宁夏地区512对复发性自然流产夫妇外周血染色体核型分析

詹福寿，万艳，马一婧，随瑞枝，王国萍，霍正浩

(1宁夏医科大学总医院，银川750004；2中国人民解放军联勤保障部队第九四二医院；3宁夏生殖与遗传重点实验室)

反复自然流产指连续发生3次或以上的流产，国际上多数临床医师将2次或以上的流产称之为复发性自然流产(RSA)。Diejomaoh等[1]指出，约85%的流产发生在早孕期，大约每300个孕妇中就有1例RSA。RSA是妊娠期常见的合并症，其病因极其复杂，其中染色体异常是常见病因之一。本研究对宁夏地区512对RSA夫妇的染色体核型资料进行回顾性分析，探讨RSA患者染色体异常核型的种类及分布特征。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2006年1月～2018年12月在宁夏医科大学总医院医学实验中心遗传室及宁夏生殖与遗传重点实验室进行染色体检查的复发性自然流产夫妇共512对(1 024例)。女性年龄19～42(26.28±4.16)岁，男性年龄21～45(28.16±3.59)岁。患者治疗前均无成功妊娠史，流产次数≥2次，均发生于妊娠20周内。经询问病史和系统检查，排除解剖、内分泌及免疫等因素，均否认近亲结婚。

1.2 外周血淋巴细胞培养、收获、制片和显带 抽取夫妇双方的肘静脉血2～3 mL，肝素抗凝。取抗凝血0.3～0.5 mL接种到培养瓶内。置入37 ℃培养箱内培养66～68 h时加入秋水仙胺，继续培养至72 h。离心，收集培养物，加入0.075 mol/L KCl低渗处理25 min，加入固定液固定30 min或4 ℃过夜。制备细胞悬液，从4 ℃冰箱内取出染色体玻片，每片滴加悬液2～3滴，放入75 ℃烤箱烤片3 h，使玻片老化。将玻片置入胰蛋白酶溶液中消化30～60 s，生理盐水漂洗。加入Giemsa染液染色1～5 min，自来水冲洗、晾干，显微镜下进行染色体核型分析。

1.3 核型分析 核型计数20～30个中期分裂相，异常核型加倍计数，并分析5～10个核型。染色体的异常核型的判定及描述依据人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN)2009的标准。

2 结果

1 024例受试者中，共检出染色体异常36例，异常检出率为3.52%。其中染色体结构异常34例(男13例、女21例)，占94.44%；染色体数目异常2例(均为女性)，占5.56%。在染色体结构异常者中，易位携带32例(包括相互易位26例、罗伯逊易位5例、复杂易位1例)，倒位携带2例。具体见表1。

3 讨论

自然流产是指妊娠不足28周、胎儿体质量不足1 kg而自然终止者。RSA的病因相当复杂，涉及因素较多，包括遗传因素(染色体异常)、生殖系统解剖结构异常、内分泌因素、免疫、感染等。染色体平衡(相互)易位是指两条或两条以上染色体断裂后，断片之间相互交换位置后重接而形成的衍生染色体。包括相互易位、单向易位、罗伯逊易位以及复杂易位等，其中相互易位和罗伯逊易位较为常见。因其携带者无遗传物质数量的增减，故其表型一般无异常，但却是造成不孕不育或不良孕产史的重要原因之一。相互易位携带者理论上可产生18种类型的配子，除一种正常，一种为与携带者相同易位的配子，其余均为遗传物质数量异常的配子。非同源罗伯逊易位携带者理论上可产生6种类型的配子，除一种正常，一种为与携带者相同易位的配子，1/3为增加一条染色体的配子，1/3为减少一条染色体的配子。同源罗伯逊易位携带者理论上产生的配子均为不平衡的配子，因此不能生育正常的后代。杨遵望等[2]报道1例核型为45,XX,rob(21;21)(q10;q10)的同源罗伯逊易位携带者女性自然生育一正常男孩，非常罕见。而涉及3条染色体之间的复杂平衡易位，存在3个断裂点，其生殖细胞在减数分裂的过程中形成至少32种配子，与正常配子结合后，仅一种为完全正常染色体，一种为表型正常的易位携带者，其余均为遗传物质数量异常染色体。

表1 36例RSA夫妇异常染色体检查结果

注：p:染色体短臂；q:染色体长臂；t:易位；rob:罗伯逊易位；inv:倒位；mar:标记染色体。

研究表明，一般人群中染色体异常的发生率为0.13%～0.15%，而RSA患者中3%～5%存在染色体异常[3～5]。本研究结果显示，宁夏地区512对RSA夫妇中，检出染色体异常36例，异常核型检出率为3.52%。与美国生殖医学会报道的3%～5% RSA夫妇存在一方或双方染色体异常的研究[6]结果一致。而Faeza等[7]报道RSA中染色体异常检出率为6%～8%，明显高于宁夏地区的比例。世界各地对RSA的研究报道中，染色体异常检出率的差异较大，为3%～18%，这可能与种族及样本量有关[8]。本研究结果显示，染色体异常以染色体易位多见，32例染色体平衡易位患者中，相互易位26例，罗伯逊易位5例，复杂易位1例，平衡易位发生率为3.13%。平衡易位在普通人群中的发生率为0.195%，时洪娟[9]报道，中国人群染色体平衡易位的发生率为0.47%。由此可见，RSA患者染色体平衡易位的发生率明显高于普通人群。按性别分类，本研究中染色体相互易位者男9例、女17例，罗伯逊易位者男3例、女2例，复杂易位者1例为女性，男性患者较女性少，这与Goud等[10]的研究结果一致。魏莉等[11]报道，女性平衡易位发生率为男性的2倍，核型为性染色体二体型的精子较正常精子活动力弱，畸形率高，较易在受精前即被淘汰，而卵子则无此淘汰机制。同时本研究显示，染色体结构异常占94.44%，染色体数目异常占5.56%，结构异常明显高于数目异常，这与Turki等[12]的研究结果一致。

染色体倒位是指一条染色体上发生两处断裂，两断裂点间片段翻转180后重接而形成新的衍生染色体。倒位携带者是指发生了倒位但遗传物质数量无改变，临床表型正常的个体，但由于基因序列发生改变，可能会产生位置效应。理论上倒位携带者可产生4种不同类型的配子，除了一种正常、一种为倒位，其余1/2为染色体部分缺失或重复的不平衡配子。一般认为倒位片断越小，则其缺失和重复的部分越长，遗传效应就越明显，从而易导致RSA等不良妊娠结局的发生。夏家辉等[13]报道，除了9号染色体臂间倒位外，我国其他染色体倒位的发生率为0.09%。本研究在RSA夫妇中检出染色体倒位携带者2例，分别发生在11号染色体和X染色体上，发生率为0.20%，高于我国普通人群的发生率。因此推测，染色体倒位与宁夏地区RSA存在一定的关联。

标记染色体(sSMC)是指结构异常、通常用传统的染色体显带技术不能明确辨别其来源的染色体，其大小一般不超过20号染色体。sSMC可导致智力障碍、胎儿畸形、RSA及不孕不育等。刘天盛等[14]研究认为，sSMC是造成RSA的原因之一，对于既往有流产史的夫妇，建议做细胞遗传学检查，以明确RSA是否为染色体异常所致。47,XXX综合征又称为超雌综合征，主要临床表现为身高略高于正常女性的平均身高，发育正常，轻度智力障碍，继发性或原发性闭经及不孕等。一般认为，47,XXX综合征大部分生育能力正常，少数患者表现为低生育能力或无生育能力。本研究在512对RSA夫妇中检出47,XX,+mar和47,XXX各1例，提示其可能在宁夏地区RSA的发生中具有一定的遗传学效应。

综上所述，染色体异常是导致RSA的重要因素之一。RSA夫妇应常规进行细胞遗传学检查，如检出染色体有异常，应尽早接受临床遗传咨询以及优生指导；胚胎植入前的基因诊断可有效避免RSA的发生；再次妊娠后应及时进行产前诊断，如检出胎儿染色体有新的异常或为不平衡携带者，应进行选择性引产及时终止妊娠，以减少染色体异常患儿的出生，达到优生优育的目的。