经典名方华盖散中橙皮苷含量测定方法

但宇超，曾琪，马安献，张惠芹，季宗念，严启新

（海王百草堂药业有限公司，河南濮阳 457000）

中药是我国传统中医药的重要组成部分，是临床防病治病的最主要物质手段。目前，中药质量标准的不完善是阻碍中药产业走向现代化与国际化的障碍。因此提高中药质量控制标准必须从各个环节入手，才能确保中药质量一致和临床疗效稳定。采用现代分析技术和科学方法全面控制中药的质量，是当代中药研究的方向。

华盖散是主治风寒哮喘的要方，来源是《圣济总录》卷五十。由橘皮（陈皮）、麻黄、紫苏子、杏仁、桑白皮、茯苓、甘草组成，功能是宣肺化痰、和中平喘，主治气喘咳嗽。华盖散的主要有效成分有橙皮苷，本实验建立了华盖散中有效成分橙皮苷的含量测定方法，为华盖散制剂的质量控制提供了实验依据。

1 实验材料

1.1 仪器与试药

1260infinityⅡ安捷伦高效液相色谱仪（openlabcds色谱工作站）、Inetsil-ODS C18色谱柱（4.6mm×250mm，5.0μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶；安捷伦公司）、METLERTOLED分析天平（十万分之一）、超声清洗仪。

1.2 试剂

对照品：橙皮苷（批号20170411）来源中国食品药品检定研究院，纯度均大于98%；甲醇和乙腈为色谱纯（GR），水为怡宝纯净水，其余均为分析纯（AR）。

2 检测方法的建立

2.1 标准溶液的制备

精密称取各对照品适量，加50%甲醇制成混合对照品溶液，质量浓度为25.00 μg/mL。

2.2 供试品溶液的制备

取提取物粉末约1g，精密称定，精密加入50%乙醇溶液50mL，称量，超声（功率250W，频率40kHz）提取30min，放冷，再次称量，用50%乙醇溶液补足减失的量，摇匀，滤过，取滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3 色谱条件

采用 inetsil-ods C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，柱温25℃，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱设置见表1，流速1mL/min，洗脱时间60min，检测波长220nm，进样量10μL。

表1 梯度洗脱设置

2.4 精密度考察

精密吸取同一份华盖散供试品溶液10μL连续进样6次，以橙皮苷为参照峰，计算保留时间RSD和相对峰面积RSD均小于1%，相似度均大于0.99，表明该方法重复性良好。见表2、3。

表2 橙皮苷日内精密度

表3 橙皮苷日间精密度

2.5 重复性考察

取同一个批次华盖散样品6份，按照2供试品溶液制备方法制备华盖散供试品溶液，每份3个平行，按照2.3中色谱条件分别进样，记录峰面积，其RSD范围在0.11%～0.13%，表明方法重复性良好，见表4。

表4 重现性考察

2.6 稳定性考察

精密吸取同一份供试品溶液，按3中色谱条件，分别在0、1、2、4、8、12、24、48 h和72h进样10μL，记录色谱图，以橙皮苷为参照峰，计算保留时间RSD和相对峰面积RSD均小于1%，相似度均大于0.99，表明供试品溶液72h内稳定，见表5。

表5 稳定性考察

2.7 华盖散中主要成分橙皮苷的含量测定

2.7.1 系统适应性试验

混合对照品和提取物供试品溶液按照2.3中色谱条件分析，分离度均大于1.5，理论塔板数大于5000，色谱图如图1、图2所示。

图1 混合对照色谱图

图2 供试品溶液色谱图

2.7.2 线性范围考察

将以上配制的混合对照品，稀释成系列不同梯度浓度的对照品溶液，按照2.3中色谱条件依次注入液相色谱仪测定峰面积，以峰面积和浓度进行线性回归。结果见表6。

表6 橙皮苷浓度与峰面积线性表

回归方程为y=24.341x+0.0231，R2=1.000，大于0.999，符合要求。

2.7.3 回收率试验

取重复性试验同批样品，分别按照近似0.8∶1、1∶1、1.2∶1添加橙皮苷对照品，加入样品中，按照2.2进行样品制备，按照2.3中色谱条件进行分析测定，计算平均回收率为99.8%～100.1%，RSD在1.23%～2.02%，表明方法回收率良好，见表7。

表7 橙皮苷回收率

2.7.4 检测限和定量限

橙皮苷的检测限为0.004732μg/mL，定量限为0.01734μg/mL。

2.7.5 样品含量测定

精密吸取2.2中供试品溶液，按2.3中色谱条件进行测定，得到橙皮苷化合物峰面积，以外标法计算含量，结果见表8。

表8 测定结果

3 结论

该方法对华盖散中橙皮苷含量测定的精密度、稳定性和回收率均达标。符合方法学验证的要求，可以用于华盖散散剂的质量控制试验方法。