酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原弱阳性结果分析与报告

苏立莹

【摘 要】目的：对酶联免疫吸附（ELISA）法测定乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）弱阳性结果进行分析与探讨。方法：对ELISA法检测的1025例HBsAg阳性标本中出现的110例弱阳性标本分别用胶体金法与化学发光法进行鉴别与定量分析。结果：110例弱阳性标本中有50例为后带效应导致，胶体金法检测强阳性，HBsAg化学发光法定量检测均>250IU/mL；15例为真弱阳性，胶体金法检测阴性，化学发光法定量检测结果在0.05-5.00IU/mL之间；45 例为假阳性，胶体金法与化学发光法均为阴性，假阳性率为4.39%。结论：加强检验前、中、后质量管理，避免假阳性结果的报告；对HBsAg弱阳性结果用胶体金法与化学发光法进行复查，并加强与临床医患的沟通。

【关键词】酶联免疫吸附法；乙型肝炎病毒表面抗原；弱阳性

【中图分类号】R 512162 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）04-2464-01

酶联免疫吸附试验（ELISA）法是临床进行乙型肝炎病毒（HBV）诊断的主要方法之一，其试验灵敏度高，特异性好，操作简便，在国内广泛应用。但在工作中常常会遇到弱阳性标本，为了防止假阳性结果的报告，本院采用胶体金法与化学发光法进行鉴别，可避免不必要的医患纠纷。同时，通过对我院1025例HBsAg阳性标本中出现的110 例弱阳性标本进行分析与探讨，查找产生假阳性结果的影响因素，找到行之有效的解决办法；对于真正处于窗口期感染的弱阳性结果及由后带现象影响的弱阳性结果，及时与临床医患沟通，便于对乙型肝炎的诊断与治疗。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择2013年6月至11月在白城中心医院申请检查HBsAg的住院及门诊患者，用真空负压管取被检者清晨空腹静脉血3mL，3000转/分离心10分钟，要求无脂血、溶血标本。在1025例ELISA法检测HBsAg阳性标本中选择110例弱阳性标本，同时进行胶体金法与化学发光法的检测。

1.2 试剂 初检用上海科华公司生产的HBsAg诊断试剂盒（ELISA法）；复检用杭州艾博公司生产的HBsAg检测试剂盒（胶体金法）；最后确诊用美国雅培公司生产的HBsAg诊断试剂盒（化学发光法）。

1.3 仪器 上海科华KHB ST-360酶标仪，美国雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪。

1.4 方法 在ELISA法测定的1025例HBsAg阳性标本中，以吉林省临床检验中心颁发的HBsAg弱阳性质控品（0.2IU/mL）在我室测定的 +2s为标准，选定结果S/CO <5.0的110例弱阳性标本，分别用胶体金法与化学发光法进行鉴别并定量检测HBsAg。所有检测步骤均按仪器及试剂说明书要求操作，标本在用化学发光法检测前均再次用离心机10000转/分离心10分钟后上机，避免体内嗜异性抗体的干扰。

1.5统计学处理 采用SPSS 21.0统计软件。计量数值以均数±标准差（ ）表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

由表1可见，在1025例ELISA法检测的HBsAg阳性标本中，有50例弱阳性标本三种方法均为阳性，其中胶体金法显示为强阳性，用美国雅培i2000全自动化学发光免疫分析仪检测结果均>250IU/mL，将50例弱阳性标本5倍稀释后再次进行ELISA法检测，S/CO比值在23.25±3.56，显示强阳性；有45例弱阳性标本经胶体金法与化学发光法最后鉴别为假阳性；有15例弱阳性标本经化学发光法最后鉴定为真弱阳性，结果为1.63±1.27IU/mL。ELISA法檢测假阳性组与真弱阳性组之间差异无统计学意义（P>0.05），假阳性组与后带效应组、真弱阳性与后带效应组之间存在显著性差异（P<0.05）。此外，假阳性结果在所有阳性标本中占4.39%（45/1025），在弱阳性标本中占40.91%（45/110）；真弱阳性标本在所有阳性标本中占1.46%（15/1025），在弱阳性标本中占13.64%（15/110）；后带效应标本在所有阳性标本中占4.88%（50/1025），在弱阳性标本中占45.45%（50/110）。

3 讨论

ELISA法检测HBsAg出现弱阳性结果实际有三种情况，即后带效应、真弱阳性、假阳性。虽然三种结果中后带效应组与其他两组存在显著性差异（△P<0.05），但假阳性组与真弱阳性组无显著性差异（*P>0.05），因此要对弱阳性结果予以慎重对待。由于抗原抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有抗原抗体浓度比例适当时才出现可见反应，当抗原过剩时称为后带效应，过剩的抗原不能与包被抗体充分结合形成抗原抗体复合物，而是形成小网格复合物，影响显色反应，甚至可出现假阴性[1]。将上述50例后带效应导致的弱阳性标本进行5倍稀释后再次进行ELISA法检验，S/CO比值可达23.25±3.56，用化学发光法检测结果均>250IUmL。后带效应导致的弱阳性结果在所有弱阳性标本中占45.45%，三种方法中，胶体金法能有效避免后带效应，直接报告强阳性，省时、准确、方便。ELISA法受影响因素众多，其中不仅包括标本采集、处理不当；试剂因素；仪器因素；操作因素等，还包括患者本身因某种疾病或其他原因存在嗜异性抗体等影响因素。此次调查是严格按照标准操作规程执行，从检验前质量控制开始，对采集的标本要求新鲜采集、及时分离血清，要求无溶血、脂血标本。操作中注意加样量的准确；试剂的准备；孵育温度及时间的控制；洗涤反应板的方式等；检验后质量控制，我们也严格掌握显色的温度及时间，利用酶标仪判读结果，并认真核对检验标本及结果。尽管如此，仍有45假阳性标本，总结45例假阳性结果产生的原因，发现分别是由洗涤不充分、反应板底部污染、患者体内存在嗜异性抗体等原因导致。在用洗板机洗涤反应板的过程中，如板孔中酶试剂残留，会出现假阳性现象，这与于洋[2]的报道相符合；酶标仪是ELISA试验所必须的仪器，它是对反应孔进行垂直比色，当反应板底部有污染时，容易出现吸光度值升高，导致假阳性的结果[3]；有些患者在患某些疾病（类风湿性关节炎、肝硬化等）过程中，其体内含有一些非特异性抗体成分，这些特殊成分在反应过程中有一定的吸附作用，产生假的显色反应而出现假阳性。由于假阳性标本与真弱阳性标本，分别占弱阳性标本的40.91%与13.64%，两者的鉴别尤为重要，在通过胶体金法判定阴性后，需通过化学发光法对HBsAg进行定量检测做出最后报告。对于15例真弱阳性结果，虽然占所有阳性标本的1.46%，但能提示临床医生及早诊断并治疗。对于所有弱阳性结果均需要与临床及时沟通，必要时在检验报告备注栏中加以解释说明。

4 结论

在实际工作中，我们会遇到HBsAg弱阳性标本，为避免假阳性报告的发出而导致不必要的医患纠纷，我们应谨慎对待。首先我们要加强检验前标本的质量管理，因溶血标本影响检验结果，所以溶血标本要联系相应科室重新采集[4]，对于新生儿因血管脆弱导致的溶血标本，可联系临床医生进行必要的沟通与解释说明，并在检验报告备注中注明。其次，加强检验中的质量管理，严格按照操作规程完成每一步检测，尤其注重洗涤效果与酶标仪判读的监测。最后，对于弱阳性标本要及时用胶体金法或化学发光法进行复查，并加强临床沟通，慎重报告检验结果。后带效应导致的弱阳性结果，在检验报告的备注中，应注明：抗原过剩导致弱阳性。真弱阳性结果，在检验报告的备注中，应注明：结果已经发光法复查，建议定期复查。

参考文献：

[1] 王兰兰，吴健民.临床免疫学与检验[M].4版，北京；人民卫生出版社，2007：19

[2] 于洋，周诚，祁自柏，等.丙型肝炎病毒抗体诊断试剂的质量检测[J].中国生物制品杂志，2003，16（2）：108

[3] 彭明喜.酶联免疫吸附试验检测梅毒抗体假阳性的原因分析[J].现代实用医学杂志，2006，18（2）：127-128.

[4] 龚显恩.探讨标本溶血对酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎表面抗原的影响[J].实用医技杂志，2008，15（14）：1821-1822.