池州地区HPV感染的基因型分布特点和宫颈病变情况分析

唐争翠，李荣，唐争艳

(1.池州市人民医院妇科,安徽 池州 247000；2.西安医学院,陕西 西安 710061)

据统计全球每年宫颈癌新发病例可达50万例，其中我国新发病例为14万例[1]。宫颈癌的病因很明确，人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是导致宫颈癌前病变和宫颈癌的主要病因[2-3]。因此，对HPV感染的早期诊断和早期治疗能有效预防宫颈癌的发生。目前已报道的HPV型别高达200多种，其中40多种均可引发宫颈病变[4]，不同的病毒类型与宫颈癌的发生有一定的相关性，且存在着种族和地区间的差异[5]。本研究将探讨池州地区HPV感染基因型分布特点及与宫颈病变发生的相关性，以提高宫颈癌及宫颈癌前病变的早期筛查效果，为本地的宫颈癌防治提供参考。

1 资料与方法

1.1 资料来源

选取2017年12月至2018年12月池州市人民医院阴道镜专科门诊的683例宫颈病变患者(包括宫颈炎，宫颈鳞状上皮内病变及宫颈癌)作为研究对象，其中HPV感染者558例。所有患者均无HPV疫苗接种史。患者年龄23～85岁，均行阴道镜下定位活检、病理检查。以病理诊断作为宫颈病变诊断的金标准。剔除腺上皮异常患者。本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 检测仪器和试剂 基因扩增仪为新加坡生产的 Gene Amp PCR system 2400型；恒温杂交仪为深圳亚能生物技术有限公司生产的YN-H16 型；高速冷冻离心机为德国生产的 Eppendorf 5810 R型；生物安全柜为江苏省苏州市安泰空气技术有限公司生产的BHC-1300 IIA2 型；青岛海尔有限公司生产的-20 ℃冰箱等。

1.2.2 标本的采集与保存 用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，取出宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，沿刷柄折痕处折断，旋紧洗脱管盖，做好样本标识，并保持洗脱管直立放置。

1.2.3 DNA提取 充分洗脱宫颈刷，并在管壁上挤干。把洗脱液全部转移到液全部转移至 1.5 mL 离心管中，13 000 r /min 离心10 min，离心半径 11 cm。弃去上清液，保留管底细胞沉淀。加入 50 μL 裂解液悬浮沉淀，沸水浴加热10 min。 13 000 r /min 离心10 min，保留上清液待用。参照HPV基因型试剂盒说明书，对DNA提取液扩增出23种 HPV基因型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、6、11、42、43、81、83)的目的片段，再将扩增产物与固定在膜条上的包括17种高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和6种低危型(6、11、42、43、81、83)在内的分型探针进行杂交，依据杂交信号的有无来判断是否有这些HPV基因型的感染。

1.3 阴道镜检查与病理诊断

所有进入研究的患者使用深圳理邦公司的EDAN C6型电子阴道镜，由经验丰富的阴道镜专科医生实施阴道镜下的宫颈可疑病灶多点活检或颈管搔刮术，送至病理室制成石蜡的切片，组织切片用苏木精-伊红染色，由两名专门的病理科医生进行阅片，作出病理诊断。组织病理具体诊断结果分别是慢性宫颈炎 、宫颈低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)[6]及宫颈癌。

1.4 统计学分析

相关数据采用EpiData3.0软件双份录入并仔细核查，运用SPSS 20.0统计软件研究数据。[n(%)]表示计数资料，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV分型检测结果

纳入研究的683例患者，其中有558例存在HPV感染。HPV感染出现频数最高的基因型为：HPV16型，共182次，占22.7%，其次为HPV 52型，共151次，占18.9%，HPV 58型，共79次，占9.7%，HPV 18型，共63次，占7.9%，HPV 33型，共39次，占4.9%，HPV 53型，共35次，占4.4%。HPV感染出现频数最低的基因型为HPV83型，为0次，其次为HPV73型，1次，占0.1%。见表1。

表1 HPV感染的型别分布情况[n(%)]

注：由于存在双重或多重感染，1个病例可多次计算。

2.2 不同病理诊断结果HPV分型结果分析

(1)宫颈炎症中感染频数最高的基因型为HPV16型，共50次，占22.1%，其次为HPV52型，共38次，占16.8%，HPV18型，共29次，占12.8%。(2)LSIL中感染频数最高的基因型为HPV52型，共73次，占21.2%；其次为HPV16型，共53次，占15.4%，HPV18型，共31次，占9.0%；HPV58型，共29次，占8.4%；HPV33型，共21次，占6.1%。(3)HSIL中感染频数最高的基因型为HPV16型，共58次，占29.9%；其次为HPV52型，共36次，占18.6%；HPV58型，共34次，占17.5%。(4)癌阳性中感染频数最高的基因型为HPV16型，共21次，占58.3%；其次为HPV52型，共4次，占11.1%；HPV18 型，共3次，占8.3%；HPV58型，共2次，占5.6%；HPV81型，共2次，占5.6%。见图1。

2.3 HPV单一型别感染与多重型别感染在不同宫颈病变中的分布情况

在558例宫颈病变中单一感染共338例，占60.6%，多重感染共220例，占39.4%。进一步用χ2检验分析结果显示：各类宫颈病变的单一感染和多重感染的构成比的差异无统计学意义(χ2=6.554，P=0.088)，说明宫颈病变的类型与感染HPV的种类的多少无关。

表2HPV单一型别感染与多重型别感染在不同宫颈病变中的分布[n(%)]

宫颈病变类型单一感染多重感染二重三重四重五重以上合计慢性宫颈炎101(64.3)49(31.2)3(1.9)3(1.9)1(0.6)157(100)LSIL147(60.0)85(34.7)10(4.1)2(0.8)1(0.4)245(100)HSIL66(53.2)48(38.7)6(4.8)2(1.6)2(1.6)124(100)宫颈癌24(75.0)5(15.6)2(6.3)0(0.0)1(3.1)32(100)合计338(60.6)187(33.5)21(3.8)7(1.3)5(0.9)558(100)

2.4 不同宫颈病变的年龄分布情况

用Spearman秩相关分析结果显示，年龄和宫颈病变的程度有相关性(r=0.091，P=0.018)。由表3得出，每种宫颈病变的年龄分布均呈倒“U”型，即各类宫颈病变患者中，年龄在41～50岁所占的比重最大，年龄越大或越小的患者所占的比重逐渐减少。由图2看出，各个年龄段的患者其宫颈病变的类型的分布存在差异，≤30岁的患者，慢性宫颈炎所占的比重最大，31～60岁的患者中，LSIL所占的比重最大，>60岁的患者中，HSIL所占比重最大。

表3 683例不同宫颈病变患者的年龄分布[n(%)]

3 讨论

HPV是导致宫颈鳞状细胞癌发生发展的必要因素[7-8]。根据致病力的不同，HPV分为低危型及高危型。岑尧等[9]分析结果显示HPV的型别分布在我国也存在一定地区性,全国范围内6位常见高危HPV分布依次为HPV16 、HPV52 、HPV58 、HPV33、HPV18、HPV31。 HPV16型是我国最为常见的感染型别，且在南北方地区、少数民族地区和其他省市以及不同人群中均位居所有型别的第1位。

本研究中常见的高危型HPV感染型别检出频率前5位分别为：HPV16(22.7%)、52(18.9%)、58(9.7%)、18(7.9%)、33(4.9%)，与上述研究结论基本相符。从不同宫颈病变类型可看出，本地区LSIL中感染频数最高的基因型为HPV52型、其次为HPV16型、HPV18型、HPV58型及HPV33型。HSIL中感染频数最高的基因型为HPV16型，其次为HPV52型、HPV58型、HPV33及HPV31。宫颈癌中感染频数最高的基因型为HPV16型，其次为HPV52型、HPV18 型、HPV58型及HPV81型。HPV16位居LSIL和HSIL首位，其次为HPV52型、HPV18型及HPV58型，此研究结果与万启军等[10]研究结果一致，提示除HPV16型外，HPV52、58、33、31型是我国南方女性宫颈癌前病变者HPV感染比较常见的类型，与HPV16及18一样，均应引起妇科门诊医生的重视，也应纳入转诊阴道镜检查的指征，作为密切随访的对象。

HPV型别较多，机体可以单一型别感染，也有同时感染多个型别。关于多重型别感染能不能引起宫颈病变发展，目前观点尚不一致。有部分学者认为HPV多重型别感染容易引发宫颈病变[11]。而季春燕[12]研究显示，HPV感染型别数和宫颈病变级别没有相关性认为本研究结果提示，宫颈病变的类型与感染HPV的种类的多少无关。本研究结果和第二种观点较为一致，在HPV阳性不同程度的宫颈病变中，单一型别感染占比会伴随宫颈病变严重程度增加而上升。

我国宫颈癌的高发年龄段为40～60岁，其发病高峰为50～54岁[13]。本研究结果显示，LSIL峰值为41～50岁，HSIL峰值为31～40岁和41～50岁。不论LSIL还是HSIL，其发病高峰年龄段均小于宫颈鳞状细胞癌的高峰年龄，符合宫颈癌前病变发展为宫颈鳞状细胞癌年龄进程。此结果提示临床妇产科医生尤其要重视41～50岁年龄段且感染HPV16、52、58、18和33型宫颈癌前病变的诊断和治疗。

综上所述，池州地区的宫颈病变严重程度与HPV感染密切相关，临床妇产科医师应该即要重视HPV16和18型感染[14],也要兼顾本地区较为常见的HPV52、58、33型感染,尤其41～50岁女性，以此作为阴道镜转诊指标，如阴道镜检查正常,也要做好跟踪和随访工作，及时干预治疗，以预防宫颈癌的发生。