。与相关研究结果一致[18]。本研究进一步应用ROC曲线分析了其在SLE患者诊断中的价值，结果显示，TSP-1、β2-GP1-Ab检测的ACU下面积均明显大于Th17、Th2及Treg单独检测，TSP-1、β2-GP1-Ab检测的灵敏度、特异度均优于单独检测(P<0.05)。这提示，SLE患者存在T细胞亚群失衡和TSP-1、β2-GP1-Ab异常表达，且与SLEDAI评分相关，对其系统检测在临床诊断及病情评估中均有积极价值。