基于液相色谱-质谱技术分析木蝴蝶中化学成分

陈丽娜，杨明，时东方，刘春明

（长春师范大学 中心实验室，吉林长春 130032）

木蝴蝶，又名千层纸、玉蝴蝶、破故纸等，是一种重要的中药材，对咽痛喉痹、声音嘶哑、咳嗽、肝胃气痛、浸淫疮等症状有显著疗效[1-2]。木蝴蝶化学成分以黄酮及其苷类为主，此外还有挥发油、对羟基苯乙醇和环己醇类、紫碱类、有机酸类化合物等，而黄酮类是其主要活性成分[3-5]。据报道，木蝴蝶的黄酮类成分具有抗炎、抗氧化、降糖、抑制病毒及肿瘤生长等药理作用[6]。

木蝴蝶中黄酮种类繁多，准确快速地鉴定其结构对于监控木蝴蝶的质量具有重要意义。本研究对木蝴蝶甲醇提取物中化学成分进行研究，根据相对分子质量、分子碎片峰、紫外吸收光谱等参数，分析了木蝴蝶中已发现和可能存在的化学成分，建立了木蝴蝶中化学成分快速鉴定方法，为其质量评价方法提供依据。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（2695，Waters，美国）、高效液相色谱-线性离子阱质谱联用仪（LTQ-Fleet，Thermo Fisher，美国）、超声清洗仪（BS-250E，中国昆山超声仪器有限公司）、超纯水仪（Microcon YM-100，Millipore，美国）。

木蝴蝶药材（购自长春中东大药房）、甲醇（分析纯，北京化工厂）、乙腈（色谱纯，Fisher，美国）、实验用水为经Milli-Q超纯水系统处理后的超纯水。

1.2 样品提取

将干燥的木蝴蝶种子粉碎，精密称取1 g粉末，加入 25 mL 甲醇超声提取 10 min，于 4000r/min 下离心5 min，将上清液转移到50mL容量瓶中，残渣在相同条件下提取一次，合并提取液，用甲醇定容。取1mL该溶液过0.45 μm滤膜，待测。

1.3 液相色谱条件

色谱柱为 Waters SunFire C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），柱温：40 ℃，流动相A为乙腈，流动相B为纯水，流速为0.5 mL/min，色谱洗脱梯度见表1，进样量为10μL，检测波长为360 nm。

表1 色谱洗脱梯度

1.4 质谱条件

质谱分析采用电喷雾电离源（ESI），喷雾电压为4.5kV，负离子检测模式，扫描范围为m/z100～1000，鞘气为氮气，流速为20 bar，毛细管温度为250℃，毛细管电压为20V。

2 结果与讨论

2.1 液相色谱条件的优化

以超纯水作为水相，分别考察乙腈和甲醇作为有机相的分离效果。发现甲醇和水为流动相时可以达到基线分离，但是色谱峰形较差，并且洗脱时间较长，所以采用乙腈作为有机相。进一步优化洗脱梯度，最终实现了各化合物的有效分离。木蝴蝶提取物的总离子流图见图1。

图1 木蝴蝶提取液的LC-ESI-MS负离子模式总离子流图

2.2 HPLC-DAD-ESI-MS分析木蝴蝶甲醇提取物

化合物的保留时间及质谱信息等见表2，紫外吸收光谱图见图2、3。在实验条件下，共从木蝴蝶甲醇提取物中分离得到10个化学成分，总离子流图见图1，可以看见10个化学成分都获得了基线分离。化合物1的保留时间为4.69 min，特征离子为593，通过查阅文献证明该化合物为木蝴蝶苷b。光谱实验表明该化合物有2个紫外吸收波长，分别为215 nm和273 nm，与其化合物的特征吸收一致，进一步证明了这一推论。按照同样的方式，确认化合物3、4、6、7、8、9、10分别为2α，3β-二羟基羽扇豆醇、黄芩苷、腺苷、白杨素-7-葡萄糖酸苷、黄芩苷元、羽扇豆醇、白杨黄素。

图2 2种化学成分的紫外吸收光谱图

图3 6种化学成分的紫外吸收光谱图

表2 木蝴蝶中鉴定化合物的LC-MSn信息

3 结论

本研究以HPLC-DAD-ESI-MSn技术作为研究手段，探讨了木蝴蝶甲醇提取物主要化学成分的分析方法。该方法采用高效液相色谱法对混合化合物进行分离，采用DAD检测器和电喷雾质谱法对目标成分进行结构确认，通过将所得到的光谱图和质谱数据与文献进行对照，确定了8种化合物的结构，分别为木蝴蝶苷b、2α，3β-二羟基羽扇豆醇、黄芩苷、腺苷、白杨素-7-葡萄糖酸苷、黄芩苷元、羽扇豆醇、白杨黄素。