应用HPLC法同时测定15批次化妆品中氯二甲酚等5种限用防腐剂

2019-09-04漆爱明肖树雄

生物化工 2019年4期

关键词：甲酚氯己定蜡质

漆爱明,肖树雄

（广东省药品检验所，广东广州 510300）

在化妆品的生产、使用和保存过程中，为免受致病性和非致病性微生物污染，化妆品生产企业会添加各类防腐剂，这不仅可以延长保质期和货架期，还能确保产品的安全性。但研究表明化妆品会引起过敏性和接触性皮炎[1-2]等一系列副作用，甚至致癌[3-5]。

为加强对化妆品的卫生监督和日常管理，有必要开展化妆品中防腐剂含量检测方法的开发研究，本文采用高效液相色谱法建立了对化妆品中5种防腐剂的快速测定方法，用本方法检测了非蜡质和蜡质类两类化妆品的15批次产品。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪配二极管阵列检测器、Mettler Toledo XS205 和 Sartorius CPA224S 电子天平、KQ-300DE型数控超声波清洗器、PB-10 pH计、LG10-2.4A离心机、涡流振荡器（美国IFA公司）。

p-氯 -m-甲酚（Acros Organics，Product of ：BE，109480050）、苄氯酚（东京化成工业株式会社，C0161）、氯己定（Dr.Ehrenstorfer GmbH，C 11310000）、o-苯基苯酚（Dr.Ehrenstorfer GmbH，C 16070000）、氯二甲酚（东京化成工业株式会社，C0161）标准品（纯度均大于96%）；甲醇和四氢呋喃（色谱纯，德国Merck公司），实验用水为一级水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Kromasil 100-5 C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；醇（2.1）+0.025 mol/L 磷酸二氢钠水溶液（用磷酸调节pH至3.8），梯度洗脱。

1.3 5种防腐剂标准物质的线性范围、回归方程及相关系数

用甲醇（色谱纯）作溶剂，称取适量的各物质标准品置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成5种防腐剂原混合标准储备液，将原混合标准储备液逐级稀释，分别进样测定，线性范围，线性方程见表1。

表1 种防腐剂的线性范围、线性相关系数

1.4 样品来源及处理

样品是在各大超市购买的随机15种样品，15种样品按种类分为非蜡质（液体类、粉类、膏霜类）和蜡质类，按不同类型分类统计分析。

1.4.1 不含蜡质的化妆品

不含蜡质的化妆品包括护肤类、香波、粉等。准确称取试样约 0.4 g（精确至 1mg），置 10 mL 具塞比色管中，加甲醇（色谱纯）约5 mL，在漩涡混匀器上振荡1 min，加入饱和氯化钠溶液2 mL，用甲醇（色谱纯）稀释至 10 mL，混匀，超声提取 15 min，再以 8 000 r/min离心 15 min，过 0.45 μm 滤膜，待测。

1.4.2 含蜡质的化妆品

含蜡质的化妆品包括唇膏、口红等。准确称取试样约 0.4 g（精确至 1mg），置 10 mL 具塞比色管中，加四氢呋喃（色谱纯）1 mL，在漩涡混匀器上振荡1 min，加饱和氯化钠溶液1 mL，用甲醇（色谱纯）稀释至10 mL，混匀，超声提取 15 min，再以 8 000 r/min 离心 15 min，经过0.45 μm滤膜，待测。若提取液经0.45 μm滤膜过滤后滤液浑浊，则先将提取液用滤纸过滤后再经0.45 μm滤膜过滤。

2 结果与讨论

2.1 提取溶剂的选择

化妆品基质复杂，尤其是唇膏和口红化妆品采用低极性有机溶剂（如乙醚、正己烷等）提取时，样品极难溶解甚至不溶；采用较强极性（甲醇、乙醇、四氢呋喃等）提取时，甲醇和乙醇分别作为提取试剂溶提取效果相当，但样品上机后用甲醇作为提取剂的峰形比乙醇作为提取剂的峰形更尖锐，灵敏度更高。用四氢呋喃作为提取剂的效果和峰形都很好，尤其对甲醇难容的含蜡质的膏霜样品效果显现，但四氢呋喃对仪器管路的侵蚀比较厉害，综合考虑以上情况，最终采取不含蜡质的化妆品如护肤类、香波、粉等用甲醇提取；含蜡质的化妆品如唇膏、口红等先加1 mL四氢呋喃（色谱纯）溶解样品，再用甲醇定容萃取。

2.2 色谱柱的选择

分析p-氯-m-甲酚、苄氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚5种物质的本身性质，同时考察了 RP-AMIDE C16、资生堂 CAPCELL PAK C8 和Kromasil 100-5 C18三条柱子的柱效和耐酸碱度，Kromasil柱效及峰形对称性好，化学稳定性好，耐酸在 pH 1.5 ～ 9.5，最终选择 Kromasil 100-5 C18 作为使用柱。

2.3 检出限及定量限

将标准曲线的下限浓度逐级稀释进样分析检测，p-氯-m-甲酚检出信噪比为3∶1时，p-氯-m-甲酚的检出限浓度为0.188mg/L；苄氯酚检出信噪比为3∶1时，苄氯酚的检出限浓度为0.084mg/L；氯己定检出信噪比为3∶1时，氯己定的检出限浓度为0.327mg/L；o-苯基苯酚检出信噪比为3∶1时，o-苯基苯酚的检出限浓度为0.147mg/L；氯二甲酚检出信噪比为3∶1时，氯二甲酚的检出限浓度为0.196mg/L。p-氯-m-甲酚、苄氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚检出信噪比10∶1时为定量下限，定量下限浓度分别为0.564mg/L、0.252 mg/L、0.981mg/L、0.441mg/L、0.441mg/L、0.588mg/L。检出限，定量下限的进样体积分别为10μL，检出限，定量下限的计算结果见表2。以样品称样量为0.4 g，稀释10倍计算本方法的检出浓度与最低定量浓度，结果见表2。

2.4 实验的精密度的考察

分别平行测定高浓度（标准系列溶液4的浓度）6次作为本实验的精密度，本方法高浓度对应的组分精密度都很好，相对偏差在0.4～1.1%，结果见表3。

2.5 加标回收实验和实验的重复性考察

加入量为高浓度(混合标准系列溶液浓度4)时，5种成分的回收率范围为103.7%～113.7%，相对标准偏差为0.5%～2.5%。加入量为低浓度(混合标准系列溶液浓度2)时，5种成分的回收率范围为108.7%～119.8%，相对标准偏差为0.9%～3.4%，结果见表4。

表2 五种成分液相测定的检出限、定量限、检出浓度、定量浓度

表3 5种限用防腐剂高浓度精密度(n=6)

表4 2种基质(非蜡状和蜡质类)的加标回收率及重复性(n=6)

2.6 实际样品的检测

应用所建立的方法，对实际样品进行了分析，样品 1#、3#、4#、9#、10#、11#、12#、13#、14#、15#、16#均未检出氯己定、苄氯酚、o-苯基苯酚、氯二甲酚和p-氯-m-甲酚。5#检出有氯二甲酚、6#检出o-苯基苯酚、7#检出氯己定、8#检出氯二甲酚，其它组分5#、6#、7#、8#均未检出，结果如表5所示。